miR-21表达与肝细胞癌患者预后的相关性

黄新造 占桂香 赛 君 纪 丹



miR-21表达与肝细胞癌患者预后的相关性

黄新造 占桂香 赛 君 纪 丹

miR-21；生物标志物；肝细胞癌；预后

肝细胞癌(hepatocellular carcinoma，HCC)是常见的恶性实体肿瘤之一，在肿瘤相关疾病死亡率中排第二[1]。临床上急需一种能够准确预测HCC患者疾病复发、转移和预后的标志物以改善患者临床疗效。报道表明在多种人类肿瘤中miR-21表达增加能够促进肿瘤细胞增殖、转移和侵入[2]，且部分研究证实miR-21可以作为某些肿瘤诊断和预后标志物[3-5]，然而HCC患者的miR-21表达情况及其对疾病预后的影响尚不清楚。本研究旨在探讨miR-21对评估HCC患者疾病预后的价值。

1 材料与方法

1.1 一般资料

本研究中120例均为2007年至2013年在我院接受手术切除治疗的原发性肝细胞癌患者。HCC组织和邻近非肿瘤组织均为术中采集，且立即放入液氮中保存备用。所有患者入组前均未接受任何干预和治疗。患者一般临床特征见表1，本研究通过我院伦理委员会审批。

1.2 RNA提取和实施定量PCR检测

采用mirVana miRNA提取试剂盒提取组织miRNA，通过SPECTRAmax微孔板紫外分光光度计测定miRNA浓度，按参考文献[6]合成miR-21和内参U6 snRNA扩增引物。实施定量PCR反应条件为95 ℃预变性10 min，95 ℃变性15 s，60 ℃退火30 s，72 ℃延伸1 min，共45个循环。根据内参U6 snRNA的含量通过2-ΔΔCt方法计算miR-21的相对表达量。

1.3 统计学处理

数据均采用SPSS 19.0软件处理，相关性分析采用卡方检验和Fisher’s精准检验或独立t检验，组间生存期比较则采用秩和检验，对于单一变量检测有显著性意义的因素进行多重变量分析，P<0.05为差异具有统计学意义。

2 结果

2.1 HCC样本中miR-21表达检测

与邻近非肿瘤组织相比，HCC组织样本中miR-21表达显著上调(P<0.05，图1)。根据实施定量PCR检测结果将120例HCC患者分成2组，其中高表达患者63例，低表达患者57例。

2.2 miR-21表达与HCC患者临床病理学特征分析

miR-21高表达与肿瘤分化、TNM分期和血管侵入密切相关，然而miR-21表达水平与患者年龄、性别、实体瘤数量、肿瘤直径、血清AFP含量和肝硬化等因素无关。见表1。

图1 实施定量PCR方法检测HCC组织和临近非肿瘤组织中miR-21表达量比较

病理学特征例数miR-21表达/例高表达低表达P值性别0.929 男性663531 女性542826年龄/岁0.224 <50573324 ≥50633033肿瘤直径/cm0.302 ≤5512427 >5693930实体瘤数量0.204 单个623626 多个582431血清AFP/(μg·L-1)0.316 <400754233 ≥400452124肝硬化0.092 否21813 是995544肿瘤分化0.002 良好+中等571542 不良634815TNM分期0.003 Ⅰ～Ⅱ481731 Ⅲ～Ⅳ724626血管侵入0.004 是27207 否934350

2.3 miR-21表达与HCC患者疾病预后

由于miR-21表达水平与HCC患者肿瘤分化、TNM分期和血管侵入密切相关，本研究推测miR-21表达可能是影响HCC患者疾病预后的因素，为验证这一猜想，本研究根据HCC患者miR-21表达情况采用Kaplan-Meier方法绘制患者总生存期曲线，结果提示miR-21表达上调HCC患者总生存期显著短于低表达患者(P<0.05，图2)，表明miR-21表达上调与HCC患者疾病预后不良密切相关，Cox比例危险模型显示miR-21表达、肿瘤分化不良、高TNM分期和血管侵入均为影响HCC总生存期的独立预后因素(P<0.05，表2，图2)。

表2 HCC患者总生存期相关因素的单一和多重变量分析

图2 HCC患者miR-21表达的Kaplan-Meier分析

3 讨论

miRNAs表达异常是多种肿瘤的常见现象，且其通过调节相关基因的表达进而在肿瘤发生和发展中发挥重要作用。研究证实miRNA表达改变与人类肿瘤的发展和预后密切相关，因此探究HCC患者组织中miRNA表达谱不仅为HCC发生或发展的分子机制研究奠定基础，同时也为HCC患者肿瘤治疗提供新的靶标。早期研究报道显示miR-21在多种肿瘤中表达升高，例如乳腺癌、结肠癌、肺癌和胰腺癌[3-4]。与上述研究结果一致，本研究证实HCC组织中miR-21表达显著上调。统计学结果显示与相应邻近非肿瘤组织相比HCC组织中表达显著升高。此外，miR-21表达升高与HCC患者肿瘤分化、TNM分期和血管侵入密切相关，提示miR-21可能参与HCC的发展。许多学者研究显示miR-21表达升高与肿瘤患者疾病预后不良密切相关，例如，Yan等[5]研究表明miR-21在人乳腺癌中表达升高，且与患者较高的临床分期和淋巴结转移密切相关。此外，miR-21高表达患者的总生存期显著低于低表达患者。王斌等[6]研究发现miR-21在结直肠癌患者中表达显著升高，且其表达与高临床分期密切相关。Hu等报道表明在喉头鳞状细胞癌样本中检测到miR-21表达上调，且结果提示miR-21表达上调为喉头鳞状细胞癌患者疾病预后不良独立因素[7]。

总之，本研究结果提示与邻近非肿瘤组织相比，HCC组织中miR-21表达显著上调，且miR-21表达升高与患者肿瘤分化、TNM分期和血管侵入密切相关，统计分析证实miR-21表达可以作为HCC患者疾病预后不良独立标志物。

[1] 张议心,王利新,李元杰,等.原发性肝癌患者血清中miR-21和miR-1247-5p的表达检测〔J〕.世界华人消化杂志,2015,23(32):5148-5156.

[2] 马晓路,谈绮文,彭颖斐,等.血清 DKK1 水平对肝细胞癌(HCC)患者预后判断的临床价值〔J〕.复旦学报(医学版),2014,41(5):589-595.

[3] 伍怡颖,张仲林.miR-21 与结直肠癌的相关性研究进展〔J〕.成都医学院学报,2014,9(2):222-225.

[4] 郭仲莉,曾照芳.miR-21 的高表达与肺癌预后关系的 meta 分析〔J〕.激光杂志,2014,35(1):58-59.

[5] Yan LX,Huang XF,Shao Q,et al.MicroRNA miR-21 overexpression in human breast cancer is associated with advanced clinical stage,lymph node metastasis and patient poor prognosis〔J〕.Rna,2008,14(11):2348-2360.

[6] 王 斌,姜 雷,王冰冰,等.miRNA-21 表达水平与结直肠癌患者预后关系的 Meta 分析〔J〕.肿瘤,2016,35(1):84.

[7] Hu A,Huang JJ,Xu WH,et al.miR-21 and miR-375 microRNAs as candidate diagnostic biomarkers in squamous cell carcinoma of the larynx:association with patient survival〔J〕.Am J Transl Res,2014,6(5):604-613.

(编辑：甘 艳)

435000 鄂东医疗集团市中医医院

占桂香

10.3969/j.issn.1001-5930.2017.08.052

R735.7

B

1001-5930(2017)08-1391-02

2016-10-24

2017-03-28)