HPLC法同时测定维C银翘片中对乙酰氨基酚、马来酸氯苯 那敏、维生素C的含量

覃配芬+韦金燕

摘 要：目的 建立HPLC法同时测定维C银翘片中对乙酰氨基酚、马来酸氯苯那敏、维生素C含量。方法 采用Hypersil NH2（4.6 mm×200 mm，5 μm）色谱柱，以乙腈-0.01 mol/L磷酸二氢钾（用磷酸调pH至2.2）为流动相，柱温30℃，波长246 nm。结果 对乙酰氨基酚、马来酸氯苯那敏、维生素C线性范围分别为0.16～1.60μg（r=0.9996）、0.08～0.80μg（r=0.9999）、0.04～0.4 μg（r=0.9991）；加样平均回收率（n=6）分别为98.7%、98.1%和98.7%，RSD分别为0.4%、1.5%和1.1%。结论 此方法简便、快速、准确。

关键词：维C银翘片 对乙酰氨基酚 马来酸氯苯那敏 维生素C HPLC

中图分类号：R284.1 文献标识码：A 文章编号：1672-3791（2017）07（b）-0253-03

维C银翘片为2015年版中国药典收载的药品，由山银花、连翘、荆芥、牛蒡子、马来酸氯苯那敏、对乙酰氨基酚和维生素C等13味组成，质量标准采用HPLC分别测定绿原酸、牛蒡苷、对乙酰氨基酚、马来酸氯苯那敏和维生素C五个成分。该文拟建立HPLC同时测定对乙酰氨基酚、马来酸氯苯那敏和维生素C三个成分含量，可为维C银翘片的生产控制和质量标准提高提供实验依据。

1 仪器与试药

1.1 仪器

依利特P200Ⅱ高效液相色谱仪（大连依利特分析仪器有限公司）；BP211D型电子天平（赛多利斯科学仪器有限公司）；SG3300HD型超声波清洗器（上海冠特超声仪器有限公司）。

1.2 试药

对照品：对乙酰氨基酚（批号：100018-200408）、马来酸氯苯那敏（批号：10047-9904）、维生素C（批号：100425-201504）。对照品物质均购自中国食品药品检定研究院。

试剂：乙腈为色谱纯，水为娃哈哈纯净水，其他试剂均为分析纯。

药品：维C银翘片制剂，取自广西纯正堂制药有限公司和广西花红药业股份有限公司。

2 方法与结果

2.1 溶液的制备

2.1.1 混合对照品溶液

精密称取对乙酰氨基酚、马来酸氯苯那敏和维生素C对照品适量，加0.5%焦亚硫酸氢钠溶液（用磷酸调节pH值至2.2）制成含对乙酰氨基酚80 μg/mL、马来酸氯苯那敏40 μg/mL和维生素C20 μg/mL的混合溶液，即得。

2.1.2 供试品溶液

取本品20片，除去包衣，精密称定，研细，取细粉0.1 g，置50 mL量瓶中，加0.5%焦亚硫酸氢钠溶液（用磷酸调节pH值至2.2）稀释至刻度，超声处理10 min（功率300 W，频率40 kHz），摇匀，滤过，精密吸取滤液1 mL，置10 mL量瓶中，加0.5%焦亚硫酸氢钠溶液（用磷酸调节pH值至2.2）稀释至刻度，摇匀，过0.45μm微孔滤膜，备用。

2.1.3 阴性样品溶液

取维C银翘片中药干膏提取物（不含对乙酰氨基酚、马来酸氯苯那敏和维生素C），按“2.1.2”项下方法制备。

2.2 色谱条件

色谱柱：Hypersil NH2（4.6 mm×200 mm，5 μm）；流动相：乙腈-0.01 mol/L磷酸二氢钾（用磷酸调节pH至2.2）（70∶30）；检测波长：246 nm；进样量：10 μL。

2.3 含量测定方法学考察

2.3.1 线性关系考察

分别精密吸取“2.1.2”项下混合对照品溶液2、4、8、10、15、20μL进行测定，以峰面积（Y）为纵坐标，进样量（X，μg）为横坐标，绘制标准曲线，各成分的回归方程、线性范围见表1。

2.3.2 专属性试验

分别精密吸取阴性样品溶液、混合对照品溶液和供试品溶液各10 μL，进样测定，对照品及供试品中对乙酰氨基酚、马来酸氯苯那敏和维生素C的色谱峰分离良好，阴性样品中指标成分在相应保留时间处均无吸收峰，表明方法专属性良好，见图1～图3。

2.3.3 精密度试验

精密吸取同一混合对照品溶液，按“2.2”项下色谱条件连续进样6次进行测定，测得对乙酰氨基酚、马来酸氯苯那敏和维生素C峰面积的RSD分别为0.4%、0.6%和0.9%，表明仪器精密度良好。

2.3.4 稳定性试验

精密吸取同一供试品溶液，分别于配制后的0、2、4、8、10、12 h按“2.2”项下色谱条件进行测定，测得对乙酰氨基酚、马来酸氯苯那敏和维生素C峰面积的RSD分别为0.6%、1.1%和1.6%，表明供试品溶液在12 h内稳定。

2.3.5 重复性试验

取维C银翘片样品，研细，取6份，每份0.1 g，精密称定，分别按“2.1.2”项下方法制备供试品溶液，按“2.2”项下色谱条件进样测定，测得对乙酰氨基酚、马来酸氯苯那敏和维生素C的平均标示量百分含量分别为99.8%、99.7%和95.7%，其RSD分别为1.2%、1.6%和2.1%，表明该方法重复性良好。

2.3.6 加样回收率试验

精密称取已知含量的维C银翘片样品6份，每份0.1 g，精密称定，置50 mL量瓶中，分别精密加入含有混合对照的0.5 %焦亚硫酸氢钠溶液（用磷酸调节pH值至2.2）（对乙酰氨基酚3.5 mg/mL、马来酸氯苯那敏0.035 mg/mL和维生素C1.5 mg/mL）10 mL，按“2.1.2”项下方法制备加样供试品溶液，按“2.2”项下色谱条件下进行测定，计算回收率及RSD，对乙酰氨基酚、马来酸氯苯那敏和维生素C的加样平均回收率（n=6）分别为98.7%、98.1%和98.7%，RSD分别为0.4%、1.5%和1.1%。

2.4 供试品测定

取5批维C银翘片样品，3批来自广西花红药业股份有限公司（编号：170101、170102、170103）；2批来自广西纯正堂制药有限公司（170s301、170302），按“2.1.2”项下方法制备供试品溶液，按“2.2”项下色谱条件进行测定，以外标法计算标示百分含量，结果见表2。

3 讨论

文献多采用C18柱反相色谱测定[1，2]，该文采用NH2柱正相色谱分析，溶剂分别采用甲醇和0.5%焦亚硫酸氢钠溶液（磷酸调pH4、pH3、pH2.2）对比分析，甲醇为溶剂，维生素C不稳定，峰形差，对乙酰氨基酚、马来酸氯苯那敏峰拖尾。不同pH值的0.5%焦亚硫酸氢钠溶液对上述三成分的色谱分析有明显影响，pH2.2时对乙酰氨基酚与马来酸氯苯那敏峰形最佳，维生素C严重拖尾现象得到改善。结果表明，此方法干扰少，具有专属性、稳定性高、重现性好，操作简便，可作为控制本品质量的手段之一。

參考文献

[1] 高光伟，冯向东，黄海欣.HPLC同时测定维C银翘片中绿原酸、对乙酰氨基酚、维生素C、马来酸氯苯那敏的含量[J].中成药，2008，30（2）：207-210.

[2] 陈雯，于玲，周伟，等.HPLC同时测定复方银翘氨敏胶囊中对乙酰氨基酚与维生素C的含量[J].中国药事，2010，24（9）：898-900.