HPLC测定鱼鳔补肾丸(水蜜丸)中松果菊苷和毛蕊花糖苷的含量

张元杰，周兰，来国防

(云南省食品药品监督检验研究院，云南 昆明 650011)



HPLC测定鱼鳔补肾丸(水蜜丸)中松果菊苷和毛蕊花糖苷的含量

张元杰，周兰，来国防

(云南省食品药品监督检验研究院，云南 昆明 650011)

目的：建立高效液相色谱法(HPLC)用于鱼鳔补肾丸(水蜜丸)中松果菊苷和毛蕊花糖苷的含量测定.方法：采用Agilent Zorbax SB-C18色谱柱(4.6 mm×250 mm，5 μm)，以甲醇-水为流动相，梯度洗脱，流速为1.0 mL·min-1，检测波长为330 nm.结果：松果菊苷进样量在0.491～7.861 μg范围内，毛蕊花糖苷进样量在0.260～4.155 μg范围内，线性关系良好(r=0.9999)；松果菊苷平均加样回收率为99.5%(RSD为1.3%，n=9)，毛蕊花糖苷平均加样回收率97.2%(RSD为1.9%，n=9).结论：该法简便，准确，可用于鱼鳔补肾丸(水蜜丸)的质量控制.

鱼鳔补肾丸(水蜜丸)；高效液相色谱；松果菊苷；毛蕊花糖苷

鱼鳔补肾丸(水蜜丸)收载于国家食品药品监督管理局药品标准YBZ10932008及YBZ02192007，由鱼鳔胶、杜仲、肉苁蓉等15味药制成，具有补肾益精的功效，主治肾阳虚弱，肾精亏损所致的头昏，眼花，耳鸣，腰痛膝软[1-2].本品现行标准相对简单，未收载肉苁蓉等补肾阳关键药味的检测项目.因此本实验参考《中国药典》2015年版一部及相关文献报道[3-4]，建立了高效液相色谱法，用于鱼鳔补肾丸(水蜜丸)中松果菊苷及毛蕊花糖苷的测定，并进行了方法学验证.

1 仪器与试药

1.1 仪器

1200高效液相色谱仪(美国安捷伦公司)；BP211D电子天平(德国赛多利斯公司)；Ulupure超纯水制备系统(成都优普公司).

1.2 试药

松果菊苷对照品(批号：17030701，含量为98.88%，成都曼斯特生物科技有限公司)，毛蕊花糖苷(批号：111530-201411，含量为94.4%，中国食品药品检定研究院)；鱼鳔补肾丸(水蜜丸)样品(云南腾药制药股份有限公司，批号：161031、170150、170249；云南良方制药有限公司，批号16072101)；甲醇为色谱纯，水为超纯水.

2 方法与结果

2.1 色谱条件

Agilent Zorbax SB-C18色谱柱(4.6 mm×250 mm，5 μm)以甲醇为流动相A，水为流动相B，流速：1.0 mL·min-1，梯度洗脱，洗脱程序为0～10 min，26% A，10～13 min，26%～29% A，13～45 min，29% A；检测波长为330 nm；柱温30℃.

2.2 溶液的制备

2.2.1 对照品溶液

取松果菊苷对照品及毛蕊花糖苷对照品适量，精密称定，加50%甲醇制成每1 mL含松果菊苷0.786 mg，毛蕊花糖苷0.415 mg的溶液，作为对照品溶液.

2.2.2 供试品溶液

取本品适量，研细，取约5.0 g，精密称定，置100 mL棕色量瓶中，精密加入50%甲醇50 mL，密塞，摇匀，称定重量，浸泡30 min，超声处理45 min(功率250 W，频率35 kHz)，放冷，再称定重量，加50%甲醇补足减失的重量，摇匀，滤过，取续滤液，即得.

2.2.3 缺肉苁蓉阴性对照溶液

取除肉苁蓉外的14味药材，依处方制备缺肉苁蓉阴性样品，按“2.2.2”项下方法，制备缺肉苁蓉阴性对照溶液.

2.3 专属性试验

分别吸取对照品溶液、供试品溶液及缺肉苁蓉阴性对照溶液各10 μL，注入液相色谱仪，按“2.1”项下色谱条件测定，记录色谱图.供试品色谱图中呈现与松果菊苷、毛蕊花糖苷对照品色谱峰保留时间相同的色谱峰，且与杂质峰分离良好，阴性样品无干扰，该方法专属性较好，结果见图1.

图1 对照品溶液(A)、供试品溶液(B)及缺肉苁蓉阴性对照溶液(C)色谱图

2.4 线性关系考察

精密吸取“2.2.1”项下的对照品溶液，用50%甲醇逐级稀释，制成系列混合对照品溶液，分别精密吸取10 μL，注入液相色谱仪，按“2.1”项下色谱条件测定，记录色谱图.以质量浓度(mg·mL-1)为横坐标X，峰面积为纵坐标Y，绘制标准曲线.结果松果菊苷在0.491～7.861 μg范围内，线性关系良好(r=0.9999)，回归方程为Y=12686.304X-13.042；毛蕊花糖苷在0.260～4.155 μg范围内，线性关系良好(r=0.9999)，回归方程为Y=17645.720X-26.853.

2.5 精密度试验

精密吸取“2.2.1”项下的对照品溶液10 μL，注入液相色谱仪，按“2.1”项下色谱条件测定，连续进样6次，记录色谱图.计算松果菊苷及毛蕊花糖苷峰面积的RSD值，分别为0.7%及0.6%(n=6)，仪器精密度良好.

2.6 重复性试验

取批号为170249的供试品，按“2.2.2”项下方法制备供试品溶液6份.分别精密吸取10 μL，注入液相色谱仪，按“2.1”项下色谱条件测定并计算.结果松果菊苷平均含量为2.266 mg·g-1，RSD为1.3%(n=6)；毛蕊花糖苷平均含量为0.387 mg·g-1，RSD为1.8%(n=6)，重复性良好.

2.7 加样回收试验

取批号为170249的供试品2.5 g，共9份，精密称定，按“2.6”项下测得含量的50%，100%，150%，共3个水平，分别加入松果菊苷及毛蕊花糖苷对照品，每水平3份，按“2.2.2”项下方法，制备供试品溶液.分别精密吸取10 μL，注入液相色谱仪，按“2.1”项下色谱条件测定并计算.结果松果菊苷平均回收率为99.5%，RSD为1.3%(n=9)；毛蕊花糖苷平均回收率为97.2%，RSD为1.9%(n=9)，方法准确性良好(见表1).

表1 加样回收试验结果

2.8 稳定性试验

取批号为170249的供试品，按“2.2.2”项下方法制备供试品溶液，分别于0、2、4、6、8、12 h进样测定，记录峰面积，计算松果菊苷及毛蕊花糖苷峰面积RSD值，分别为0.9%、0.8%(n=6)，表明供试品溶液在制备后12 h内保持稳定.

2.9 样品测定

取鱼鳔补肾丸(水蜜丸)样品4批，按“2.2.2”项下方法制备供试品溶液，分别精密吸取10 μL，注入液相色谱仪，分别按“2.1”项下色谱条件，测定并计算，结果见表2.

表2 供试品测定结果

3 讨 论

3.1 提取方法的选择

松果菊苷及毛蕊花糖苷为苯乙醇苷类化合物，稳定性受光照、温度等影响较大[5-7]，因此参考相关文献，选择浸泡30 min后超声作为提取方法[3,8-9].比较不同比例甲醇水溶液等提取溶剂的提取效率，选择效率较高，杂质干扰少的50%甲醇水溶液作为提取溶剂.通过不同超声提取时间对松果菊苷及毛蕊花糖苷提取效果的比较，最终确定超声处理时间为45 min.

3.2 流动相的选择

试用了甲醇-水、甲醇-0.1%甲酸、乙腈-0.1%甲酸等不同的流动相组成，发现甲醇-水体系下，待测组分峰形对称，与相邻杂质峰分离度高且操作简便，故采甲醇-水为流动相.

3.3 含量测定结果分析

依处方制法计算，每1 g鱼鳔补肾丸(水蜜丸)相当于肉苁蓉药材0.05128 g(云南腾药制药股份有限公司)或0.0615 g(云南良方制药有限公司).含量测定结果显示，松果菊苷及毛蕊花糖苷总量约占肉苁蓉药材的4.8%～5.2%，未按干燥品计算，已符合《中国药典》2015年版一部肉苁蓉及饮片含量测定项下的限度规定，且同一来源样品结果差异较小，质量较为稳定.

[1]国家食品药品监督管理局.鱼鳔补肾丸国家食品药品监督管理局药品标准：YBZ10932008[S].2008.

[2]国家食品药品监督管理局.鱼鳔补肾丸国家食品药品监督管理局药品标准：YBZ02192007[S].2007.

[3]国家药典委员会.中华人民共和国药典2015年版(一部)[S].北京：中国医药科技出版社,2015：135.

[4]张思巨,刘丽,于江泳,等.HPLC同时测定肉苁蓉药材中松果菊苷和毛蕊花糖苷的含量[J].中国药学杂志,2004,39(10)：740-741.

[5]杨素德,胡军华,李家春,等.HPLC法同时测定苁蓉总苷胶囊中松果菊苷、毛蕊花糖苷、异毛蕊花糖苷的含量[J].世界科学技术-中医药现代化,2015,17(3)：609-613.

[6]彭素萍,巩珺,苗瑞娟,等.连翘酯苷B与毛蕊花糖苷稳定性研究[J].今日药学,2012,22(6)：326-328.

[7]刘雄,吴蓉,余晓晖,等.HPLC法测定不同产地肉苁蓉中松果菊苷的含量[J].甘肃中医学院学报,2009,26(5)：42-44.

[8]田玉彪,杨广安,黄维杰,等.HPLC测定肉苁蓉微粉中松果菊苷和毛蕊花糖苷的含量[J].安徽农业科学,2015,43(33)：171-173.

[9]钱浩,喻芳君,耿宗成,等.不同季节采收的肉苁蓉中4种苯乙醇苷的含量比较研究[J].药物分析杂志,2016,36(11)：1971-1976.

[10]曾建伟,张珍丽,钟黎,等.HPLC波长切换法同时测定复方苁蓉散中松果菊苷、毛蕊花糖苷和淫羊藿苷[J].中成药,2016,38(1)：84-87.

[责任编辑：徐明忠]

Quantitative determination of echinacoside and verbascoside in Yubiao Bushen Pills (water-honeyed pills)using HPLC

ZHANG Yuanjie，ZHOU Lan，LAI Guofang

(Yunnan Institute for Food and Drug Control，Kunming 650011，China)

Objective To establish a method for quantitative determination of echinacoside and verbascoside in Yubiao Bushen Pills (water-honeyed pills) using high performance liquid chromatography(HPLC).Methods：The analyses were performed on a Agilent Zorbax SB-C18 column(4.6 mm×250 mm,5 μm)with gradient elution of methanol and water at a flow rate of 1.0 mL·min-1.The detection wavelength was set at 330 nm.Results：The calibration curves of echinacoside and verbascoside showed good linearity(r=0.9999) within the range of 0.491～7.861 μg and 0.260～4.155 μg，respectively.The average recoveries of echinacoside and verbascoside were 99.5%(RSD=1.3%,n=9)and 97.2%(RSD=1.3%,n=9).Conclusion：The method was simple and accurate for quality control of Yubiao Bushen Pills(water-honeyed pills).

Yubiao Bushen Pills(water-honeyed pills)；HPLC；echinacoside；verbascoside

2017-05-19

《中国药典》药品标准提高项目(319)

张元杰(1984—), 男, 云南玉溪人, 主管药师, 主要从事药品检验及质量标准研究.

来国防(1973—),男,河南柘城人,主任药师,博士，主要从事药品检验及质量标准研究.

O652.63

A

1672-3600(2017)09-0024-04