离子色谱法测定豇豆和苦瓜中对氯苯氧乙酸的残留量

谢艳丽，赵振东，冯玉红，章程辉

（1.海南大学分析测试中心，海口570228； 2.海南大学环境与植物保护学院，海口570228；3.农业部农产品质量安全风险评估实验室（海口），海口570228）

离子色谱法测定豇豆和苦瓜中对氯苯氧乙酸的残留量

谢艳丽1，2，3，赵振东1，3，冯玉红1，3，章程辉3＊

（1.海南大学分析测试中心，海口570228； 2.海南大学环境与植物保护学院，海口570228；3.农业部农产品质量安全风险评估实验室（海口），海口570228）

采用离子色谱法测定豇豆和苦瓜中对氯苯氧乙酸的残留量。豇豆和苦瓜样品采用1.8mmol·L－1碳酸钠－1.7 mmol·L－1碳酸氢钠溶液超声提取，固相萃取C18小柱净化。以1.8mmol·L－1碳酸钠－1.7mmol·L－1碳酸氢钠溶液为流动相，紫外检测器测定。对氯苯氧乙酸的质量浓度在0.05～25.0mg·L－1内与其对应的峰面积呈线性关系，对氯苯氧乙酸在豇豆和苦瓜中的检出限（3S／N）依次为0.04，0.03mg·kg－1。以空白样品为基体进行加标回收试验，所得回收率在96.7%～109%之间，测定值的相对标准偏差（n＝5）在4.7%～7.7%之间。

离子色谱法；对氯苯氧乙酸；豇豆；苦瓜

对氯苯氧乙酸，又称番茄灵、防落素，是一种内吸型多功能植物生长调节剂，用于防止茄果类蔬菜落花落果，抑制豆类生根，促进果实发育，提早成熟，诱导无核果，改善品质等［18］，可用于豇豆、番茄、黄瓜、冬瓜等蔬菜以及果树中，还可用做医药中间体。对氯苯氧乙酸中等毒性，可燃，燃烧产生有毒氯化物气体。目前蔬菜中对氯苯氧乙酸残留量的测定主要有气相色谱－质谱法［2，4］、气相色谱法［5］、高效液相色谱法［7，9］和液相色谱－质谱法［67］。气相色谱法、气相色谱－质谱法、液相色谱法和液相色谱－质谱法的优点是准确度高、灵敏度好，缺点是前处理要用到大量的有机溶剂，对试验人员的健康不利，也容易污染环境，且前处理步骤繁琐，批量检测工作量过大，因此建立一种简单可行又对环境友好的检测方法非常必要。离子色谱法是一种新型环保的分析方法，目前已有在食品、环境等领域中的应用报道［1014］。文献［15］用离子色谱法测定了土壤中对氯苯氧乙酸的残留量。

本工作建立了离子色谱法测定豇豆和苦瓜中对氯苯氧乙酸残留量的分析方法，此方法对环境友好，灵敏度高，方法准确可靠，简单易操作，适合批量检测。

1 试验部分

1.1 仪器与试剂

CIC 300型离子色谱仪，配紫外检测器；SB－5200DT型超声波清洗器；岛津AUW 220D型电子天平（感量0.01 mg）；离子色谱专用固相萃取（SPE）C18小柱（300mg）。

对氯苯氧乙酸标准储备溶液：1.000g·L－1，称取对氯苯氧乙酸标准品（纯度为99.5%）10.05mg于10mL容量瓶中，用水溶解并稀释至刻度。

碳酸钠、碳酸氢钠均为分析纯；水为GB／T 6682－2008《分析实验室用水规格和试验方法》规定的一级水。

1.2 仪器工作条件

Dionex IonPac AG4A－SC保护柱（4 mm× 50mm），AS4A－SC分离柱（4mm×250mm）；柱温35℃；流动相为1.8 mmol·L－1碳酸钠－1.7mmol·L－1碳酸氢钠溶液，等度淋洗；流量2mL·min－1；进样量50μL；紫外检测器吸收波长228nm。

1.3 试验方法

称取粉碎后的豇豆或苦瓜试样5.00g于150mL具塞三角烧瓶中，加入1.8mol·L－1碳酸钠－1.7mmol·L－1碳酸氢钠溶液50mL，密封超声提取30min，移取20mL溶液至50mL离心管中，以10 000r·min－1转速离心20min。取上清液经SPE C18小柱过滤，滤液用0.45μm水系滤膜针头滤器过滤后，按仪器工作条件进行测定。

2 结果与讨论

2.1 色谱行为

试验选择了豇豆和苦瓜两种蔬菜作为研究基质，在豇豆和苦瓜中加入2.0mg·kg－1对氯苯氧乙酸标准品，加标样品的离子色谱图见图1。

图1 加标样品色谱图Fig.1 Chromatograms of spiked samples

由图1可知：对氯苯氧乙酸保留时间为5.59min，基质峰与对氯苯氧乙酸能完全分开。

2.2 色谱条件的选择

对氯苯氧乙酸在碱性环境中以对氯苯氧乙酸根阴离子的形式存在，试验选择一款低容量碳酸盐体系的阴离子色谱柱。

淋洗液流量越高，峰形越好，灵敏度越高，目标物出峰越快，分析速率也越快，但分离度会降低，在综合考虑了分离度、峰形、灵敏度等前提下，试验选择淋洗液流量为2mL·min－1。

2.3 超声提取时间的选择

称取18份空白豇豆样品，每份添加2.0mg· kg－1对氯苯氧乙酸标准品，试验考察了超声提取时间依次为5，10，15，20，25，30，40，60，90min时对测定的影响，其结果见图2。

由图2可知：随着超声提取时间的增加，对氯苯氧乙酸在豇豆中的回收率呈增加的趋势，当提取时间达到30min左右时，回收率趋于稳定。试验选择超声提取时间为30min。

图2 提取时间对回收率的影响Fig.2 Effect of extraction time on recovery

2.4 干扰试验

豇豆和苦瓜中可能存在吲哚乙酸、吲哚丁酸、硝酸盐、亚硝酸盐等干扰物，试验以吲哚乙酸、吲哚丁酸及常规阴离子F－、Cl－、NO2－、NO3－、Br－、SO4－、PO43－进行干扰试验。结果表明：在各离子质量浓度不大于50mg·L－1时，对氯苯氧乙酸与常规阴离子可以有效分离，吲哚乙酸、吲哚丁酸在1.2节所列的条件下不出峰，因此对目标物的检测没有影响。

2.5 线性回归方程和检出限

移取1.000g·L－1对氯苯氧乙酸标准储备溶液适量，稀释后配制成质量浓度依次为0.05，0.1，0.25，1.0，5.0，10.0，25.0mg·L－1的对氯苯氧乙酸标准溶液。按仪器工作条件对标准溶液系列进行测定（在该条件下，对氯苯氧乙酸的保留时间为5.75min）。结果表明：对氯苯氧乙酸的质量浓度在0.05～25.0mg·L－1内与其对应的峰面积呈线性关系，线性回归方程为y＝8.480×104x＋1.124× 103，相关系数为1.000。

在空白基质中添加对氯苯氧乙酸，以3倍信噪比为检出限，以10倍信噪比为测定下限。当样品称样量为5.0g，最后样品的定容体积为10.0mL时，得到方法中对氯苯氧乙酸在豇豆和苦瓜中的检出限（3S／N）依次为0.04，0.03mg·kg－1；在豇豆和苦瓜中的测定下限（10S／N）依次为0.15，0.1mg· kg－1。

2.6 方法的精密度与回收试验

在空白豇豆和空白苦瓜样品中，分别添加0.5，2.0，10.0mg·kg－1的对氯苯氧乙酸标准品，每个添加水平5个平行样品，按试验方法进行测定，其结果见表1。

表1 精密度与回收试验结果（n＝5）Tab.1 Results of tests for precision and recovery（n＝5）

由表1可知：对氯苯氧乙酸在豇豆和苦瓜中的回收率在96.7%～109%之间，相对标准偏差（RSD）在4.7%～7.7%之间。回收率与精密度测定结果均符合农药残留试验准则［16］对室内检测分析的要求。

2.7 样品分析

从海口、澄迈、文昌、屯昌、三亚等5个海南主要的蔬菜种植区选取了25个种植基地，采集了51种豇豆样品和46种苦瓜样品，按试验方法进行测定，均未检出对氯苯氧乙酸。试验结果表明：海南的豇豆、苦瓜在种植过程中可能没有施用植物生长调节剂对氯苯氧乙酸，也可能是对氯苯氧乙酸在豇豆和苦瓜中的残留量较小，低于方法的检出限。

本工作采用离子色谱法测定豇豆和苦瓜中对氯苯氧乙酸残留量，对氯苯氧乙酸可与常规阴离子分离，也可与豇豆、苦瓜基质中的其他干扰成分达到基线分离，方法的准确度与精密度符合农药残留试验准则的要求。本方法简单、快速、适合批量检测，试验中未使用有机溶剂，对环境友好，可用作实验室检测豇豆和苦瓜中对氯苯氧乙酸的常规方法。本方法对其他基质中对氯苯氧乙酸含量的测定，尚需做进一步的研究。

［1］ LI X X，KOBAYASHI F，LKEURAC H，et al.Chlorophenoxyacetic acid and chloropyridylphenylurea accelerate translocation of photoassimilates to parthenocarpic and seeded fruits of muskmelon（Cucumis melo）［J］.Journal of Plant Physiology，2011，168：920－926.

［2］ SINGH H K，SAQUIB M，HAQUE M M，et al.Heterogeneous photocatalysed degradation of 4－chlorophenoxyacetic acid in aqueous suspensions［J］.Journal of Hazardous Materials，2007，142（1／2）：374－380.

［3］ FU F F，XIAO L X，WANG W，et al.Study on the degradation of 2，4－dichlorophenoxyacetic acid（2，4－D）and 2－methyl－4－chloro－phenoxyacetic sodium（MCPA sodium）in natural agriculture－soils of Fuzhou［J］.Science of The Total Environment，2009，407（6）：1998－2003.

［4］ 彭敏，刘传生.固相萃取－柱前衍生－气相色谱－质谱联用法测定水中2，4－滴和灭草松［J］.理化检验－化学分册，2009，45（7）：791－793.

［5］ 匡华，储晓刚，侯玉霞，等.气相色谱法同时测定大豆中13种苯氧羧酸类除草剂的残留量［J］.中国食品卫生杂志，2006，18（6）：503－508.

［6］ 冯家望，吴洁珊，曹桂云，等.高效液相色谱－串联质谱法测定食品中对氯苯氧乙酸的残留量［J］.理化检验－化学分册，2012，48（10）：1219－1221.

［7］ 钟莉萍，徐敦明，方恩华，等.高效液相色谱法和高效液相色谱－质谱／质谱法测定荔枝中对氯苯氧乙酸（钠）［J］.检验检疫学刊，2010年，20（2）：24－27.

［8］ 潘雪峰，陈樱玉.对氯苯氧乙酸液相色谱分析［J］.现代农药，2011，10（2）：30－31.

［9］ 王一茜，张广华，赵学志，等.对氯苯氧乙酸钠在绿豆芽中的残留量分析［J］.食品科技，2013，38（10）：316－319.

［10］ 戴达勇，杨英桂，贺万鑫.离子色谱法同时测定沙棘果粉中7种有机酸含量［J］.理化检验－化学分册，2015，51（3）：304－306.

［11］ 贾娜，韩梅，李科，等.离子色谱－电感耦合等离子体质谱法测定地下水中4种形态砷的含量［J］.理化检验－化学分册，2016，52（3）：292－295.

［12］ GUO D D，LOU C Y，ZHANG P M，et al.Polystyrene－divinylbenzene－glycidyl methacrylate stationary phase grafted with poly（amidoamine）dendrimers for ion chromatography［J］.Journal of Chromatography A，2016，1456：113－122.

［13］ NI C Z，ZHU B H，WANG N N，et al.Simple column－switching ion chromatography method for determining eight monosaccharides and oligosaccharides in honeydew and nectar［J］.Food Chemistry，2016，194：555－560.

［14］ JIANG Z Z，WANG Y F，CHEN R R.Rapid analysis of volatile fatty acids in feces by headspace gas chromatography tandem mass spectrometry［J］.Chinese Journal of Analytical Chemistry，2014，42（3）：429－435.

［15］ 裘亚均，徐育，张佑球，等.离子色谱法电导检测测定土壤中的对氯苯氧乙酸［J］.宁波高等专科学校学报，2001，13（增1）：155－158.

［16］ NY／T 788－2004 农药残留试验准则［S］.

IC Determination of Residual Amount of 4－Chlorophenoxyacetic Acid in Cowpea and Bitter Gourd

XIE Yanli1，2，3，ZHAO Zhendong1，3，FENG Yuhong1，3，ZHANG Chenghui3＊
（1.Analysis and Testing Center，Hainan University，Haikou570228，China；2.College of Environment and Plant Protection，Hainan University，Haikou570228，China；3.Laboratory of Quality and Safety Risk Assessment for Agro－products（Haikou），Ministry of Agriculture，Haikou570228，China）

IC was applied to the determination of residual amount of 4－chlorophenoxyacetic acid in cowpea and bitter gourd.The sample of cowpea and bitter gourd was extracted ultrasonically with mixture of 1.8mmol·L－1Na2CO3and 1.7mmol·L－1NaHCO3solution，and then purified with SPE C18colunm.Mixture of 1.8mmol·L－1Na2CO3and 1.7 mmol·L－1NaHCO3solution was used as mobile phase，and UV detector was used in determination.Linear relationship between values of peak area and mass concentration of 4－chlorophenoxyacetic acid was kept in the range of 0.05－25.0mg·L－1，with detection limits（3S／N）in cowpea and bitter gourd of 0.04，0.03mg·kg－1respectively.On the base of blank sample，test for recovery was made by standard addition method；values of recovery found were in the range of 96.7%－109%，with RSD′s（n＝5）in the range of 4.7%－7.7%.

IC；4－chlorophenoxyacetic acid；cowpea；bitter gourd

O657.7

A

1001－4020（2017）05－0594－04

10.11973／lhjy－hx201705024

2016－04－22

国家重大科学仪器设备开发专项（2012YQ09022910）；海南省自然科学基金（214019）

谢艳丽（1976－），女，河南洛阳人，高级实验师，主要从事色谱研究工作

＊通信联系人。zchlm＠163.com