两种氟苯尼考制剂产品比较药动学研究

（中牧实业股份有限公司北京100070）

两种氟苯尼考制剂产品比较药动学研究

万进，牛志强，徐瑞华，朱光山

（中牧实业股份有限公司北京100070）

健康杜长大猪16头（体重为18±1kg）随机分为A、B两组，以20mg/kg剂量单次灌服两种氟苯尼考制剂（20%氟苯尼考粉和2%氟苯尼考预混剂），并于给药后不同时间点从前腔静脉采血，采用已建立的高效液相色谱法（HPLC）进行血药浓度测定，利用WinNonlin软件的非房室模型拟合其血药浓度-时间数据。方法学研究表明本实验建立的HPLC方法专属性良好，在目标峰附近无杂质干扰，线性良好，线性范围为0.03～10μg/mL，相关系数为0.9994。20%氟苯尼考粉主要药动学参数为：Tmax=1.13± 0.64h，Cmax=9.61±2.65μg/mL，T1/2=3.84±1.56h，MRT=4.65±0.70h，AUC=52.56±16.99 h*μg/mL；2%氟苯尼考预混剂主要药动学参数为：Tmax=1.31±0.37h，Cmax=8.30±2.17μg/mL，T1/2=3.39± 0.35h，MRT=4.93±0.74h，AUC=49.84±17.54 h*μg/mL。比较药动学结果表明20%氟苯尼考粉相对于2%氟苯尼考预混剂的相对生物利用度为105.45%。经T检验和方差分析，二者主要药动学参数无显著差异，在猪体内可视为有相似的药动学过程，但前者在饮水灌服给药时能在更短的时间吸收分布、达到血药峰浓度，且血药峰浓度略高于2%氟苯尼考预混剂，故20%氟苯尼考粉起效更快、效果稍好于2%氟苯尼考预混剂。

氟苯尼考制剂、猪、口服、比较药动学

氟苯尼考是上世纪八十年代后期成功研制的一种新的兽医专用酰胺醇类广谱抗菌药，对大部分革兰氏阳性菌和革兰氏阴性菌均有强效，多用于敏感细菌所致的猪、鸡及鱼的细菌性疾病，尤其对呼吸系统感染和肠道感染疗效显著。其抗菌机理为作用于细菌70s核糖体的50s亚基，抑制转肽酶，使肽酶的增长受阻，抑制了肽链的形成，从而阻止蛋白质的合成，达到抗菌作用[1]。本药口服吸收迅速、分布广泛，半衰期长，血药浓度高且持续时间长[2]。

目前市面上制剂类型众多，有粉剂、预混剂和注射剂。为比较不同剂型氟苯尼考制剂在猪体内的药动学，中牧南京动物药业有限公司与华中农业大学兽医药理学与毒理学课题组根据农业部《兽用化学药物临床药代动力学试验指导原则》[3]，对市售两种类型氟苯尼考产品进行了猪口服比较药动学的研究，以检验氟苯尼考制剂不同工艺在猪体内药代动力学参数，从而不断改进产品质量，满足养殖业需求。

1 实验材料

1.1 药品

氟苯尼考标准品，批号：k0301305，规格：100mg，中国兽医药品监察所。

20%氟苯尼考粉（氟欣泰），批号：16072101，中牧南京动物药业有限公司。

2%氟苯尼考预混剂，市售。

1.2 试剂与耗材

甲醇，色谱纯，批号：16015079，赛默飞世尔科技（中国）有限公司。

乙腈，色谱纯，批号：16065015，赛默飞世尔科技（中国）有限公司。

乙酸乙酯，分析纯，批号：20160321，国药集团股份有限公司。

1.3 仪器设备

高效液相色谱仪，美国waters公司(waters2695)。电子天平，感量0.00001g，Shimadzu，日本岛津公司。旋涡混合器，XW-80A，海门市其林贝尔公司。

氮吹仪，N-EVAPTM112，Organomation Associates,Inc。

高速冷冻离心机，HITACHI CR21GⅢ，日本日立公司。

超纯水机，Milli-Q，美国Millipore公司。

电热干燥箱，DGX-9243B-1，上海福玛实验设备有限公司。

超声波仪，KQ3200型，昆山市超声仪器有限公司。

振荡器，THZ-H-1，Tokyo Rikakikai Co.Ltd.

电子秤，TCS-150，永康市江南衡器厂。

1.4 溶液配制

氟苯尼考标准储备液：精确称取10 mg氟苯尼考标准品于10 mL的容量瓶中，用甲醇定容至刻度，配制成1 mg/mL的标准储备液，保存在-20℃备用。

氟苯尼考标准工作液：准确量取适量标准储备液用甲醇稀释成适宜浓度的氟苯尼考标准工作液。置2-8℃冰箱中保存备用。

1.5 试验动物和饲料

16头公母各半的60日龄体重为（18±1）kg的健康杜长大猪（杜洛克×长白×大白），从华中农业大学种猪场购买后在华中农业大学试验场地饲养适应环境1周。适应环境期间的饲养环境温度为18～25℃，相对湿度为50～65%，自由饮水，饲养期间饲喂未添加任何药物的饲料。饲料由武汉市春龙实验动物饲料机械经营部加工生产，配方为玉米粉：53%；豆粕：24%；三等粉：8%；麸皮：8%；鱼粉：4%；盐：1%；预粉料：2%。

2 试验方法

2.1 高效液相色谱法(HPLC)的检测条件

色谱柱：C18(Dim：250×4.6 mm，ID：5 μm)；柱温：30℃；进样体积：20 μL；流动相：水/乙腈（68/32，V/V）；流速：1.0 mL/min；检测波长：224 nm。

2.2 标准曲线的绘制

精密量取氟苯尼考标准工作液适量配制成浓度为0.03、0.05、0.1、0.5、0.8、1、5和10 μg/mL的系列标准溶液，利用建立的HPLC方法进行定量测定，每个浓度重复测定三次，利用平均峰面积与相应浓度作线性回归，计算回归方程及相关系数。

2.3 样品前处理

取0.5 mL血浆于10 mL EP管中，加1.5 mL乙酸乙酯，涡旋5 min，4 000 r/min离心10 min，取上层乙酸乙酯上清液，重复提取一次，合并两次上清液，氮气吹干，残留物用0.25 mL的初始流动相溶解，涡旋5 min，12 000 r/min离心5 min，过0.22 μm滤膜，上样进行测定。

2.4 HPLC方法考察

图8 给出了各个算法的同步误差性能与信标节点和普通接收节点同步过程中消息总数的关系[12].从图中可以看出,对于每种算法,随着消息总数的增加,算法的同步误差都在减小,但是不同算法的误差下降幅度是不一样的.CB-Sync算法在消息总数小于20时,较其他算法有较好的同步性能;在消息总数大于25时,CB-Sync算法与其他算法的同步误差性能接近.换言之,CB-Sync较CCS-Sync,DA-Sync,D-Sync算法可以以更少的能量消耗得到更高的同步精度.

对所建HPLC方法的专属性、检测限和定量限、准确度和精密度、稳定性进行实验和考察。

2.5 药动学试验

选取适应环境的健康杜长大猪16头，随机分成2组、每组8头，禁食12 h后分别按20 mg/kg剂量（溶解和混悬于140 mL1%羧甲基纤维素钠）单次灌服20%氟欣泰可溶粉和2%氟苯尼考预混剂，并于给药后于0.083、0.25、0.51、1.5、2、4、6、8、12、18、24 h从前腔静脉采血5 mL，分离血浆、提取、按建立的HPLC方法进行血药浓度的测定。试验期间饲喂不含任何药物的饲料，自由饮水。根据试验中测得的每头猪的血药浓度-时间数据，绘制每组的平均药时曲线。

2.6 数据处理和统计分析

利用WinNonlin非房室模型处理血药浓度-时间数据，然后利用SPSS方差分析比较药动学参数的差异。

3 .结果

3.1 所建HPLC方法色谱图

3.2 标准工作曲线及线性范围

氟苯尼考标准溶液在0.03～10 μg/mL范围内，各浓度与其响应值（峰面积）成线性相关，对浓度(X)与峰面积（Y）进行线性回归，得出氟苯尼考线性方程为：y=21.641x-413.66，相关系数r=0.9994。HPLC检测方法在猪血浆的最低检测限为0.05 μg/mL，定量限为0.1 μg/mL。

3.3 猪灌服20%氟欣泰和2%氟苯尼考预混剂后各采血点血药浓度（见表1）

图1 氟苯尼考的液相色谱图：A：溶剂；B：空白血浆；C：氟苯尼考标准品(0.1μg/mL)；D：空白血浆添加氟苯尼考标准品(0.1 μg/mL)

表1

图2 猪口服20%氟欣泰和2%氟苯尼考预混剂(20mg/kg)的血药浓度-时间曲线(Mean±SD，n=8）

猪口服20%氟欣泰和2%氟苯尼考预混剂(20mg/kg)的血药浓度-时间曲线(Mean±SD，n=8）

3.4 经WinNonlin软件非房室模型处理血药浓度-时间后得到的主要药代动力学参数（见表2）

表2

经上述所得药动学参数分析，得知20%氟欣泰可溶粉相对于2%氟苯尼考预混剂的相对生物利用度为105.45%

4 .讨论

4.1 方法和主要药动学参数的特点

本试验在建立猪血浆中氟苯尼考浓度的测定方法时根据以往研究对流动相进行了优化。当选择0.1%氨水作为水相时，氟苯尼考出峰太早且峰型不对称。用超纯水作水相氟苯尼考保留时间在7.79min左右，且峰型对称性良好，溶剂、空白血浆在氟苯尼考保留时间附近未见干扰峰出现。

4.2 对主要药动学参数和血药浓度的分析

药动学研究显示2%氟苯尼考预混剂的MRT和T1/2与仆仕金报道相似[4]，Tmax与研究报道的氟苯尼考粉相似[5]，略小于仆仕金报道。20%氟欣泰可溶粉主要药动学参数与2%氟苯尼考预混剂基本相似。对重要药代动力学参数进行统计学分析，采用SPSS软件对两制剂的Tmax、Cmax和AUC进行均值一致性t检验分析，得到的|t|值分别为0.716、1.075和0.482，均小于t0.05=2.1318，在95%的置信区间内不存在显著性差异。从药时曲线得知，在给药18h后氟苯尼考血药浓度为0.33±0.20μg/mL，该浓度对大部分敏感菌有较强抑制效果。其中氟苯尼考对胸膜肺炎放线杆菌的最小抑菌浓度（MIC）和最小杀菌浓度（MBC）分别为0.50μg/mL和1.0μg/mL[6]，在20%氟欣泰灌服8h和12h时，其血药浓度分别为2.04±0.90μg/mL和0.67± 0.46μg/mL，故20%氟欣泰给药一次后，其对胸膜肺炎放线杆菌的抑杀效果持续时间达8～12h，对猪场这一重要致病菌有很好的防控作用。

4.3养殖场推荐用药方案

基于对两种氟苯尼考制剂的比较药动学20%氟欣泰可溶粉和2%氟苯尼考预混剂在猪体内存在相似的内服药动学，但前者在饮水灌服给药后15分钟已很好的吸收分布（血药浓度达到6.42± 2.59μg/mL）、在更短的时间达到血药峰浓度，且血药峰浓度略高于氟苯尼考预混剂，故在相同投药（饮水）条件下，氟欣泰起效更快、效果更好。■

[1]Shen J,Hu D,Wang X,Coats JR.Bioavaflabflity and pharmacokinetics of florfenicol in broiler chickens[J]．Vet Pharmacol Ther., 2003,26:337-34l．

[2]蒋红霞，曾振灵，陈杖榴,等。猪饥饿和喂饲后内服氟甲矾霉素的药动学比较[J]．华南农业大学学报，2000，21(4)：68-69．

[3]农业部.兽用化学药物临床药代动力学试验指导原则[S].北京：农业部第1247号公告，2009

[4]王雅琴，仆仕金,等．10%氟欣泰和2%纽弗罗预混剂在猪的比较药动学研究[C]．学术讨论会，2013，S85 R96．

[5]刘帅帅，杨刚，赵永达，方秋华，黄显会．氟苯尼考颗粒与氟苯尼考粉在猪体内的药物动力学比较[J]。华南农业大学学报，2012，33（2）：235-238．

[6]董静.猪肌注氟苯尼考的药动学-药效学研究[D]．武汉：华中农业大学，2008：33．

10.3969/j.issn.1008-4754.2017.05.049