“激饮康”对热应激肉兔血清兔瘟抗体及补体C3、C4含量的影响

李清丰，赵川，黄光远，王红均，刘波，黄庆洲

（西南大学荣昌校区动物医学系，重庆 荣昌 402460）

“激饮康”对热应激肉兔血清兔瘟抗体及补体C3、C4含量的影响

李清丰，赵川，黄光远，王红均，刘波，黄庆洲*

（西南大学荣昌校区动物医学系，重庆 荣昌 402460）

为探讨“激饮康”对夏季热应激肉兔免疫机能的影响，以重庆荣昌夏季自然湿热环境为热应激源，选择 64 只 1 月龄健康伊拉兔，随机分为“激饮康”高（I）、中（II）、低剂量组（III）及热应激对照组（IV），于正式试验前1d接种兔瘟弱毒疫苗，观察试验后15d及30d时血清中兔瘟抗体及补体C3、C4含量的变化。结果表明:高温高湿环境下，在肉兔饮水中添加“激饮康”可提高肉兔血清特异性兔瘟抗体、血清重要补体成分的含量，增强肉兔热应激状态下的免疫能力。

兔；热应激；激饮康；抗体；补体

炎热夏季热应激常常是危害肉兔生产的重要环境因素，往往会引起肉兔免疫功能下降、抗病力减弱、肠道疾病等，发病率及死亡率显著增加[1-2]。为探讨“激饮康”对夏季高温时期肉兔免疫机能的影响，本试验在夏季刚断奶肉兔的饮水中添加“激饮康”后再接种兔瘟疫苗，观察免疫后不同时间点血清中兔瘟抗体、补体C3及C4含量的变化，旨在为降低热应激对肉兔免疫机能的危害提供新方法。

1 材料与方法

1.1 药品及试剂

1.1.1 中药 藿香、薄荷、石膏、黄芪、冰片、肉苁蓉等12味中药。

1.1.2 电解质 LCl、LHCO3、柠檬酸钠。

1.1.3 兔瘟疫苗 兔病毒性出血症灭活苗（南京天邦生物科技有限公司生产，批号：159142）。

1.1.4 免疫指标测定试剂盒 兔瘟抗体（RHDV Ab）ELISA试剂盒，主要包括RHDV Ab标准品、HRP标记兔瘟病毒抗原、兔瘟病毒抗原（批号：201509）；兔 C3、C4 ELISA试剂盒，主要包括C3、C4标准品，兔C3、C4抗体，HRP标记的 C3、C4抗体（生产批号：201509）。ELISA试剂盒均购于上海沪鼎生物科技有限公司。

1.2 动物 30日龄健康断奶伊拉仔兔64只，体重0.5～0.6kg/只，雌雄各半（未接种过疫苗）。

1.3 试验饲料 肉兔生长期配合饲料572（彭州某饲料有限公司生产），主要组成：豆粕、苜蓿草、麸皮、次粉、磷酸氢钙、大豆油、食盐、多种氨基酸、微量元素等。饲料成分分析保证值：粗蛋白质≥15.5%、粗纤维14.0%～25.0%、粗灰分≤11.0%，总磷≥0.4%、钙0.5%～1.5%、水溶性氯化物0.30%～0.80%、水分≤14%、赖氨酸≥0.7%。

1.4 方法

1.4.1“激饮康”的制备 “激饮康”饮水剂由中药及电解质两部分组成。中药部分：主要由藿香、薄荷、石膏、黄芪、冰片、肉苁蓉等12味中药按一定比例组成；清水浸泡过夜，水煎三次，每次40～60min，滤液合并，煮沸浓缩至生药1g/mL药液，分装成250mL/瓶，120℃灭菌30min，避光保存备用。电解质部分：LCl、LHCO3、柠檬酸钠等按比例混合后，分成30g/包密封备用。

1.4.2 动物饲养及分组 试验在西南大学荣昌校区实验动物房进行。用4层16位兔笼饲养，每位2只，自由采食与饮水，舍内自然通风。预试5d，采食、饮水无异常后转入正式试验。正式试验期间，每天6：00和18：00各喂料一次，喂料时根据上次喂料后兔的采食情况适当增减料量，保持自由采食状态。

正式试验前一天将30日龄仔兔随机分为4组，即“激饮康”高剂量组（I组）、中剂量组（II组）、低剂量组（III组）、热应激空白对照组（IV组）。每组16只，组内共设8个重复，每个重复2只。试验分两个阶段：第一阶段35～50日龄，第二阶段51～65日龄，试验时间30d。

1.4.3 疫苗接种 正式试验开始前1d（34日龄）于兔颈部皮下接种兔瘟灭活疫苗（1mL/只）；正式试验第8d皮下接种巴氏杆菌疫苗（1mL/只）。

1.4.4“激饮康”使用方法 正式试验开始后，I组、II组、III组每天在每千克饮水中分别添加“激饮康”中药部分 4mL、2mL、1mL 与电解质 6g、3g、1.5g，IV 组饮水中不添加任何药物。

1.4.5 温湿指数测定 在兔舍中部及四个角落内上方距地面1.5m高处悬挂干湿温度计，试验期间每日7：00、11：00、15：00、19：00、23：00 记录干湿球温度。按Marai[3]提出的湿热指数（THI）作为肉兔热应激状态判断标准，THI计算公式：

式中db表示每天干球温度平均值，RH表示每天平均相对湿度/100。当THI＜27.8时，兔无热应激，THI在 27.8～28.9之间为轻微热应激，THI在 28.9～30.0之间处于中度热应激，THI＞30时为重度热应激。1.4.6 血样采集 在肉兔50、65日龄早晨空腹时，每组随机选取8只，后肢静脉采肝素抗凝血2mL与非抗凝血3mL，其中抗凝血用于淋巴细胞计数；非抗凝血自然凝固后，4℃下4000r/min离心15min，收集血清，分装于0.5mL EP管，-40℃保存备测。

1.4.7 兔血液淋巴细胞计数、血清兔瘟抗体（RHDV Ab）及补体C3、C4含量的测定 淋巴细胞计数采用五分类全自动血细胞计数仪进行；抗体及补体含量测定采用双抗体夹心ELISA标准试剂盒检测，具体操作步骤见试剂盒使用说明书。

2 结果

2.1 试验期间兔舍的温度及湿热指数变化 试验第一阶段（15 d），每天平均温度最低 24.7℃，最高35.5℃，每天平均湿度最低62.33%，最高87.51%，试验兔处于轻、中、重度热应激的天数分别为5、7、2d，热应激天数百分率达93.33%；试验第二阶段（15d），每天平均温度最低25.3℃，最高32.8℃，每天平均湿度最低67.54%，最高91.23%，试验兔处于轻、中、重度热应激天数分别为5、2、1d，热应激天数百分率达53.33%。结果见表1。

表1 兔热应激程度及环境温、湿度统计

2.2 “激饮康”对兔血液中淋巴细胞数量及兔瘟抗体含量的影响 结果见表2。对表中数据统计分析表明，兔瘟抗体含量在50、65日龄时，I组极显著高于IV 组（P＜0.01）；II、III组与 IV 组间差异不显著（P＞0.05）。50日龄时，I、II组淋巴细胞数量显著或极显著高于IV组（P＜0.01或0.05），但III组与 IV组间差异不显著（P＞0.05）；65 日龄时，I、II、III组均极显著高于IV 组（P＜0.01）。

表2 不同日龄兔血液中淋巴细胞数量及兔瘟抗体含量的变化

2.3 “激饮康”对兔血清补体C3、C4含量的影响 表3表明，在兔饮水中添加“激饮康”，试验第一阶段及第二阶段末，I、II、III组兔血清中的 C3、C4 含量均显著或极显著高于IV组（P＜0.01或0.05），且高剂量组明显高于中、低剂量组。

表3 不同日龄兔血清补体C3、C4含量的变化 μg/mL

3 结论与分析

本试验在重庆地区7、8月间进行，此时正值高温、高湿季节，试验期间肉兔处于较严重的热应激状态。观察该环境条件下“激饮康”对肉兔兔瘟疫苗免疫应答的影响，对于缓解热应激对肉兔的免疫危害具有现实意义。

研究表明，动物遭受热应激时，一方面热应激使机体产生细胞毒作用，抑制了淋巴细胞激活因子、细胞生长因子及抗体的产生，另一方面使下丘脑-垂体-肾上腺皮质轴机能亢进，糖皮质激素分泌增多，导致淋巴细胞、巨噬细胞数量减少，结果使动物抗病力减弱、发病率升高[4]。刘思当等[5]发现热应激处理后的鸡淋巴细胞、巨噬细胞的数量减少，抗体被显著抑制。赵川等[6]发现在热应激后期肉兔非特异性指标C3水平减低。本试验在肉兔热应激阶段的饮水中持续添加“激饮康”，发现接种兔瘟疫苗15d及30d后外周血液中的淋巴细胞数量明显升高，血清中特异性RHDV Ab水平及补体C3、C4含量也明显高于未添加组，且呈一定的量效关系，说明“激饮康”能增强热应激状态下肉兔的特异性及非特异性免疫能力。

“激饮康”饮水剂是由中药藿香、薄荷、石膏、黄芪、冰片、肉苁蓉等及电解质 LCl、LHCO3、柠檬酸钠等按比例组成。电解质对于热应激状态下补充机体水分、电解质过度丢失，维持内环境稳态及新陈代谢正常进行具有重要意义。按照中医理论，湿热病证当以清热祛湿为治则，方中藿香、薄荷、石膏等兼具化湿和胃、祛暑解表、清热泻火之功效，同时配以黄芪、肉苁蓉等达到补气、滋肾阴、补肾阳的作用。现代药理学研究也表明，黄芪、肉苁蓉等补气壮阳类中药与动物的免疫机能密切相关。

补体是体液中一组具有酶原活性的不耐热球蛋白，可通过经典途径、旁路途径激活后参与溶菌及溶解病毒作用，调理吞噬细胞吞噬、炎症介导、免疫粘附作用等多种非特异免疫功能，其血清含量的升高是机体非特殊免疫功能增强的重要客观指标[7]。在补体系统中，C3是浓度最高、最重要的一个组分，是补体系统中最重要的非特异性免疫因子；C4分子结构与C3相似，可通过经典途径生成C3转化酶促进C3的活性[8]。“激饮康”能提高热应激状态下肉兔血清中补体C3、C4的含量，表明其可加强补体系统功能，提高机体的非特异性免疫水平。

[1]杨奉珠，郭志强，谢晓红，等.营养调控兔热应激的研究进展[J].中国草食动物，2011，31（4）：68-69.

[2]李振.抗热应激剂对獭兔生产性能和血液生化指标的影响[J].中国饲料，2013（19）：18-23.

[3] Marai I F M，Habeeb A A M，Gad A E.Rabbit′productive，reproductive and physiological performance traits as affected by heat stress：a review[J].Livestock Production Science，2002，78：71-90.

[4]魏学良，张家骅.高温环境对奶牛生理活动及生产性能的影响[J].中国农学通报，2005（5）：25.

[5]刘思当，宁章勇，谭勋，等.实验性热应激对肉仔鸡免疫器官的影响[J].中国兽医学报，2003（3）：281-283.

[6]赵川，黄光远，熊权鑫，等.急性持续热应激对兔血浆补体C3、溶菌酶含量及抗菌活性的影响[J].四川畜牧兽医，2015，42（12）：22-25.

[7]王志平，张士璀，王光锋，等.鱼类补体系统成分及补体特异性和功能的研究进展[J].水生生物学报，2008（5）：760-769.

[8] 昝琦，刘欣，逄越，等.补体C3结构与功能研究进展[J].中国免疫学杂志，2014，30（4）：549-553.

Effect of“Jiyinkang”on Serum RHDV Antibody and Alexin C3、C4 in Heat Stress Rabbits

Li Qingfeng，Zhao Chuan，Huang Guangyuan，et al.
（Department of Veterinary Medicine of Rongchang Campus，Southwest University，Chongqing Rongchang 402460，China）

In order to explore the effect of medicament named “Jiyinkang”on the immune function of heat stress meat rabbits，the natural hot and humid environment in Chongqing Rongchang was as heat stress source，64 one month old health IRA rabbits were randomly divided into four groups：“Jiyinkang”high（I），medium（II），low dose group（III）and heat stress control group（IV），a day before the official trial，the rabbits hemorrhagic disease attenuated vaccine was in oculated，and observed the changes of serum antibody and alexin C3，C4 content after 15d and 30d.The results showed that，in the high temperature and high humidity environment，adding “Jiyinkang”could improve the rabbit specific serum RHD antibody，serum alexin content，and enhance the rabbit immunity under the heat stress.

Rabbit；Heat stress；Jiyinkang；Antibody；Alexin

S858.291.5

B

1001-8964（2017）07-0027-03

2017-04-21

李清丰（1993-），男，四川阆中人，在读硕士，研究方向:动物热应激。

*通讯作者：黄庆洲（1966-），副教授，主要从事动物生理学教学及科研工作。