不同取血方式及性别对成年Wistar大鼠11种血液生物化学指标的影响

田 蜜 蒋雪云 曹丽歌 罗 葵 薛 冰*

(1.首都医科大学医学实验与测试中心，北京 100069；2. 首都医科大学化学生物学与药学院，北京 100069)



不同取血方式及性别对成年Wistar大鼠11种血液生物化学指标的影响

田 蜜1蒋雪云2曹丽歌1罗 葵1薛 冰1*

(1.首都医科大学医学实验与测试中心，北京 100069；2. 首都医科大学化学生物学与药学院，北京 100069)

目的 探讨尾静脉、腹主动脉和下腔静脉取血对成年Wistar大鼠部分血液生物化学指标的影响。方法 34只成年Wistar大鼠按性别等分2组，各组麻醉后依次采集尾静脉，腹主动脉和下腔静脉血，血清用7180E型全自动生物化学分析仪测定11种血液生物化学指标，包括丙氨酸氨基转移酶(alanine aminotransferase， ALT)、门冬氨酸氨基转移酶(aspartate aminotransferase， AST)、尿素氮(urea nitrogen， BUN)、血糖(glucose， GLU)、总蛋白(total protein， TP)、白蛋白(albumin， ALB)、血肌酐(creatinine， Cr)、三酰甘油(triglyceride， TG)、总胆固醇(total cholesterol， TC)、高密度脂蛋白胆固醇(high density lipoprotein-cholesterol， HDL-C)、低密度脂蛋白胆固醇(low density lipoprotein-cholesterol， LDL-C)。结果 在雌性Wistar大鼠中，尾静脉和下腔静脉血中GLU，TP和Cr差异有统计学意义(P<0.05)；尾静脉和腹主动脉血中GLU、TP、ALB、Cr、TG、TC和HDL-C差异有统计学意义(P<0.05)。雄性Wistar大鼠中，尾静脉和下腔静脉血中ALT、AST、GLU、TP和Cr差异有统计学意义(P<0.05)；尾静脉和腹主动脉血中ALT、AST、GLU、TP、ALB、TG、TC、HDL-C和LDL-C差异有统计学意义(P<0.05)。不同性别之间：尾静脉取血时AST、TC和LDL-C差异有统计学意义(P<0.05)；下腔静脉取血时TP、ALB、Cr、TG、TC和LDL-C差异有统计学意义(P<0.05)；腹主动脉取血时TP、ALB、Cr、TC和LDL-C差异有统计学意义(P<0.05)。结论 不同取血方式和性别会影响成年Wistar大鼠的血液生物化学指标。

尾静脉；腹主动脉；下腔静脉；生物化学指标；Wistar大鼠

大鼠的血液生物化学指标可表征其肝功能、肾功能，血糖和血脂浓度等，在医学研究中有广泛的用途[1]。但这些指标会受到多种因素的影响，包括年龄[1-3]、性别[1，3-5]、是否麻醉[6-8]、取血方式[6，9-10]以及动静脉血的种类[9，11-12]等。尾静脉取血是重要的取血方式，优点是对动物的损伤较小，采样方便且可连续多次采样，在研究中应用广泛[13]。但尾静脉取血通常需要挤压尾部血管和组织，其血液生物化学指标是否与静脉或动脉取血结果相当尚无研究报道。本研究比较了尾静脉取血，下腔静脉和腹主动脉取血所测得11种生物化学指标的差异，可为选择不同取血方式及动物性别时提供依据。

1 材料与方法

1.1 实验动物

34只12周龄的Wistar成年大鼠由北京维通利华实验动物技术有限公司提供，雄性体质量(231±15)g，雌性体质量(210±5)g，动物生产合格证号：SCXK(京)2012-0001，首都医科大学实验动物SPF级动物实验室[合格证号：SYXK(京)2010-0020]饲养。室内温度(23±2) ℃，相对湿度(50±20)%。北京科澳协力饲料有限公司真空包装无菌饲料，合格证号：SCXK(京)2014-0010。

1.2 仪器与试剂

日本日立公司7180E全自动生物化学分析仪、离心机(DT5-6，北京时代北利离心机有限公司)、BD公司真空采血管(含分离胶)、BS124S天平(型号BS124S，赛多利斯)。

谷氨酸氨基转氨酶(alanine aminotransferase， ALT)(批号20160201，首医科技)、门冬氨酸氨基转移酶(aspartate aminotransferase， AST)(批号21060201，首医科技)、血糖(glucose， GLU)(批号20160302，首医科技)、总蛋白(total protein， TP)(批号20151125，首医科技)、白蛋白(albumin， ALB)(批号20160323，首医科技)、尿素氮(urea nitrogen， BUN)(批号20160302，首医科技)、血肌酐(creatinine， Cr)(批号20160308，首医科技)、总胆固醇(total cholesterol， TC)(批号20151111，首医科技)、三酰甘油(triglyceride， TG)(批号20151116，首医科技)、高密度脂蛋白胆固醇(high density lipoprotein-cholesterol， HDL-C)(批号20160205，首医科技)、低密度脂蛋白胆固醇(low density lipoprotein-cholesterol， LDL-C)(批号20160323，首医科技)、高低密度脂蛋白定标液(批号20160203，首医科技)由北京首医临床医学科技有限公司提供；生物化学质控(中值批号174787，高值批号174801，上海罗氏公司)及定标液(批号177960，上海罗氏公司)由罗氏诊断试剂提供；戊巴比妥(德国Merk公司)。

1.3 试剂配制

戊巴比妥在实验前用0.9%(质量分数)氯化钠注射液配制成1%(质量分数)戊巴比妥溶液，麻醉剂量：5 mL/kg体质量。生物化学试剂直接上机使用，定标液，质控品参照说明书配制。

1.4 血液样本采集

实验动物购入后称质量雌雄分笼，先观察3～4 d。实验前12 h禁食，采血前按雌雄分别称质量编号，戊巴比妥腹腔注射麻醉。仰卧位翻正反射消失后，先消毒大鼠尾部，用手术剪剪掉尾尖2～3 mm，用手从尾根向下轻撸，将血收集于离心管中至0.8 mL。将大鼠仰卧消毒后用手术剪刀沿腹正中线剪开腹腔，用小镊子轻轻扒开血管周围脂肪，再用棉球把覆盖在血管上的多余脂肪擦净，找到下腔静脉用5 mL注射器采血1.5 mL，装入真空采血管。用棉球按压采血点止血，再找到腹主动脉用真空采血管直接取动脉血1.5 mL。3种血样分别标记，静置30 min，3 000 r/min离心，吸取血清400 μL测定生物化学指标。

仪器定标后使用质控品进行质量控制，中、高浓度质控品各测定3次，全部在合格范围内，结果见表1。

1.5 血清生物化学指标测定

本研究共测定11项生物化学指标，包括：ALT、AST、BUN、GLU、TP、ALB、Cr、TG、TC、HDL-C、LDL-C。

1.6 统计学方法

2 结果

3种取血方式所得血清的11种生物化学指标结果见表2。雌性Wistar大鼠不同取血方式之间的比较，尾静脉和下腔静脉血中GLU，TP和Cr差异有统计学意义(P<0.05)；下腔静脉和腹主动脉血中GLU和TP差异有统计学意义(P<0.05)；尾静脉和腹主动脉血中GLU、TP、ALB、Cr、TG、TC和HDL-C差异有统计学意义。雄性Wistar大鼠不同取血方式之间的比较，尾静脉和下腔静脉血中ALT、AST、GLU、TP和Cr差异有统计学意义(P<0.05)；下腔静脉和腹主动脉血中GLU和TP差异有统计学意义(P<0.05)；尾静脉和腹主动脉血中ALT、AST、GLU、TP、ALB、TG、TC、HDL-C和LDL-C差异有统计学意义(P<0.05)。相同取血方式，不同性别生物化学指标的比较，尾静脉取血时，不同性别大鼠的AST、TC和LDL-C差异有统计学意义(P<0.05)；下腔静脉取血时，不同性别大鼠的TP、ALB、Cr、TG、TC和LDL-C差异有统计学意义(P<0.05)；腹主动脉取血时，不同性别大鼠的TP、ALB、Cr、TC和LDL-C差异有统计学意义(P<0.05)。

表1 11种生物化学指标的质控结果

*Qualification rate=100%× number of quality control samples within the acceptable range/number of total quality control samples; ALT:alanine aminotransferase；AST:aspartate aminotransferase；GLU:glucose；TP:total protein；ALB:albumin；BUN:urea nitrogen；Cr:creatinine；TC:total cholesterol；TG:triglyceride；HDL-C:high density lipoprotein-cholesterol；LDL-C:low density lipoprotein-cholesterol.

表2 不同取血方式对Wistar大鼠11种生物化学指标的影响(17只雄性和17只雌性)

*P<0.05vsinferiorvena cave with the same gender;#P<0.05vsabdominal aorta with the same gender;△P<0.05vsthe same blood sampling method in different gender group. ALT:alanine aminotransferase；AST:aspartate aminotransferase；GLU:glucose；TP:total protein；ALB:albumin；BUN:urea nitrogen；Cr:creatinine；TC:total cholesterol；TG:triglyceride；HDL-C:high density lipoprotein-cholesterol；LDL-C:low density lipoprotein-cholesterol.

3 讨论

不同性别的大鼠，各种取血方式的ALB、Cr、TC和LDL-C均差异有统计学意义(P<0.05)，这与部分研究报道相似[1-3]，与部分研究相异[4-5]。此外，尾静脉取血时雌雄大鼠的AST、TC和LDL-C差异有统计学意义(P<0.05)，TC和AST的性别差异与采集腹主动脉血[1]，眼眶静脉取血[3]和颈静脉取血[2]所得结果一致，而LDL-C的差别尚未见文献报道。下腔静脉取血时雌雄大鼠的TP、ALB、Cr、TG、TC和LDL-C差异有统计学意义(P<0.05)，除LDL-C无文献报道外，其余结果均与文献[2-3， 5]中眼眶静脉取血的结果相似。腹主动脉取血时雌雄大鼠的TP、ALB、Cr、TC和LDL-C差异有统计学意义，除了LDL-C尚无研究外，其余结果均与文献中腹主动脉取血的结果相似[1-2， 4]。

动静脉血的生物化学指标基本相同，动脉血中的TP值小于静脉血，这与曹丽歌等[9]的结果相同而与严妍等[11]的结果相异，造成这一结果的原因目前尚不清楚，仍需进一步研究。而动脉血中的GLU大于静脉血，这与付晓[12]的研究结果相同。动脉血将GLU等养料输送到组织，其中的部分GLU被组织吸收利用而导致血中的GLU浓度降低。雌性大鼠中，尾静脉中GLU、TP和Cr比下腔静脉血中的浓度都要低，这可能是因为尾静脉中的血经过了最长的运输过程，血中的GLU被组织逐渐消耗至最低浓度，同时组织释放的TP和Cr也最大程度地累积在血中。雄性大鼠中，尾静脉和下腔静脉血中差异有统计学意义的指标多了ALT和AST两项，其原因尚待深入研究。

本研究的不足之处：样本是在麻醉后的不同时间点依次采集的，有研究[13-14]表明，随着麻醉时间的延长，BUN和GLU会上升，TP和ALB则会下降[7]。因此，麻醉后的不同取血时间可能对结果产生影响。此外，不同的麻醉剂也会对生物化学值产生不同的影响[7]。由于本研究的样本数较小，各组只有17只动物，加之部分检测项目的个体间变异较大，所得结果仍需更大样本的研究加以证实。

不同采样方式和性别均会影响Wistar大鼠的血生物化学指标，在研究时应加以考虑以获得准确科学的研究数据。

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编辑 慕 萌

Influence of sampling methods and gender on eleven blood biochemical indicators in adult Wistar rat

Tian Mi1， Jiang Xueyun2， Cao Lige1， Luo Kui1，Xue Bing1*

(1.MedicalExperimentandTestCenter，CapitalMedicalUniversity，Beijing100069，China；2.CollegeofPharmaceuticalScience，CapitalMedicalUniversity，Beijing100069，China)

Objective To establish the influence of different sampling methods and gender on 11 biochemical indicators in Wistar rat. Methods The blood of adult Wistar rats (17 males and 17 females) were collected from caudal vein， abdominal aorta and inferior vena cava， then 11 biochemical indicators including alanine aminotransferase (ALT)， aspartate aminotransferase(AST)， urea nitrogen (BUN)， glucose (GLU)， total protein (TP)， albumin(ALB)， creatinine (Cr)， triglyceride (TG)， total cholesterol (TC)， high-density lipoprotein cholesterol (HDL-C) and low-density lipoprotein cholesterol (LDL-C) were analyzed by 7180E Automatic Biochemical Analyzer. Means comparison were performed byt-test or Mann-Whitney U-test depending on the distribution of the data. A value < 0.05 was regarded as statistical significance.Results In female rats， significant variation was observed on the value of GLU， TP and Cr between caudal vein and inferior vena cava serums; and significant difference was observed on the values of GLU， TP， ALB， Cr， TG， TC and HDL-C between caudal vein and abdominal aorta serums. In male rats， the value of ALT， AST， GLU， TP and Cr were significantly different between caudal vein and inferior vena cava serums; and significant difference was observed on the values of ALT， AST， GLU， TP， ALB， TG， TC， HDL-C and LDL-C between caudal vein and abdominal aorta serums. Between male and female rats， the value of AST， TC and LDL-C were significantly different in caudal vein serum; and significant variation on the value of TP， ALB， Cr， TG， TC and LDL-C were found; and the value of TP， ALB， Cr， TC and LDL-C were statistically different. Conclusion Researchers should pay more attention to the variation of biochemical indicators caused by the different sampling methods and gender in Wistar rat.

caudal vein; abdominal aorta; inferior vena cava; biochemical indicator; wistar rat

首都医科大学校长基金技术类 (2015JS29)。This study was supported by Principal Fund of Capital Medical University (2015JS29).

时间：2017-07-16 17∶16 网络出版地址：http://kns.cnki.net/kcms/detail/11.3662.r.20170716.1716.008.html

10.3969/j.issn.1006-7795.2017.04.016]

R917

2016-09-06)

*Corresponding author， E-mail：xuebing-bj@126.com