猪脾转移因子与鸡毒支原体F弱毒疫苗株联合接种对SPF鸡淋巴细胞比率影响的研究

黄招玲 胡美华 林君瑾 廖惠珍 陈月香 刘道泉 邱艳红 林伯全 徐磊＊

（1.福建农业职业技术学院动物科学学院福州350119；2.长乐市农业局农产品质量安全检测站福建长乐350200；3.福州市动物疫病预防控制中心福州350002）

猪脾转移因子与鸡毒支原体F弱毒疫苗株联合接种对SPF鸡淋巴细胞比率影响的研究

黄招玲1胡美华1林君瑾1廖惠珍2陈月香3刘道泉3邱艳红3林伯全1徐磊1＊

（1.福建农业职业技术学院动物科学学院福州350119；2.长乐市农业局农产品质量安全检测站福建长乐350200；3.福州市动物疫病预防控制中心福州350002）

为了解猪脾转移因子（TF）与鸡毒支原体（MG）F弱毒疫苗株联合接种对SPF鸡淋巴细胞比率的影响，以活菌数达109ccu/mL的MG F株0.033 mL/羽与TF 0.02 mL/羽分侧点眼SPF鸡，设为A组；B组以MG F株0.033 mL/羽与生理盐水0.02 mL/羽分侧点眼；C组以生理盐水0.033 mL/羽与TF 0.02 mL/羽分侧点眼；D组以生理盐水0.033 mL/羽和0.02 mL/羽对应分侧点眼，作为对照组。点眼后第7 d采血测定淋巴细胞比率。结果显示，A组（63.9%）、B组（53.8%）和C组（54.6%）的淋巴细胞比率均值分别比D组（41.5%）提高了22.4%、12.3%和13.1%。结果表明，TF与MG F株单独使用均能提高SPF鸡的淋巴细胞比率，且TF与MG F株联合使用后淋巴细胞比率提高值高于单独使用。

鸡毒支原体F弱毒疫苗猪脾转移因子联合接种淋巴细胞比率

鸡毒支原体（Mycoplasma gallisepticum，MG）感染，也称鸡败血霉形体感染或慢性呼吸道病（Chronic Respiratory Disease，CRD）[1-2]。MG感染流行于包括我国在内的全世界鸡场中[3-4]，造成了重大经济损失[5]。MG F株是一个良好的弱毒制苗菌株，并已进行了许多有益的研究[6-12]。转移因子（Transfer Factor, TF）是由T淋巴细胞释放的能够转移致敏信息的物质，能够诱导免疫细胞活化，增强机体免疫力，具有广泛的免疫调节活性[13-17]。

本试验依照本课题组已获授权得发明专利制备TF[18-19]，通过TF与MG F株联合使用对SPF鸡淋巴细胞比率影响的研究，揭示TF发挥免疫增强作用的一些机理，为MG防控和TF应用提供试验依据。

1 材料和方法

1.1 疫苗株MG弱毒F株由本实验室保存，活菌数达109ccu/mL。

1.2 仪器与试剂全自动血细胞分析仪为贝克曼库尔特COULTER○RLH 750；动物饲养隔离器购自苏州市冯氏实验动物设备有限公司；SPF种蛋由福州大北农生物技术有限公司提供；肝素钠购自国药集团药业股份有限公司。

1.3 试验动物SPF种蛋于动物饲养隔离器内孵化，雏鸡4日龄时，颈静脉采血，选取MG抗体阴性的雏鸡40羽。3 d后，随机分为4组，分别为：A、B、C和D组，隔离饲养，每组各10羽。

1.4 TF制备按照本课题组已获授权的发明专利制备TF[18-19]：以健康猪脾脏为原料，经匀浆、细胞破碎、灭活、微滤、超滤后精制而成。经检验，所制备TF的pH7.0，多肽含量为3.5 mg/mL，核糖含量为72.0 μg/mL，脱E受体法效力检验活力为15%，细菌内毒素含量小于10 EU/mL，在252 nm波长处有最大吸收，OD260nm/OD280nm的比值为2.23；蛋白质定性检验、无菌检验、支原体检验、外源病毒检验、热原检验、异常毒性检查、过敏反应检查、安全检验均合格。1.5试验设计SPF鸡7日龄时，将MG F株新鲜培养物以0.033 mL/羽的剂量点眼接种SPF鸡20羽，为A、B组；其中，A组以0.02 mL/羽的剂量另一侧点眼接种TF，而B组以0.02 mL/羽的剂量另一侧点眼接种生理盐水。C组则以0.033 mL/羽的生理盐水和0.02 mL/羽的TF分侧点眼接种。同时设立对照组（D组），将生理盐水以0.033 mL/羽和0.02 mL/羽对应分侧点眼接种。点眼后第7 d，各组SPF鸡经颈静脉采集外周抗凝血，采用全自动血细胞分析仪进行淋巴细胞比率测定。所得数据用单因素方差分析和最小显著性差法（LSD）分析，P＜0.05为差异显著。

2 结果

点眼后第7 d，A组的淋巴细胞比率最高，均值为63.9%；其次为C组与B组，两者淋巴细胞比率均值较接近；最低为D组，其淋巴细胞比率均值为41.5%。A、B和C组得淋巴细胞比率均值分别比D组提高了22.4%、12.3%和13.1%。结果表明，TF与MG F株单独使用均能提高SPF鸡的淋巴细胞比率，且TF与MG F株联合使用后淋巴细胞比率提高值高于单独使用。见表1。

3 讨论

白细胞可分为5种类型，即中性粒细胞、嗜酸性粒细胞、嗜碱性粒细胞、淋巴细胞和单核细胞。淋巴细胞比率即是淋巴细胞占白细胞总计数的百分比。江清艳等[20]用转移因子提取液注射粤黄鸡，能够提高鸡外周血液中T细胞百分率，而凌红丽等[21]报道转移因子对鸡血液淋巴细胞比率的影响无规律可循。但在本试验中，点眼后第7 d，仅点眼TF的C组的淋巴细胞比率就比D组提高了13.1%，说明单独使用TF即可提高淋巴细胞比率。该结果与江清艳等的研究结果一致，而与凌红丽等的研究结果不同，需进一步验证。

表1 淋巴细胞比率测定结果

研究显示[10-11]，MG F株可提高鸡淋巴细胞亚型比值，如Th/T、Tc/T和Bu-1a+B/PBL等。在本试验中，仅点眼MG F株的B组的淋巴细胞比率比D组提高12.3%。表明单独使用MG F株可提高淋巴细胞比率。

本试验依照本课题组已获授权的发明专利制备TF[18-19]，通过TF与MG F株联合使用对SPF鸡淋巴细胞比率影响的研究，TF与MG F株单独使用均能提高SPF鸡的淋巴细胞比率，且TF与MG F株联合使用后淋巴细胞比率提高值高于单独使用。

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Study on the effect of combined inoculation of pig spleen transfer factor and Mycoplasma gallisepticum F vaccine on SPF chicken lymphocyte ratio

Huang Zhaoling1Hu Meihua1Lin Junjin1Liao Huizhen2Chen Yuexiang3Liu Daoquan3Qiu Yanhong3Lin Boquan1Xu Lei1*
(1.Fujian Agricultural Vocational Technical College,Fuzhou 350119;2.Station of Agricutural Products Quality and Safety Inspection,Changle Bureau of Agriculture,Changle Fujian 350200; 3.Fuzhou Animal Disease Prevention and Control Center,Fuzhou 350002)

To evaluate the effects of combined inoculation of pig spleen transfer factor(TF)and Mycoplasma gallisepticum(MG)F vaccine on SPF chicken lymphocyte ratio.This research adopted the living bacteria number reached 109ccu/mL MG F.And the establishment of A group(0.033 mL/plume MG F strain and 0.02 mL/plume TF,eye dropping SPF chicken dividedly),B group(0.033 mL/ plume MG F strain and 0.02 mL/plume saline),C group(0.033 mL/plume saline and 0.02 mL/plume TF)and D group(0.033 mL/ plume saline and 0.02 mL/plume saline),respectively.On 7 day post inoculation(dpi)blood lymphocyte ratio was detected.The results showed that compared with group D(41.5%),the mean lymphocyte ratio of group A(63.9%),group B(53.8%)and group C(54.6%) were increased by 22.4%,12.3%and 13.1%respectively.The results showed that both TF and MG F strains could increase the lymphocyte ratio of SPF chickens individually,and the ratio of lymphocyte rate of combined inoculation TF and MG F strains was higher than that of single use.

MG F attenuated vaccine Porcine spleen transfer factor Combined inoculation Lymphocyte ratio

A

1003-4331（2017）04-0008-03

福建省高校杰出青年科研人才培育计划（闽教科[2015]54号）、福建省中青年教师教育科研项目计划（JA15760）、福建省科技计划项目（2016S0002）、福建省科技计划项目（2017N0009）、福州市科技计划项目（2012-N-94）、福州市科技计划项目（2015-G-71）、福州市科技计划项目（2016-G-64）、福建农业职业技术学院科研项目（2016JS005）、福清市科技计划项目（融科[2011]18号）资助。

黄招玲（1969-），女，福建福州人，实验师，主要从事动物传染病研究。E-mail:357365598@qq.com。

＊通信作者：徐磊，E-mail:xulei0328@163.com。