西藏拉萨市部分鸡场鸡沙门氏菌病流行病学调查

元振杰，王 燕，马弘财，次仁多吉，拉巴次旦，曾江勇，四朗玉珍，马兴斌

（西藏自治区农牧科学院畜牧兽医研究所，西藏拉萨 850009）

西藏拉萨市部分鸡场鸡沙门氏菌病流行病学调查

元振杰，王 燕，马弘财，次仁多吉，拉巴次旦，曾江勇，四朗玉珍，马兴斌

（西藏自治区农牧科学院畜牧兽医研究所，西藏拉萨 850009）

为了解拉萨市鸡沙门氏菌病的流行情况，探讨主要发病原因，2015年4月至2016年9月，对拉萨市5个县（区）12个集约化养鸡场进行了流行病学调查。结果显示：所采集的1 203份样品中，共检测出沙门氏菌589株，阳性率达48.96%，说明拉萨市鸡沙门氏菌感染较为普遍；在所检测的样品中，种鸡、种蛋检出率分别为41.00%和37.00%，说明种鸡沙门氏菌带菌现象较为严重；病鸡样品检出率为70.54%，其中成年鸡为57.63%、鸡舍环境样本阳性率为16.67%，饲料阳性率为11.60%，说明这些都是造成沙门氏菌水平传播的主要风险因素。

沙门氏菌；流行病学；鸡；拉萨

随着西藏自治区规模化、集约化养鸡业的快速发展，鸡病愈发复杂化。其中的鸡沙门氏菌病是由沙门氏菌引起鸡的一种较为常见传染病[1]，其传播速度快，既可经种蛋传播，也可通过消化道、呼吸道、肠道感染[2]，可导致成年鸡生产性能和品质下降，种蛋孵化率降低，雏鸡发病率和病死率高[3]，对养鸡业影响较大[4]。本实验通过对沙门氏菌的各种传播媒介进行检测，了解鸡沙门氏菌传播扩散的主要风险环节，为有效防控沙门氏菌病提供参考。

1 试验材料与仪器

1.1主要仪器

恒温培养箱、超净工作台、全自动高压蒸气灭菌锅、电热恒温干燥箱、光学显微镜等。

1.2主要试剂

沙门氏菌快速鉴别培养基、麦康凯培养基、LB培养基、伊红美兰培养基、BS琼脂培养基，均购自青岛海博生物公司；沙门氏菌生化编码微量鉴定管，购自杭州天和微生物试剂有限公司；沙门氏菌属多价染色平板凝集抗原诊断血清，购自北京中海动物保健科技公司。

1.3样品

2015年4月至2016年9月，在拉萨市城关区、曲水县、达孜县、墨竹工卡县、堆龙德庆县12个集约化养鸡场，无菌采集种鸡、商品鸡、发病鸡泄殖腔拭子；采集鸡舍、饲槽、用具、饲料、饮水等表面棉拭样本；无菌采集种蛋卵黄1 mL；采集病死鸡肝脏、脾脏、心脏等病变组织样本。

1.4实验鸡

为7日龄健康雏鸡，来自西藏农科院曲尼帕实验基地。

2 试验方法

2.1细菌分离培养

无菌取待检样品，分别接种于沙门氏菌快速鉴别平板，37 ℃培养18～24 h后观察结果。根据说明书要求，挑取紫色菌落，分别接种于麦康凯平板[5]、伊红美兰平板、BS琼脂平板，37 ℃培养16～18 h，根据菌落生长特性进行初步判断[6]。

2.2细菌染色镜检

分别挑取单个菌落，固定并革兰氏染色镜检。染色方法如下：在已固定好的玻片上，滴加草酸铵结晶紫染色液，染色2 min，水洗；加革兰氏碘溶液，媒染1.5 min，水洗；加95%酒精，脱色30 s，水洗；加石炭酸复红，复染30 s，水洗；自然干燥镜检[5-6]。

2.3生化鉴定

挑取培养好的新鲜菌落，按照沙门氏菌生化编码微量鉴定管说明书要求，分别接种于赖氨酸脱羧酶、靛基质、尿素酶、氰化钾、硫化氢、山梨醇、甘露醇、水杨苷、丙二酸盐、卫矛醇、ONPG及葡萄糖、乳糖、蔗糖、麦芽糖、阿拉伯糖生化鉴定管，37 ℃培养24 h，观察并记录结果[7-8]。

2.4血清学鉴定

在干净的载玻片上，加0.5 mL鸡白痢、鸡伤寒抗原诊断血清，挑取分离到的沙门氏菌菌落，加入少量灭菌生理盐水制成菌液，取0.5 mL滴到血清中，5 min 内观察结果。同时设生理盐水和标准菌株为对照组[9]。

2.5动物致病性试验

将252只7日龄健康雏鸡，随机分为42组，每组6只。其中，40组分别皮下接种分离培养好的沙门氏菌菌液，0.2 mL/只（3×109CUF/mL），1组接种沙门氏菌标准株菌液（3×109CUF/mL），1组接种生理盐水对照。接种后，每隔1 h，观察记录鸡的临床表现[10]。

3 试验结果

3.1细菌分离鉴定

从所采集的1 203份病理样品中，共分离出894株细菌，通过鉴别培养基鉴定，符合沙门氏菌生长特征的有602株。挑取单个菌落进行革兰氏染色镜检，结果均符合沙门氏菌特征。

对所分离出的602株可疑菌株，根据要求[8，10]进行赖氨酸脱羧酶、靛基质、尿素酶、氰化钾、硫化氢、山梨醇、甘露醇、水杨苷、丙二酸盐、卫矛醇、ONPG及葡萄糖、乳糖、蔗糖、麦芽糖、阿拉伯糖试验，结果有589株符合沙门氏菌要求，阳性率为48.96%（表1）。

表1鸡沙门氏菌分离鉴定结果

3.2血清学鉴定

将所分离的589株沙门氏菌与鸡白痢、鸡伤寒诊断血清，进行平板凝集实验，结果全部呈阳性凝集，与生化鉴定结果一致。

3.3动物感染试验

将所分离的细菌接种于雏鸡6 h后，雏鸡陆续发病，表现精神沉郁，不食或少食；8 h后表现腹泻，拉白色粪便，接种后感染率达100%。生理盐水对照组正常，无临床症状，感染率为0。

4 讨论与分析

鸡沙门氏菌病是鸡的常见传染病之一，分为鸡白痢、鸡伤寒和鸡副伤寒等，严重影响种鸡受精率、种蛋孵化率、雏鸡成活率、饲料利用率以及商品蛋品质，对养鸡业危害极大[2]。本研究在拉萨市养鸡密集的城关区、曲水县、达孜县、墨竹工卡县、堆龙德庆县5个地区，选择有代表性的12个养鸡场进行调查。首先根据统计学中的简单随机抽样方法，确定不同商品鸡群最小采样数量，对商品鸡进行抽样检测，评价当前鸡沙门氏菌流行状况；其次对种鸡、种蛋进行沙门氏菌检测，评估其带菌率；最后对发病鸡以及环境、饲料、饮水、饲喂工具等传播媒介进行检测[11]，评估其在水平传播中的作用，为有效控制该病提供科学依据。

在随机采集的699份商品蛋鸡样品中，共检测出沙门氏菌阳性403份，感染率高达57.63%，可见目前拉萨市的鸡沙门氏菌感染较严重，应及时采取措施进行控制。在种鸡场和拉萨白鸡种鸡场抽检发现，和种蛋检出率分别为41%和37%，种鸡虽没有商品蛋鸡感染率高，但该病可通过卵垂直传播并迅速扩散[12]，因此同样应予以重视。当前多数鸡场10日龄内雏鸡死亡率较高，这与带菌种鸡的垂直传播有关。因此，种鸡场要严格执行鸡沙门氏菌病净化措施，控制和消灭传染源。在对环境和传播媒介检测后发现，鸡舍环境中的沙门氏菌阳性率为16.67%，饲料、饮水、饲喂工具中的阳性率分别为11.6%、2.78%、6.25%，这可能与不良的饲养管理方式及环境卫生有关。

调查时发现，部分养鸡场饲养管理技术落后，生物安全意识缺乏，没有严格执行定期消毒措施；鸡舍环境卫生状况较差，通风不良，致使大量微生物在鸡舍环境中滋生。近年来西藏自治区的畜禽养殖业快速发展，集约化养殖程度明显提高，但是生产管理方式依然落后，从而带来了相应的疫病问题。因此，政府在大力发展规模化养殖业的同时，要加强对养殖生产者的科技指引，加大农牧技术培训和养殖配套的养殖设备、饲料、兽药、消毒剂等供销市场的建设。只有这样，才能保障西藏自治区的畜牧业又快又好地发展。

[1] 陈溥言. 兽医传染病学[M]. 5版. 北京：中国农业出版社，2006.

[2] 甘孟侯. 中国禽病学[M]. 北京：中国农业出版社，1999：136-137.

[3] 沙依染古丽，成进，谷文喜，等. 新疆地区鸡伤寒白痢沙门氏菌病的调查[J]. 中国预防兽医学报，2001（5）：380-388.

[4] 王亮，张元鹏，张荣武，等. 鸡源性肠炎沙门氏菌的流行病学调查[J]. 中国人兽共患病学报，2011，27（5）：455-458.

[5] 陆承平. 兽医微生物学[M]. 3版. 北京：中国农业出版社，2001.

[6] 农业部.动物和动物产品沙门氏菌检测方法：NY/T550—2002[S]. 北京：国家质检总局，国家标准化管理委员会，2002.

[7] 东秀珠，蔡妙英. 常见细菌系统鉴定手册[M]. 北京：科学出版社，2001.

[8] 布坎南R E，吉本斯N E. 伯杰细菌鉴定手册[M]. 8版.中国科学院微生物研究所，译.北京：科学出版社，1984：392-442.

[9] 姚火春. 兽医微生物学实验指导[M]. 北京：中国农业出版社，2002.

[10] 马兴树. 禽传染病实验诊断技术[M]. 北京：化学工业出版社，2006：106-112.

[11] 胡婧，朱战波，申欣，等. 大庆某牛场牛舍环境中沙门氏菌的调查与分析[J]. 中国畜牧杂志，2013（8）：20-23.

[12] 顾国强，杜泳铭，史岩. 种鸡场鸡白痢净化综合措施[J].中国禽业导刊，2001（10）：30.

（责任编辑：朱迪国）

Epidemiological Investigation on Chicken Salmonellosis in Some Chicken Farms in Lhasa City of Tibet

Yuan Zhenjie，Wang Yan，Ma Hongcai，Ciren Duoji，Laba Cidan，Zeng Jiangyong，SilangYuzhen，Ma Xingbin
（Institute of Animal Husbandry and Veterinary，Academy of Agriculture and Animal Husbandry Sciences of Tibet Autonomous Region，Lhasa，Tibet 850009）

In order to investigate the prevalence of Salmonella in Lhasa city and the main causes of Salmonellosis，epidemiological investigation was carried out in 12 chicken farms in 5 counties（districts）of Lhasa city，from April 2015 to September 2016. The results showed as the follows：Among the 1 203 collected samples，589 strains of Salmonella were isolated（positive rate of 48.96%），which indicated the prevalence of Salmonella was high in Lhasa city. Among the tested samples，the positive rates of breeding chicken and hatching egg were 41.00% and 37.00%，respectively，which showed that the vertical transmission of Salmonella was seriously. Among the tested samples，the positive rate of sick chicken was 70.54%，of which the positive rate of adult chicken was 57.63%，the positive rates of environmental and feed samples were 16.67% and 11.60%，respectively. All mentioned above were the major factors for spreading of chicken Salmonella.

Salmonella；epidemiology；chicken；Lhasa

S851.3

B

1005-944X（2017）08-0023-03

10.3969/j.issn.1005-944X.2017.08.006

西藏自治区2015年自然科技基金“拉萨地区鸡沙门氏菌血清型和耐药性研究”