HPLC法测定桑姜感冒片中苦杏仁苷的含量

陈远

【摘要】目的：建立测定桑姜感冒片中苦杏仁苷含量的方法。方法：采用高效液相色谱法测定，使用C₁₈柱（Symmetry5um，4.6mm×250mm），柱温40℃，以乙腈-甲醇-0.1%磷酸溶液（10：8.5：81.5）为流动相，检测波长210nm；流速为0.4ml/min。结果：苦杏仁苷进样量在0.1281ug-1.2812ug范围具有良好的线性关系；苦杏仁苷平均回收率为100.3%，RSD为1.03%。结论：高效液相色谱法灵敏度高，重复性好，所建立的苦杏仁苷含量测定方法能有效提高桑姜感冒片的质量控制。

【关键词】桑姜感冒片；苦杏仁苷；HPLC；含量测定

桑姜感冒片收载于《中华人民共和国药典》一部，2015年版。由桑叶、连翘、菊花、苦杏仁、紫苏叶、干姜六味药组成，具有散风清热，宣肺止咳的功效，临床用于外感风热，痰浊阻肺所致的感冒。其中苦杏仁为其主药之一，其主要有效成分苦杏仁苷具有降气止咳平喘的功效。有研究表明，苦杏仁苷在酶或酸性条件下，能分解成具有抑制中枢神经系统的氢氰酸，形成组织缺氧等中毒反应，严重的可危及生命。标准中只采用高效液相色谱法对其进行鉴别，并无含量控制指标，鉴于苦杏仁苷过量摄入会引发中毒，量少又难以保证药效，为了保证病人的用药安全，本文拟采用高效液相色谱法测定桑姜感冒片中苦杏仁苷的含量，为桑姜感冒片质量标准的提升和完善提一定科学依据。

1实验部分

1.1仪器与试药

1.1.1实验材料

苦杏仁苷对照品（中国药品生物制品检定所，供含量测定用，批号110820-200403）；桑姜感冒片（四川好医生攀西药业有限责任公司，批号：160106）；缺苦杏仁的阴性样品自制。

1.1.2实验试剂

乙腈（色谱纯）；甲醇（色谱纯）；磷酸（分析纯）；水为自制超纯水。

1.1.3实验仪器

Waters e2695高效液相色谱仪；2998PDADeteator检测器；AY120电子天平（SHIMADZH）AG135电子天平（梅特勒-托利多）；PS-40A型超声清洗机（东莞市洁康超声波有限公司）。

1.2方法与结果

1.2.1色谱条件

Symmetry柱（C₁₈，4.6×250 mm，5um）；流动相：乙腈-甲醇-0.1%磷酸溶液（10：8.5：81.5）；检测波长210mm；流速0.4ml/mim柱温：40℃。

1.2.2供试品溶液的制备

取本品粉末约0.5g，精密称定，置具塞容量瓶中，精密加入20ml甲醇，密塞，称定重量，超声处理30mm，放置室温，再称定重量，用甲醇补足减失的重量，摇匀，滤过，取续滤液，即得。

1.2.3对照品溶液制备

精密称取苦杏仁苷对照品16.0150mg，置50ml容量瓶中，加甲醇溶解并稀释至刻度，摇匀，作为对照品贮备液，精密量取上述贮备液1ml置5ml量瓶中，加甲醇稀释至刻度，摇匀，作为对照品溶液。

1.2.4系统适用性试验

分别取苦杏仁苷对照品溶液、供试品溶液和缺苦杏仁的阴性空白溶液注入液相色谱仪，记录色谱（见图1～3）从图中可见，阴性空白色谱图在苦杏仁苷位置处无干扰峰，苦杏仁苷和其他相近的峰完全分离（分离度>1.5），理论塔板数以苦杏仁苷计算不低于4000。

1.2.5线性關系考察

分别精密吸取苦杏仁苷对照品贮备液（0.3203mg/m1）0.2ml、0.5ml、1.0ml、1.5ml、2.0ml到5ml容量瓶中，加甲醇溶解并稀释至刻度，按上述色谱条件测定，以峰面积为纵坐标，苦杏仁苷进样量（ug）为横坐标绘制标准曲线，得回归方程：y（苦杏仁苷）=2E+06x-46059，r=0.9999；苦杏仁苷进样量在0.1281ug～1.2812ug范围内与峰面积具有良好线性关系。

1.2.6精密度试验

精密吸取苦杏仁苷对照溶液（0.06406mg/ml）10 ul，分别进样5次，苦杏仁苷峰面积相对标准偏差（RSD）为0.36%，结果表明精密度良好。

1.2.7稳定性试验

取同一供试品溶液，分别于0、2、4、6、12小时进样10ul，苦杏仁苷峰面积RSD为1.00%，说明溶液在12小时内测定稳定。

1.2.8重复性试验

取同一批次供试品5份（160106），按2.2项下操作制得供试品溶液，按2.1项下色谱条件进样分析并记录峰面积，计算得每片含量依次为0.7615、0.7515、0.7585、0.7465、0.7366 mg，RSD为1.33%，结果表明本方法重复性良好。

1.2.9回收率试验

取6份已知含量的同一批样品（160106）各约0.25g，，精密称定，置25ml容量瓶中，加入适量对照品贮备液，按2.2项制备供试液，按2.1色谱条件进样，记录峰面积，计算回收率，结果平均回收率为100.3%，RSD为1.03%。（见表1）

1.2.10样品含量测定

依法制备供试品溶液，分别精密吸取对照品溶液和供试品溶液10ul，注入高效液相色谱仪，按上述方法测定，样品（160106）含苦杏仁苷为每片0.7509mg，桑姜感冒片平均片重为0.2650g。

2结论与讨论

（1）在试验过程中，参考有关资料笔者曾先后采用甲醇-水（18：82），乙腈-0.1%磷酸溶液（8：92）等作为流动相，结果发现采用乙腈-甲醇-0.1%磷酸溶液（10：8.5：81.5）作为流动相时，样品中待测成分峰形较好，与相邻峰的分离度达到要求，阴性样品中其他成分对待测成分无干扰。

（2）由于样品中成分较多，试验中发现在连续进样时，样品可能会出现峰形堆叠，影响苦杏仁昔峰形，可通过适当延长进样时间改善。