食品中诺如病毒的检测

高光普

国家对诺如病毒的检测制定了详细的标准，名为GB 4789.42-2016《食品安全国家标准 食品微生物学检验 诺如病毒检验》。GB 4789.42-2016标准规定了食品中诺如病毒的实时荧光RT-PCR检测方法。

近年来，国内外多个地区都爆发过诺如病毒感染事件。据统计，1998～2015年，美国诺如病毒爆发事件共计19000多起，受感染的人数高达37万；我国自2017年春季以来也爆发了多起诺如病毒感染事件。那么诺如病毒到底是什么？针对食品中的诺如病毒，我国是否有与之相对应的标准法规？如何对诺如病毒进行检验检测？带着这些问题，本刊记者采访了北京良润生物科技有限公司（以下简称“良润生物”）总经理刘磊先生，请他就诺如病毒的相关问题进行了解答。

记者：近年来，诺如病毒感染事件频发对人民的生命财产安全造成了巨大损失，那么诺如病毒到底是什么？目前在全世界范围内的感染情况是怎样的？

刘磊：诺如病毒（Norovirus，NoV）又称诺瓦克病毒，是一组形态类似、抗原略有不同的病毒颗粒。可感染人和动物并引起急性肠胃炎、冬季呕吐性疾病、胃肠性流感等病症，主要临床表现为头痛、发热、恶心、腹痛腹泻等，是非细菌性胃肠炎的主要病原体之一。诺如病毒是一种单链RNA病毒，主要分为6个基因型（GI-GVI），其中常见的世界性流行诺如病毒基因型主要分为GI和GII。

由诺如病毒引起的感染性腹泻在全世界范围内均有流行，全年均可引发感染，感染对象主要是抵抗力弱的成人和学龄儿童，且寒冷季节呈高发趋势。在美国每年所有的非细菌性腹泻暴发中，60%～90%由诺如病毒引起，荷兰、英国、日本、澳大利亚等国家也都有类似情况发生。在中国5岁以下的腹泻儿童中，诺如病毒检出率为15%左右，通过血清抗体水平调查表明中国人群中诺如病毒的感染亦十分普遍。

记者：对于诺如病毒的检测，我国是否有着相应的标准法规？

刘磊：我国政府十分重视食品安全问题，对于诺如病毒的检测也制定了非常详细的标准，名为GB 4789.42-2016《食品安全国家标准 食品微生物学检验 诺如病毒检验》。GB 4789.42-2016标准规定了食品中诺如病毒的实时荧光RT-PCR检测方法，此标准适用于贝类、生食蔬菜、胡萝卜、瓜、坚果等硬质表面食品，草莓、西红柿、葡萄等软质水果等食品中诺如病毒核酸的检测。

GB 4789.42-2016中对检测诺如病毒所需要的材料有着详细限定，分别包括实时荧光PCR仪、低温冰箱、微量移液器、网状过滤袋、无菌棉拭子、无菌剪刀、无菌钳子、pH计或pH试纸、无菌刀片或等效均质器、离心机。而关于试剂，GB 4789.42-2016中还注明，除有特殊说明外，所有实验用试剂均为分析纯，实验用水均为无RNase超纯水。

对于检测程序的要求，GB 4789.42-2016以图表的形式清晰的展现了出来（见图1）。

GB 4789.42-2016中对软质水果或生食蔬菜、硬质食品表面、贝类3种不同的的样品分别制定了不同的操作步骤。

记者：针对食品中诺如病毒的检测，良润生物有着怎样的解决方案？

刘磊：针对诺如病毒的检测，良润生物从RNA提取、过程控制到检测及定量都有配套的产品，可以实现样品中诺如病毒的快速检测，并符合标准要求。

良润生物的诺如病毒解决方案包括：病毒RNA提取试剂盒、MS2过程控制试剂盒（RT-PCR探针法）、诺如病毒核酸（GⅠ/GⅡ）检测试剂盒（RT-PCR探针法）、诺如病毒标准系列（GI/GII）定量试剂盒等。

记者：诺如病毒检测的过程控制需要对照病毒，良润生物推出的MS2过程控制试剂盒具有哪些优势呢？

刘磊：诺如病毒检测對过程控制所需对照病毒要求易于体外培养，与诺如病毒具有相似的理化特性，并且与诺如病毒基因组组成不同，不会发生交叉反应，另外还要求是单股正链RNA病毒，而且在自然状态下不会污染食品。目前常用的有门果病毒、MS2噬菌体。过程控制选用MS2噬菌体的优势：

① 国际通用—欧盟、美国等地区和国家；

② 结构和病毒相似，性质类似，更准确的标定；

③ 与其他病毒RNA无交叉；

④ 食品中不含有该噬菌体，无背景；

⑤ 可以实现细胞外扩增，实现精准定量；

⑥ 可同时标定回收率和扩增效率。

良润生物简介

北京良润生物科技有限公司作为国家高新技术企业，专注于食品中微生物、致病菌、病毒、细菌毒素等快速检测的研究，相继建立了即用培养技术平台、免疫技术平台、分子技术平台及快速前处理技术平台，产品涵盖微生物测试片、致病菌胶体金快速检测卡、致病菌快速增菌培养基、致病菌快速检测组合、免疫磁珠快速测试盒、荧光定量PCR试剂盒等。在此基础上，为用户提供更合适的食品安全检测解决方案。