术后化疗联合榄香烯与单纯手术治疗对食管癌的干预效果及其与患者外周血淋巴细胞cyclinD1、p16的表达水平变化的关联分析

刘 剑 吉浩明 刘春桂 张 燕



术后化疗联合榄香烯与单纯手术治疗对食管癌的干预效果及其与患者外周血淋巴细胞cyclinD1、p16的表达水平变化的关联分析

刘 剑 吉浩明 刘春桂 张 燕

目的 探讨化疗联合榄香烯与单纯手术治疗对食管癌的干预效果及其与患者外周血淋巴细胞cyclinD1、p16表达水平变化的关联。方法 本研究选取食管癌患者59例，包含单纯手术治疗患者30例(对照组)和术后化疗并且联合使用榄香烯进行治疗的观察组患者29例。比较分析化疗联合榄香烯与单纯手术治疗对食管癌的干预效果，并分析其与患者外周血淋巴细胞cyclinD1、p16的表达水平变化的关联。采用SPSS 17.0统计学软件进行分析。结果 随访比较2组患者治疗后2年的疗效情况，观察组无病生存时间为(12.58±7.12)月，中位无病生存时间为13.5个月，均略高于对照组。2组患者治疗前的cyclinD1水平及p16水平均未见差别；治疗后2组的cyclinD1水平分别为(2.43±1.42)、(4.03±1.54)，p16水平分别为(6.95±2.75)、(5.02±2.55)，组间均存在统计学差异(P<0.01)。结论 手术干预对于集体细胞周期蛋白组的调控会产生一定影响，cyclinD1与p16的双向下调有可能提示术后肿瘤的复发与转移。同时榄香烯干预会影响cyclinD1加速下调，p16下调则会受到相对抑制，可能对于控制术后复发转移有一定的功效。

化疗；榄香烯；食管癌；cyclinD1；p16

(ThePracticalJournalofCancer,2017,32:1270～1272)

细胞周期蛋白D1(chclinD1)是细胞周期G1中第1个合成的细胞周期蛋白，发挥重要作用，特别是对于细胞的G1/S期转变影响尤为关键，主要作用原理涉及其通过与相应的周期蛋白依赖性激酶结合，通过调控影响基因的转录来促进或者推迟进入S期的时间。当细胞受到恶性生长信号的刺激，比如很多肿瘤进展过程中，cyclinD1常常会出现过表达，也使得细胞从G1加快进入S期，最终导致细胞失控性生长，因此cyclinD1也常常被称为癌基因。p16蛋白具有与cyclinD1竞争结合细胞周期蛋白依赖性激酶的特征，并且p16与其结合后会导致酶的失活，从而阻止了蛋白质的磷酸化过程，起到了抑制细胞增殖的作用。研究结果提示，多种肿瘤中均可见p16基因的缺失或突变，p16因此被称为肿瘤抑制基因[1-2]。

榄香烯主要来自莪术根茎，具有独特的非细胞毒性，具有很强的杀灭肿瘤细胞的能力，能起到抑制肿瘤生长的功效。有研究提示，榄香烯还可能通过影响细胞周期蛋白质组中的诸多成分从而影响细胞周期的过程。榄香烯因为其抗癌作用具有广谱性，并且高效安全对于肝肾功能基本没有损害，也没有骨髓抑制作用等副作用，并且还兼有提高免疫力、抗炎、抗血栓等作用，近年来被广泛应用于肿瘤手术或化疗的辅助治疗中[1-3]。

本研究拟通过观察患者术后外周血淋巴细胞周期 cyclinD1和p16变化规律，探讨榄香烯对于肿瘤的抑制作用。

1 材料与方法

1.1 一般资料

本研究选取本院就诊的确诊食管癌患者59例，包含单纯手术治疗患者30例(对照组)和术后化疗并且联合使用榄香烯进行治疗的观察组患者29例。纳入标准：纳入的患者均为确诊的食管癌病例，患者病例及相关信息完整，且能配合本研究；排除标准：排除其他全身性疾病患者，排除其他恶性肿瘤患者以及各种原因不能配合本研究的受试对象。观察组患者29例，平均年龄(45.65±2.12)岁，其中男性19例，占65.52%；对照组患者30例，平均(45.18±2.63)岁，其中男性患者20例，占66.67%；2组受试对象在性别与年龄分布上未见差别，可比性良好。

1.2 方法

全部患者知情同意。使用流式细胞仪检测血清淋巴细胞cyclinD1和p16蛋白表达水平，间接免疫荧光染色法检测cyclinD1以及p16蛋白表达水平，首先将细胞悬液加入食管离心后弃上清，然后每管加入1 ml穿透液，常温下反应半小时，用PBS缓冲液洗涤；加入一抗(鼠抗人cyclinD1单抗、鼠抗人p16单抗)后室温避光放置半小时，加入缓冲液轻轻吹打，离心后弃上清，除去未结合的荧光抗体；再次加入PBS缓冲液，样品放置0～4 ℃环境待测。

观察组治疗方案：术后化疗并联合输注榄香烯0.6 g/d,连续输注5天，并观察比较效果。比较分析术后化疗联合榄香烯与单纯手术治疗对食管癌的干预效果，并分析其与患者外周血淋巴细胞cyclinD1、p16的表达水平变化的关联。

1.3 统计学方法

采用SPSS 17.0统计学软件进行分析，计量资料以均数和标准差表示，采用t检验；计数资料以例数和构成比例或发生率表示，采用χ2检验。检验水准以P<0.05为差异有统计学意义。

2 结果

2.1 2组患者随访疗效比较

随访比较2组患者治疗后2年的疗效情况，观察组无病生存时间为(12.58±7.12)月，高于对照组的(8.50±6.81)月，差异有统计学意义(t=2.269、P=0.027)。观察组中位无病生存时间为13.5个月，均略高于对照组的8.9个月(M-W检验统计量=496.00，P<0.001)。

2.2 治疗前后2组患者cyclinD1和p16水平比较

2组患者治疗前的cyclinD1水平、p16水平均未见差别。治疗后的cyclinD1水平及p16水平组间均存在统计学差异，P<0.01，见表1。

表1 治疗前后2组患者cyclinD1和p16水平比较

3 讨论

榄香烯是一种细胞毒性的中草药提取物，具有较强的杀灭肿瘤细胞能力，还可能通过影响细胞周期蛋白质组中的诸多成分从而影响细胞周期的过程，因为其抗癌作用具有广谱性，并且高效安全，近年来被广泛应用于肿瘤手术或化疗的辅助治疗领域[2-4]。本次研究中随访比较2组患者治疗后2年的疗效情况，观察组无病生存时间的平均值为(12.58±7.12)月，中位无病生存时间为13.5个月，均略高于对照组。证实了榄香烯联合治疗的优良疗效。

细胞周期的调节失控在各种恶性肿瘤的发生与进展中都是起重要影响作用的分子事件，因此也有学者甚至提出癌症是一种细胞周期疾病的观点。数据资料提示，当前各种恶性肿瘤的发病在不同国家和地区的人群中均呈现增长趋势，食管癌的发病也是如此[5-9]。不少肿瘤临床研究已经证实，cyclinD1以及p16这一对与细胞周期调节失控密切关联的因子与肿瘤的发生与抑制关联密切，cyclinD1是细胞周期首次合成的细胞周期蛋白，cyclinD1/CDK4/6复合物推动着细胞周期由G1期进入S期，cyclinD1属于一种重要的正性调节因子，而p16则为重要的负性调节因子，和cyclinD1组成一对，共同对细胞周期的正常运行进行调控[4,10-11]，cyclinD1以及p16的异常表达可以反映肿瘤细胞生长情况以及预后状态[10-13]。本次研究对术后化疗联合榄香烯与单纯手术治疗对食管癌干预后外周血淋巴细胞cyclinD1、p16的表达水平变化进行了分析。 本研究中2组患者治疗前的cyclinD1水平、p16水平均未见差别。治疗后的cyclinD1水平、p16水平组间均存在显著差别(P<0.01)。手术创伤对于细胞周期蛋白具有一定影响，且提示此模式下术后患者有一定的可能会发生肿瘤的转移过程。术后榄香烯联合化疗组与单纯手术组治疗前后的cyclinD1和p16水平对比则提示榄香烯干预后对于外周血淋巴细胞cyclinD1以及p16的作用与单纯手术治疗组的情况存在差别，可能与榄香烯一定程度上抑制肿瘤复发转移存在潜在关联，具体机制有待今后继续纵深研究。

总之，手术干预对于机体细胞周期蛋白组的调控会产生一定影响，cyclinD1与p16的双向下调有可能提示术后肿瘤的复发与转移。同时榄香烯干预会影响cyclinD1加速下调，p16下调则会受到相对抑制，可能对于控制术后复发转移有一定的功效。

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(编辑：甘 艳)

A Comparison of the Effect of Chemotherapy Combined with Elemene and Simple Surgery on Esophageal Cancer and the Relative Association with the Expression of CyclinD1 and p16 in Peripheral Blood Lymphocytes

LIU Jian,JI Haoming,LIU Chungui,et al.

Haian People's Hospital Affiliated to Nantong University,Nantong,226600

Objective To investigate the effect of chemotherapy combined with elemene and simple surgery on esophageal cancer and the correlation with the expression of cyclinD1 and p16 in peripheral blood lymphocytes.Methods 59 patients with esophageal cancer who had been diagnosed with esophageal cancer were enrolled in this study.30 patients who underwent surgery alone and postoperative chemotherapy were treated with elemene.Comparative analysis of the effect of combined chemotherapy with elemene and simple surgery on esophageal cancer and the correlation with the expression of cyclinD1 and p16 in peripheral blood lymphocytes.SPSS17.0 statistical software was used for analysis.Results The mean value of disease-free survival time was (12.58±7.12)months,and the median disease-free survival time was 13.5 months,which were slightly higher than those in the control group.The levels of cyclinD1 were (7.58±1.12)and (7.53±1.03),respectively,and the levels of p16 were (8.30±2.33)and (8.45±2.54)respectively.There was no difference between the 2 groups.The levels of cyclinD1 were (2.43±1.42)and (4.03±1.54),respectively.The levels of p16 were (6.95±2.75)and (5.02±2.55),respectively.There was significant difference between the 2 groups(P<0.01).Conclusion Surgical intervention may play an important role in the regulation of the cell cycle protein group.The two-way down-regulation of cyclinD1 and p16 may suggest the development of postoperative tumor.At the same time elemene intervention will affect the cyclinD1 accelerated down,p16 down will receive a relative inhibition,may be for the control of postoperative recurrence and metastasis have a certain effect.

Chemotherapy;Elemene;Esophageal cancer;CyclinD1;p16

226600 南通大学附属海安人民医院

10.3969/j.issn.1001-5930.2017.08.015

R735.1

A

1001-5930(2017)08-1270-03

2017-03-09

2017-04-12)