受体因素对萨福克羊鲜胚及杜泊羊冻胚移植效果的影响

肖 婷，王旭光，宋玉坤，，吐尔洪·阿木提，阿尔曼·海热，图尔迪艾合麦提·阿卜来提，刘国世，阿布力孜·吾斯曼

（1.新疆农业大学动物科学学院，乌鲁木齐 830052；2.中国农业大学动物科技学院，北京 100391；3.新疆阿克苏市畜牧兽医局，阿克苏 843000）

受体因素对萨福克羊鲜胚及杜泊羊冻胚移植效果的影响

肖 婷1，王旭光1，宋玉坤1，2，吐尔洪·阿木提3，阿尔曼·海热1，图尔迪艾合麦提·阿卜来提1，刘国世2，阿布力孜·吾斯曼1

（1.新疆农业大学动物科学学院，乌鲁木齐 830052；2.中国农业大学动物科技学院，北京 100391；3.新疆阿克苏市畜牧兽医局，阿克苏 843000）

文章分析了新疆地区一次萨福克羊鲜胚及杜泊羊冻胚的移植实验数据，旨在讨论受体因素对胚胎移植效果的影响。结果表明：受体羊在发情后7 d时移植胚胎，杜泊羊冻胚桑椹胚移植后产羔率显著高于囊胚（P＜0.05）。萨福克羊鲜胚移植时胚胎发育阶段及移植数量对移植后产羔率无显著影响（P＞0.05）。受体母羊先前手术次数对萨福克羊鲜胚移植后产羔率有显著影响（P＜0.05），手术2次及以上次数的母羊产羔率极显著低于初次胚胎移植的母羊（P＜0.01）。受体母羊卵巢黄体数超过1个后，黄体数对产羔率无显著影响（P＞0.05）。

受体；绵羊；胚胎移植；产羔率

鉴于国家取消棉花收购价格补贴，新疆大面积的棉花种植转向饲料及其他作物种植，很大程度上解决了新疆尤其是南疆优质饲草料来源问题，为集约化养羊提供了平台。在这种大环境下，新疆的规模化养羊业再次升温。现在南疆地区，以家庭为主的小规模养羊正逐步推开，成为南疆农民脱贫致富的重要抓手。舍饲养羊首先需要解决的是品种问题，和田羊、巴音布鲁克羊、多浪羊等新疆地方品种有良好的环境耐受性，但产肉效率和繁殖效率相对不高、养殖利润空间不大，难以应对目前规模化养殖的成本控制问题［1］。由此，发展繁殖力相对较高、产肉性能好、生长发育快的肉羊品种是当前比较理想的选择。黑头萨福克羊是原产于英国、国际上公认的优秀肉羊品种［2］。上世纪70年代引入我国，新疆从90年代逐步开始增加养殖规模，目前在南北疆均有养殖，具有良好的地方适应性，其产肉性能和良好的繁殖性能已经被养殖人员所认可［3］。黑头杜泊羊［4］是原产于南非的优秀肉羊品种，其毛短，抗热，对新疆的干热气候有良好的适应性，且产肉性能优异，目前正逐步成为新疆养羊业的明星品种。本次胚胎移植工作，主要为阿克苏当地龙头企业增加纯种黑头萨福克羊及黑头杜泊羊的数量，为进一步扩大纯繁规模打下基础。在此，采用回顾性分析方法，比较受体母羊体况等因素对胚胎移植效果的影响，为同行开展相关工作提供参考。

1 材料与方法

1.1 材料

1.1.1 时间和地点 本实验于2016年9月在新疆阿克苏地区某羊场进行。

1.1.2 供体、受体情况 本实验所用的供体为该羊场之前由新西兰进口冻胚移植后所产的黑头萨福克羊的纯繁母羊，受体为新疆本地购买的巴音布鲁克母羊为主的地方品种羊。供体母羊严格按照种羊免疫程序进行免疫接种、定期驱虫，饲养管理得当，膘情良好，发情周期正常。受体在购入后进行了驱虫、布鲁氏杆菌病检疫、补饲等，在移植处理前膘情良好。

1.1.3 主要的药品、试剂及设备 本实验所使用的药品主要有：促卵泡素（FSH）、促黄体激素释放激素（A3）和孕马血清促性腺激素（PMSG）购自三生药业有限公司；羊用阴道栓（CIDR）、Holding培养液购自新西兰；0.5mol/L蔗糖液购自美国ICP公司；冲胚液购自卡苏公司；生理盐水、消毒剂、抗生素等自购。设备主要有体视显微镜（OLYM PUSSZ-61日本）、羊用腹腔镜（KARL STORZ德国）、恒温水浴锅。

1.2 方法

1.2.1 供体羊超数排卵及受体羊同期发情 供体羊超数排卵处理：供体母羊阴道埋置CIDR 9 d后，每只羊注射FSH 3mg，间隔12 h，分6次按注射量递减方式肌肉注射，最后一次FSH注射时撤栓，撤栓后48h，参照张效生等［5］的方法进行腹腔镜输精。输精5.5 d后进行冲胚操作。

受体同期发情处理：受体母羊阴道埋置CIDR 13 d后撤栓，每只羊PMSG 330 IU，撤栓后24 h试情，在发情7 d后进行胚胎移植操作。

1.2.2 鲜胚的冲胚及冻胚的解冻方法 鲜胚冲胚操作：参照柴孟龙等［6］方法，供体母羊在授精后5.5 d进行常规手术法冲胚。冲胚结束后，在体视显微镜下将胚胎捡出，鉴定发育阶段并进行质量定级后，置于holding培养液中短暂保存后用于受体移植。

冻胚解冻操作：参考徐小波等［7］报道的方法进行操作，室温下，将存有胚胎的细管从液氮中取出，迅速置于25℃生理盐水中水浴10 s，取出细管，剪掉封口，将细管内的液体缓缓推入装有0.5mol/L蔗糖液的表面皿中，置于体视显微镜下捡出胚胎，胚胎经过两次0.5mol/L蔗糖液平衡，脱去抗冻剂后，移入Holding液中用于受体移植。

1.2.3 受体胚胎移植 鲜胚、冻胚均采用腹腔镜手术法移植。具体操作如下：受体母羊于术前12 h空腹；术前准备将母羊仰卧位保定于手术架上，乳房基部剃毛、消毒，记录受体母羊之前的手术次数。术时母羊采取后高前低仰卧术式，铺好创巾后，用22号手术刀片在左右乳房基部，避开血管各做一个0.5～1.0 cm长的切口，分别置入腹腔镜和子宫钳。术者通过腹腔镜判断左右两侧卵巢上黄体、卵泡情况、子宫等生殖器官黏连情况，确定黄体良好，可以移植时，用子宫钳将待移植侧子宫角牵拉至体外，在子宫角基部用穿刺针扎透子宫壁，用装有胚胎的移植针将胚胎推入子宫角，将子宫角纳入腹腔，并对腹壁创口缝合消毒，然后对母羊进行长效抗生素注射，预防术后感染。在手术过程中，同步做好移植记录，用于数据统计。

1.2.4 受体孕检及接产 受体母羊于术后2个月使用B型超声波仪进行妊娠检查，孕检阳性的单独饲养管理至分娩。于产前10 d左右将待产母羊接入产房，并准备助产药品、器械等便于接产。接产后记录母羊号、羔羊性别、品种等信息，用于系谱登记及数据统计。

1.2.5 数据处理 试验数据应用Excel2007软件进行整理，结果采用χ2检验进行统计。

2 结果与分析

2.1 不同的胚胎发育阶段及移植胚胎数对胚胎移植效果的影响

本次超排共计处理萨福克供体母羊99只，由于母羊体况及排卵情况个体差异，冲胚后，胚胎主要以桑椹胚和早期囊胚为主，但其他发育阶段的胚胎也有出现，移植时遵循A级胚胎移植单枚，B级胚胎移植双枚的原则。移植受体母羊产羔情况如表1所示。结果显示，移植两枚囊胚的产羔率相对较高，达到56.5%，但与其他组相比，差异均不显著（P＞0.05）。

表1 鲜胚的发育阶段及移植枚数对产羔率的影响

本次实验也进行了冻胚移植，移植原则同上，胚胎解冻后用于移植。鉴于冻胚在受体母羊体内需要一个恢复的过程，实验中将冻胚移植给发情后6.5 d的受体母羊。移植及产羔情况如表2所示，结果显示，移植2枚冻胚囊胚的产羔率显著高于移植1枚冻胚囊胚的产羔率（P＜0.05）。移植2枚桑椹胚的产羔率极显著高于其他各组（P＜0.01）。受到各组受体母羊数变化较大的影响，移植1枚扩张囊胚组的产羔率与移植2枚囊胚组的产羔率差异显著（P＜0.05）。

表2 冻胚的发育阶段及移植枚数对产羔率的影响

2.2 受体母羊卵巢情况对胚胎移植效果的影响

由表3可以看出，在有1个黄体，对侧有小卵泡的情况下，产羔率最好，但3组间差异均不显著（P＞0.05）。从表4可以看出，虽然2个黄体的受体母羊产羔率高于1个黄体的母羊，但整体差异也不显著（P＞0.05）。

表3 受体母羊卵巢情况对萨福克羊鲜胚移植的影响

表4 受体母羊卵巢情况对杜泊羊冻胚移植的影响

2.3 不同的术者对胚胎移植效果的影响

移植团队有两名经验丰富的移植术者，从事移植工作10年以上，但来自不同的单位，在本次移植过程中，其他环节均条件一致，胚胎也是随机配给，通过移植记录统计两位术者的移植产羔率发现，在黑萨福克羊鲜胚移植的产羔率上，术者A移植的母羊产羔率高于术者B，而在杜泊羊冻胚移植的产羔率上，术者B移植的母羊产羔率高于术者A，但差异均不显著（P＞0.05），说明两人移植技术相当，无明显差别。

表5 不同的术者鲜胚、冻胚移植效果对比

2.4 受体母羊先前手术次数对胚胎移植效果的影响

受体母羊先前接受过手术，可能会造成器官黏连或生殖道炎症等问题，影响受孕。本次移植过程中近一半受体羊先前接受过手术，作者等将先前的手术次数也作为一个指标加以分析，结果如表6、表7所示。表6数据显示，在萨福克羊鲜胚移植上，受体母羊先前接受的手术次数越多，移植后产羔率越低。之前未接受过手术的母羊移植产羔率极显著高于之前接受过2次及以上手术母羊的产羔率（P＜0.01），提示重复移植的受体母羊使用2次就应更换他用，不宜再作为受体进行移植。对于冻胚移植结果而言，之前手术过1次的母羊移植产羔率反而高于未手术过的母羊，但差异不显著（P＞0.05）；手术过2次以上的母羊移植产羔率低于其他两组，但差异也不显著（P＞0.05）。

表6 受体母羊先前手术次数对萨福克羊鲜胚移植效果的影响

表7 受体母羊先前手术次数对杜泊羊冻胚移植效果的影响

3 讨论

3.1 胚胎发育阶段和移植胚胎枚数对胚胎移植效果的影响

从萨福克羊鲜胚移植的产羔率来看，移植囊胚的产羔率比移植桑椹胚高，移植2枚的比移植1枚的高。罗生金等［8］研究表明，供体、受体同时处理，移植6 d的萨福克羊鲜胚后，移植桑椹胚的受体羊受孕率高于移植囊胚的受体羊。本实验使用的是6.5 d的萨福克羊鲜胚，体内胚胎的正常发育阶段应该在致密桑椹胚到早期囊胚之间，由此出现了移植囊胚的受体羊产羔率高于移植桑椹胚的情况，但差异不显著（P＞0.05）。陈永昌等［9］研究也表明，胚胎发育阶段及级别会直接影响杜泊羊冷冻胚胎的移植效率。从杜泊羊冻胚移植的产羔率来看，不论是桑椹胚还是囊胚，移植2枚的受体羊产羔率都高于移植1枚的。由于实际移植受体羊只数的限制，其他各组之间差异均不显著（P＞0.05）。张国平等［10］的研究结果也表明，移植胚胎枚数越多，妊娠率越高。

3.2 受体母羊卵巢状况及先前手术次数对胚胎移植效果的影响

卵巢上黄体和卵泡的交替发育维持着母羊的发情周期，卵泡产生雌二醇，诱导母羊发情并排卵；功能性黄体产生孕酮，是母羊维持妊娠的首要条件［11］。在功能性黄体分泌的孕酮处于较高水平时，对侧卵巢可能会出现第一次卵泡波，产生小卵泡。通常，这些卵泡在高水平孕酮存在的条件下，很难形成优势卵泡，并迅速闭锁，但在此过程中小卵泡分泌的少量雌激素可以进一步增强孕酮的作用，进而增强黄体维持妊娠的作用［12］。本实验结果中，卵巢上1个黄体1个卵泡的受体羊其移植产羔率高于1黄体或2黄体无卵泡的受体羊，可能的机制正是基于此。但因羊只数较少，无法形成显著性差异。且本次实验结果也表明，1个黄体和2个黄体受体母羊在产羔率上差异不显著（P＞0.05），说明受体羊只要能保证卵巢上有1个功能性黄体就能维持妊娠，这与张金龙等［13］的研究结果一致。王素梅等［14］也研究证实，受体羊的卵巢上的黄体并非越大、越多，妊娠率就越高。尽管丁建平等［15］的研究结果也表明，在山羊胚胎移植时，手术次数和受体羊重复使用对胚胎移植效果影响不显著（P＞0.05），但是该实验中符合移植条件的受体母羊数逐年减少，由此判断，其受体羊的利用率应该下降了，手术次数还是会影响受体母羊的使用率。

3.3 移植技术对比

羊的胚胎移植技术是一个协作性很强的技术工作，需要两人以上的团队才能完成，移植术者是一个必需的岗位。术者移植技术熟练程度对妊娠率也有显著影响［7］。本次移植实验因为移植规模的需要，团队两位移植者均有10年以上的移植经验，统计数据表明，两人在移植后受体产羔率上没有差异。这也说明，系统训练可以提高移植水平。尽管本实验采取了类似的超排方案，但是与张璐等［16］的实验结果相比，产羔率还是相差较大，有待于进一步改进母羊的饲养管理及胚胎移植技术措施。近年来，对羊早期胚胎妊娠规律的进一步明确，精确使用超排药物、降低母羊应激水平［17］，可能会进一步提高胚胎移植效率，增加移植后代数量。

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Effectsof Recipient Factorson Fresh Suffo lk Em bryosand Frozen-thaw ed Dorper Em bryos Transfer

Xiao Ting，Wang Xuguang，Abulizi·Wusiman，etal
（CollegeofAnimalScience，Xinjiang AgriculturalUniversity，Urumqi830052，China）

In this paper，the data ofan experimenton fresh Suffolk and frozen Dorper embryos transfer in Xinjiangwere analyzed retrospectively，and theeffectof recipient factorson embryos transferwas discussed.The results demonstrated thatwhen embryos were transferred to the recipienteweson the7 th day afterestrus，the lambing rate of frozen Dorperembryoswhichwere inmorula stage was significantly higher than those in blastocyst stage after transfer.Under this experimental condition，there was no significanteffecton the lambing ratebetween thedifferentgroupsdivided by thedevelopmentalstageor thequantityof fresh Suffolk embryo transferred.Thenumberofprevioussurgicaloperationsof the recipientsheep had significanteffectson the lambing rateof fresh Suffolk embryos transferred，and the lambing rate of the recipients which had surgical operations more than once was significantly lower than thosewhich had nooperation experience.When the corpus luteum in theovariesof the recipientswasabove one，thenumberofovarian corpus luteahad nosignificanteffectson the lambing rate.

recipient；sheep；embryo transfer；lambing rate

S826.3

A

2095-3887（2017）04-0012-04

10.3969/j.issn.2095-3887.2017.04.004

2017-04-17

中国农业大学-新疆农业大学联合基金项目（2015TC050）；新疆维吾尔自治区科技支疆项目（2016E02037）

肖婷（1986-），女，硕士研究生。

阿布力孜·吾斯曼(1968-)，男，教授，博士，主要从事动物繁殖与胚胎生物技术的研究。