几种牛羊布鲁氏菌病抗体检测方法的比较

欧建伟，刘增再，谭 丹，薛 爽，宁华杰

（1.湖南省宁乡县动物疫病预防控制中心，湖南 宁乡 410600；2.湖南省长沙市动物疫病预防控制中心，湖南 长沙 410013）

试验研究

几种牛羊布鲁氏菌病抗体检测方法的比较

欧建伟1，刘增再2，谭 丹2，薛 爽2，宁华杰2

（1.湖南省宁乡县动物疫病预防控制中心，湖南 宁乡 410600；2.湖南省长沙市动物疫病预防控制中心，湖南 长沙 410013）

应用虎红平板凝集试验、试管凝集试验、间接 ELISA、竞争 ELISA 和胶体金法对牛羊血清样品进行布鲁氏菌病抗体检测，对不同的检测方法进行比较，以建立和优化动物布病简便快速的检疫诊断方法。结果显示：针对牛血清，胶体金法结果阳性率最高，虎红平板凝集试验与间接 ELISA 结果阳性率相似，试管凝集试验与竞争 ELISA 结果阳性率一致，表明胶体金法和虎红平板凝集试验的敏感性较好，而试管凝集试验与竞争 ELISA 特异性较好。针对羊血清，试管凝集试验、竞争 ELISA 和胶体金法的敏感性和特异性好于虎红平板凝集试验和间接 ELISA。

布鲁氏菌病；检测方法；符合率；比较

布鲁氏菌病（Brucellosis，以下简称布病）是由布鲁氏菌属细菌引起的一种慢性人畜共患传染病，主要侵害生殖系统，以母畜流产和公畜睾丸炎为主要特征，其中人感染布病主要是接触病羊、病牛及其排泄物而引起。近来来，畜间和人间布病数量逐渐增多，严重影响家畜的生产性能、动物产品质量安全和公共卫生安全。本试验通过应用虎红平板凝集试验、试管凝集试验、间接 ELISA、竞争 ELISA 和胶体金法，对经流行病学调查证实的感染地区牛、羊血清进行抗体检测，以建立和优化动物布病简便快速的检疫诊断方法。

1 材料与方法

1.1 试验材料

1.1.1 血清样品

从长沙市经流行病学调查证实的感染地区牛血清 107 份，羊血清 45 份，4℃保存备用。

1.1.2 检测试剂

虎红平板凝集试验抗原、试管凝集试验抗原、布病阳性血清和阴性血清由青岛易邦生物工程有限公司提供。动物布病间接 ELISA 和竞争 ELISA抗体检测试剂盒由哈尔滨平河生物技术有限公司提供，布鲁氏菌病抗体金标快速检测卡（竞争法）由浙江迪恩生物科技股份有限公司提供。所有检测试剂均4℃保存备用。

1.2 试验方法和结果判定

虎红平板凝集试验和试管凝集试验按照动物布鲁氏菌病诊断技术标准（GB/T18646-2002）中虎红平板凝集试验和试验凝集试验方法进行操作与判定[1]。间接 ELISA、竞争 ELISA 和胶体金检测试纸条检测方法均按照试剂盒说明进行操作和结果判定。

2 结果

2.1 不同检测方法牛羊布鲁氏菌病抗体检测结果

用虎红平板凝集试验、试管凝集试验、间接ELISA、竞争 ELISA 和胶体金检测试纸条对 107 份牛血清和 45份羊血清样品进行检测，检测结果详见表1。

表1 不同检测方法布鲁氏菌病抗体检测结果比较

2.2 不同检测方法的符合率比较结果

以试管凝集试验为参照，不同检测方法的符合率比较，详见表 2。

表2 试验凝集试验和其他四种方法检测牛血清样本的符合率比较

针对牛血清，虎红平板凝集试验、间接 ELISA法、竞争 ELISA 法和胶体金法与试管凝集试验的符合率分别为 98.13%、99.07%、100%和 97.20%。

表3 试验凝集试验和其他四种方法检测羊血清样本的符合率比较

针对羊血清，虎红平板凝集试验、间接 ELISA法、竞争 ELISA 法和胶体金法与试管凝集试验的符合率分别为 97.78%、97.78%、100%和 100%。

3 讨论与分析

根据《布鲁氏菌病防治技术规范》和《动物布鲁氏菌病诊断技术标准（GB/T18646-2002）》[1]中关于动物布鲁氏菌病的检测和判定方法，试管凝集试验阳性的样品即可判定为阳性样品。因此，试验中符合率的计算均以试管凝集试验方法检测结果比较的。

针对牛血清，虎红平板凝集试验和胶体金法的敏感性较高，阳性率较高；虎红平板凝集试验与间接 ELISA 结果阳性率相似；而试管凝集试验与竞争 ELISA 的敏感性比上述三种方法稍差，但特异性较好。在实际应用中，虎红平板凝集试验和试管凝集试验的检测成本相对较低，但试管凝集试验操作比较复杂，检测的工作效率不高，不适用于大批量样品的快速检测。胶体金试纸条、竞争 ELISA 和间接 ELISA 检测成本相对较高，操作快捷，检测的效率较高，适用于大批量样品的检测。

针对羊血清，试管凝集试验、竞争 ELISA 和胶体金法的敏感性和特异性好于虎红平板凝集试验和间接 ELISA。在实际应用中，试管凝集试验操作比较复杂，不适用于大批量样品的快速检测。竞争ELISA 和胶体金法操作简便快速，但检测成本较高。

因此，牛羊布鲁氏菌病抗体的检测方法具有不同的适用范围，并且每种方法都各有利弊。在实践操作中，因根据工作的需要来确定采用哪种方法。对牛、羊群体进行普查的时候，可以用虎红平板凝集试验和胶体金法进行初筛，筛选出的样品样品在用竞争 ELISA 试验凝集试验进行确诊。在开展牛羊布鲁氏菌病净化的过程中，应将上述几种检测方法有效结合，及早确诊样品群体，对阳性群体进行扑杀和无害化处理，有效防控布鲁氏菌病的传播[2-3]。

[1] 农业部. 动物布鲁氏菌病诊断技术:GB/T 18646-2002[S].北京:中国标准出版社,2002.

[2]郝璐，戴晓光，申捷，等.几种布鲁氏菌病检测方法的比较[J].中国奶牛，2014，(15)，23-26.

[3]齐景文，依颖新，周艳红，等.牛羊布鲁氏菌病四种血清学检测方法比对分析[J].中国动物检疫，2015，32(4)：57-59.

S851.34

A

1006-4907（2017）03-0035-02

10.3969/j.issn.1006-4907.2017.03.016

2017-04-20

长沙市现代农业科技资金专项重点项目（k1401005-21）。

欧建伟（1970～），男，湖南宁乡人，助理兽医师，主要从事动物疫病防控工作，867403386@qq.com。

宁华杰，317660608@qq.com。