美洛昔康片剂在比格犬体内的药代动力学及生物利用度研究

郝俊玺，叶妮，王建中，王海挺，曹兴元*

(1.内蒙古农业大学科技园区管理办公室，呼和浩特 010018；2.中国兽医药品监察所 北京 100081； 3.中国农业大学动物医学院，北京 100193；4.齐鲁动物保健品有限公司，济南 250100)



美洛昔康片剂在比格犬体内的药代动力学及生物利用度研究

郝俊玺1，叶妮2，王建中3，王海挺4，曹兴元3*

(1.内蒙古农业大学科技园区管理办公室，呼和浩特 010018；2.中国兽医药品监察所 北京 100081； 3.中国农业大学动物医学院，北京 100193；4.齐鲁动物保健品有限公司，济南 250100)

以0.1 mg/kg体重的剂量研究美洛昔康片在比格犬中的药代动力学和生物利用度。采用HPLC分析血浆中的药物浓度，WinNonlin 6.4非房室模型计算药动学参数。比格犬内服美洛昔康片后测得0～48 h美洛昔康的T1/2、Cmax、Tmax和AUC0-t分别为14.55±2.18 h、296.16±74.15 ng·mL-1、6.0±0.00 h和6356.79±1089.78 ng·h·mL-1；比格犬静脉注射美洛昔康溶液后，测得0～48 h美洛昔康的T1/2和AUC0-t分别为11.54±4.18 h和5510.68±1075.29 ng·h·mL-1。内服美洛昔康片剂的绝对生物利用度为115.35%。美洛昔康片在比格犬体内消除速率较慢，消除半衰期较长，在体内滞留时间较长，具有绝对生物利用度高，药物在体内作用时间较长的药动学特征。

美洛昔康；犬；药代动力学；生物利用度

犬常见的止痛药包括非甾体抗炎药、阿片类药物和局部麻醉药物。兽医临床常用非甾体抗炎药治疗肌肉骨骼和腹腔疼痛[1-2]。非甾体抗炎药具有退热、抗炎、镇痛的作用[3]，其主要机制是通过抑制环氧化酶进而阻断前列腺素的合成[4]。美洛昔康属于烯醇类的非甾体抗炎药，能有效退热、抗炎和止痛[5]。其选择性的抑制环氧化酶-2。而环氧化酶-2是疾病状态诱导产生的[6]。美洛昔康已被广泛用于人医与兽医临床，治疗术后及骨关节炎[5]。刘宏[7]研究报道过美洛昔康对犬骨关节炎具有良好的疗效。袁震等[8]曾报道过美洛昔康口服液在犬体内的药代动力学。Mahmood等[9]研究口服美洛昔康溶液在犬上的生物利用度。但国内有关美洛昔康片剂在犬体内的药代动力学研究鲜有报道。本文研究美洛昔康片剂在比格犬体内的药代动力学，以为其在临床更好应用于治疗相关疾病提供参考依据。

1 材料与方法

1.1 试验动物 比格犬12只(11～13月龄，10～12 kg，雌雄各半)，购自北京苏家坨某比格犬试验场。实验动物房通风良好，装备空调，温度保持在16～26 ℃，湿度保持在40%～70%，明暗照明各12 h，每只比格犬均用耳部纹身标记，并在笼具上标注试药编号与剂量。

1.2 药品与仪器 美洛昔康片(批号：1307002，规格：2.5 mg/片)；美洛昔康注射液(批号：G 20809A-29，规格：5 mg/mL)，勃林格殷格翰公司。美洛昔康标准物质(规格：50 mg，含量≥99%)，批号100679-200401，中国食品药品检定研究院。乙酸乙酯、甲醇和甲酸，色谱纯，Fisher公司；其他试剂均为分析纯。

高效液相色谱仪-紫外检测器：Waters 2695-2996(Waters 公司)；电子天平(型号XP105，瑞士Mettler Toledo公司)；纯水仪(型号Milli-Q，美国MilliPORE公司)；旋涡混合器(型号VX-2400，美国TROEMNER公司)；移液器(德国Eppendorf公司)；离心机(Centrifuge 5804，德国Eppendorf公司)；数控超声清洗器(型号KQ5200DB，昆山市超声仪器有限公司)；氮吹仪(型号：OA-SYS N-EVAP112, Organomation Associates公司)。

1.3 方法 试验前将比格犬称重，随机分为两组，每组雌雄各半。给药前一天，比格犬禁食过夜。根据药品说明书推荐剂量，6只比格犬以0.1 mg/kg体重剂量，经口一次性内服给予药品美洛昔康片。给药前及给药后分别在0.25、0.5、1、1.5、2、2.5、3、4、5、6、8、10、12、24、36、48、60和72 h，臂头静脉采血2.5 mL。另外6只比格犬以0.1 mg/kg体重剂量，经臂头静脉一次性缓慢注射美洛昔康注射液。静注给药前及给药后分别在0.083、0.25、0.5、1、1.5、2、2.5、3、4、6、8、10、12、24、36、48、60和72 h，给药对侧臂头静脉采血2.5 mL。血样置于肝素抗凝的聚丙烯离心管中，3800 rpm离心10 min，吸取上层血清，-20 ℃保存待测。比格犬给药4 h后可恢复进食，试验过程中可自由饮水。为确保片剂完全口服，给药后立即灌胃给予少量生理盐水(10～20 mL)。

1.4 血浆样品前处理 1)取1 mL犬血浆于10 mL离心管中，然后加入20 μL 5 mol/L NaOH，涡动30 s，9000 r/min，4 ℃条件下离心3 min；2)取上清，分别加入200 μL 0.1 mol/L HCl，5 mL乙酸乙酯, 涡动2 min；然后4 ℃，9000 rpm 离心3 min,转移上清于新离心管中；3)向沉淀中加入200 μL 0.1 mol/L HCl，3 mL乙酸乙酯, 涡动2 min；然后4 ℃，9000 r/min 离心3 min，转移上清于离心管； 4)合并两次上清液；5)于37 ℃，氮吹至近干；6)用200 μL复溶液复溶(复溶液：甲醇-0.2%甲酸水溶液(70∶30，V/V)；7)0.22 μm滤膜过滤，取20 μL上机检测。

1.5 血浆药物浓度检测 HPLC条件根据文献报道[8]：高效液相色谱仪-紫外检测器：Waters 2695-2996；检测波长：355 nm；色谱柱为Symmetry C18，4.6 mm×150 mm，5 μm；流动相：甲醇：0.2%甲酸水(70∶30，V/V)；流速：1.0 mL/min；柱温：30℃；进样量：20 μL。洗脱条件：采集时间 6 min，70%甲醇：30%水(0.2%甲酸)。

1.6 数据分析 根据各浓度的数据，使用WinNonlin 6.4(Linear/Log Trapezoidal Method, 1/y weighting)软件，对各试验犬的数据进行计算相关药动学参数。同时经公式FSC=(DoseIV/Dosepo)×(AUClastpo/AUClast IV)计算口服给药的绝对生物利用度。

2 结 果

本试验建立了血浆中美洛昔康的HPLC测定方法，能够满足测定要求。样品测定灵敏度较高，MLX出峰时间5.13 min附近，无明显血浆基质干扰与影响，空白血浆色谱图见图1，空白血浆添加美洛昔康色谱图见图2。在50～5000 μg/L的浓度范围内，方法的线性关系良好，线性方程为y=72.173x-766.27，相关系数为0.9998≥0.99，标准曲线检出限为8 ng/mL，定量限为10 ng/mL，回收率在80.7%～116.4%，日内变异系数均小于9.0%，日间变异系数均小于10.8%。检测限与定量限优于袁震[8]报道的检出限为10 ng/mL，定量限为20 ng/mL。

图1 空白血浆色谱图Fig 1 Chromatogram of blank plasma

图2 空白血浆添加美洛昔康色谱图Fig 2 Chromatogram of MLX for 50 ng/mL in plasma

比格犬内服和静脉注射给予美洛昔康后，美洛昔康的药时曲线见图3，药代动力学参数见表1与表2。比格犬内服给予美洛昔康片后，测得0～48 h美洛昔康的T1/2、Cmax、Tmax和AUC0-t分别为14.55±2.18 h、296.16±74.15 ng·mL-1、6.0±0.00 h和6356.79±1089.78 ng·h·mL-1(表1)。比格犬静脉注射给予美洛昔康溶液后，测得0～48 h美洛昔康的T1/2和AUC0-t分别为11.54±4.18 h和5510.68±1075.29 ng·h·mL-1(表2)。将内服给药后药-时曲线下面积(AUClast)与静脉注射后药-时曲线下面积(AUClast)比较，经公式F= (Dosei.v./Dosep.o.)×(AUClastp.o./ AUClasti.v.) 计算，内服美洛昔康片剂的绝对生物利用度为115.35%，说明美洛昔康片剂内服给药吸收完全。

表1 比格犬内服美洛昔康片后美洛昔康的药代动力学参数(0.1 mg·kg-1B.W.，P.O，n=6)Tab 1 Pharmacokinetic parameters of MLX after single oral administration in beagle dogs (0.1 mg·kg-1B.W.，P.O，n=6)

表2 比格犬静脉注射美洛昔康溶液后美洛昔康的药代动力学参数(0.1 mg·kg-1B.W.，I.V.，n=6)Tab 2 Pharmacokinetic parameters of MLX after single i.v. administration in beagle dogs (0.1 mg·kg-1B.W.，I.V.，n=6)

图3 比格犬静脉注射美洛昔康注射液(0.1 mg·kg-1B.W)和口服美洛昔康片(0.1 mg·kg-1B.W)的药时曲线图Fig 3 Curves of MLX concentration-time after i.v and p.o. administration to beagle dogs

3 讨论与小结

本试验中比格犬口服美洛昔康片后，测得血浆中美洛昔康在0～48 h的药动学参数T1/2、Cmax、Tmax和AUC0-t分别为14.55±2.18 h、296.16±74.15 ng·mL-1、6.0±0.00 h和6356.79±1089.78 ng·h·mL-1，而Busch等[10]以0.2 mg/kg B.W.剂量对比格犬进行了美洛昔康内服给药的药动学研究，其T1/2为23.7 h(CV=30%)，MRT为40.0 h(CV=21.9%)，说明美洛昔康具有消除慢，血中半衰期长的特点，与本研究结果一致。获得的AUCinf为22.9 mg/h/L(CV=16.0%)，约为本试验结果(6898.34±1105.88 ng·h·mL-1)的2倍多。本试验中Tmax为6.0 h，与Busch的研究结果比(Tmax为7.5 h，CV=110%)，说明美洛昔康片吸收速度适中，并且差异不显著。本研究与袁震[8]报道美洛昔康口服液在0.2 mg/kg B.W犬体内的药代动力学参数T1/2ka分别为(0.95±0.64) h、T1/2ke为(23.11±5.99) h、Tpeak为(4.32±2.15) h、Cmax为(0.77±0.25) μg/mL、AUC为(28.73±11.20) mg/h·mL-1、CL/F为(0.01±0.003) L/h、V/F为(0.25±0.09) L/kg相比，美洛昔康片剂比口服液消除速率较慢,消除半衰期较长,在体内滞留时间较长,药物在体内作用时间较长。Mahmood等[9]研究美洛昔康口服液(0.2 mg/kg bw)的绝对生物利用度为 90.24%。本研究片剂的绝对生物利用度为115.35%，说明片剂比口服液具有更好的生物利用度。

本研究提示美洛昔康片剂在比格犬体内消除速率较慢，消除半衰期较长，在体内滞留时间较长，具有绝对生物利用度高，药物在体内作用时间较长的药动学特征，可为兽医小动物临床使用该药提供给药参考依据，为研究及寻找新药，评价临床已经使用药物提供客观标准。

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(编辑：陈希)

Pharmacokinetics and Bioavailability of Meloxicam Tablet in Beagle Dogs

HAO Jun-xi1, YE Ni2, WANG Jian-zhong3, WANG Hai-ting4, CAO Xing-yuan3*

(1.InnerMongoliaAgriculturalUniversityScienceandTechnologyParkManagementOffice，Hohhot010018,China; 2.ChinaInstituteofVeterinaryDrugControl，Beijing100081,China; 3.CollegeofVeterinaryMedicine,ChinaAgriculturalUniversity,Beijing100193,China; 4.QiluAnimalHealthProductsCo.，Ltd，Jinan250100)

CaoXing-yuan,E-mail:cxy@cau.edu.cn

This study was designed to investigate the pharmacokinetic and bioavailability of meloxicam (MLX) tablet in beagle dogs at a dose of 0.1 mg/kg bodyweight. The drug concentrations were analyzed using high performance liquid chromatography. The main PK parameters for p.o. and i.v, groups with WinNonlin 6.4 software, respectively, were as followings: T1/2, Cmax, Tmaxand AUC0-48, 14.55±2.18 h，296.16±74.15 ng·mL-1, 6.0±0.00 h and 6356.79±1089.78 ng·h·mL-1; T1/2and AUC0-48, 11.54±4.18 h and 5510.68±1075.29 ng·h·mL-1. The absolute bioavailability of MLX via p.o. was 115.35%. The results demonstrated that MLX tablet was rapid absorption, slow elimination and high bioavailability.

meloxicam; dog; pharmacokinetic; bioavailability

国家自然科学基金(31672599)；2017年国家农产品质量安全风险评估项目(GJFP201700701)；科技部"十三五"重大专项子项目(2016YFD0501309-1) 作者简介： 郝俊玺，讲师，从事兽药和饲料分析相关科研工作。

曹兴元。 E-mail：cxy@cau.edu.cn

10.11751/ISSN.1002-1280.2017.7.09

2017-05-25

A

1002-1280 (2017) 07-0047-05

S859.79