猪瘟疫苗免疫血清ELISA抗体测定及分析

魏 凤，张文通，李 峰，沈志强,

（1.山东省滨州畜牧兽医研究院，山东 滨州 256600；2.山东绿都生物科技有限公司，山东 滨州 256600）

猪瘟疫苗免疫血清ELISA抗体测定及分析

魏 凤1，张文通2，李 峰1，沈志强1,2

（1.山东省滨州畜牧兽医研究院，山东 滨州 256600；2.山东绿都生物科技有限公司，山东 滨州 256600）

为掌握鲁北区域猪瘟免疫情况，采用ELISA抗体检测技术，对本单位于2016年收集1 902份猪血清进行检测。结果显示：鲁北区域中大型规模猪场猪瘟ELISA抗体阳性率高于小型养猪场及散养户。分析结果将为本区域防控猪瘟提供理论支撑。

猪瘟；ELISA抗体；检测结果

猪瘟（Classical swine fever，CSF）是由猪瘟病毒（Classical swine fever virus，CSFV）引起的，以淋巴结周边出血、脾脏边缘出血性梗死、回盲部淋巴纽扣状肿和肾脏密集点状出血等为特征性病理变化的猪的重大传染病[1,2]。CSF被国际动物卫生组织（OIE）列为A类动物传染病，我国将其列为一类动物传染病。目前，尽管猪瘟疫苗已普及使用，但在笔者所在单位门诊接诊的病例中仍检测到较高比例的猪瘟病毒[3,4]。因此猪瘟现仍是危害养猪业健康发展的最重要传染病。合格的猪瘟疫苗，已被公认能够较好地预防猪瘟病毒。猪瘟病例仍大量发生，猪瘟疫苗免疫情况存疑。为弄清楚鲁北地区猪瘟疫苗免疫效果情况，对2016年本单位收集的1 902份猪血清进行检测及分析，其目的是获得该区域猪瘟疫苗免疫效果情况，为防控本区域CSF提供科学参考。

1 材料和方法

1.1 材料

猪瘟病毒ELISA抗体检测试剂盒购自武汉科前动物生物制品有限公司。

1.2 方法

1.2.1 血液采集及血清分离

血液采集方法：所有采集血液的猪场或散养户均免疫过猪瘟疫苗（免疫猪瘟脾淋苗或免疫猪瘟细胞毒苗），且在免疫3周后采集血液。采集的猪均为保育阶段仔猪。

为便于统计与分析将血液来源猪场按规模分为四种类型：散养户、小型养猪场、中型养猪场及大型养猪场。其中散养户为年出栏商品猪100头以下；小型养猪场为年出栏商品猪1 000头以下；中型养猪场为年出栏商品猪5 000头以下；大型养猪场为年出栏商品猪5 000头以上。散养户每户采集5份血样，小型养猪场每个猪场采集15份血样，中型养猪场和大型养猪场每个猪场均采集30份血样。

血清分离：采用颈部静脉采集，血液37 ℃放置1 h，4 ℃静置过夜；4 000 r/min离心10 min。

1.2.3 血清ELISA抗体测定

按照猪瘟病毒ELISA抗体检测试剂盒说明书对收集的1 902份血清进行测定。

2 结果

2.1 猪瘟脾淋苗免疫ELISA抗体测定结果

本组所采血样的猪场均来自接种猪瘟脾淋苗猪场。按照猪瘟病毒ELISA抗体检测试剂盒判定标准：ELISA（S/ P值）大于0.17为免疫合格（血清ELISA抗体S/P值大于或等于0.17，相当于猪瘟正向间接血凝抗体大于或等于25）。表1结果显示大型和中型养猪场CSF病毒ELISA抗体免疫检测合格的猪场数较高，分别达91.7%和70.0%；而小型猪场和散养户CSFV免疫合格猪场数较低，分别为50.0%和33.3%。大型养猪场血清总免疫合格率为85.0%；而中型猪场，小型养猪场及散养户总免疫合格率分别为56.3%、42.0%、45.6%。

2.2 猪瘟细胞毒苗免疫ELISA抗体测定结果

本组所采血样的猪场均来自接种猪瘟细胞毒苗猪场。试剂盒判定标准如2.1中所述。表2结果显示大型和中型养猪场CSF病毒ELISA抗体免疫合格的猪场数较高，分别达91.7%和83.3%；而小型猪场和散养户CSFV免疫合格猪场数较低，分别为57.1%和50.0%。大型养猪场和中型养猪场血清总免疫合格率分别为93.9%和87.2%；而小型养猪场及散养户总免疫合格率分别为53.8%、54.2%。

表1 猪瘟脾淋苗免疫血清ELISA抗体测定结果

表2 猪瘟细胞毒苗免疫血清ELISA抗体测定结果

3 分析与讨论

本单位门诊2016年接诊来自鲁北区域猪病病例403例，实验室检测到猪瘟野毒病例108例，比率为26.8%。这说明本区域猪瘟仍在不同程度的流行。为弄清楚猪瘟野毒发生率如此高的原因，对本区域免疫猪瘟疫苗的不同规模猪场免疫效果情况进行调查。

现在市售猪瘟疫苗主要有猪瘟脾淋苗和猪瘟细胞毒疫苗，因此在检测时特别区分了2种疫苗。并且还对不同规模猪场免疫猪瘟疫苗情况检测时进行了细分。从检测结果看，不论是用脾淋苗还是细胞毒苗大型和中型猪场免疫效果均优于小型猪场和散养户。从实际检测猪场数或总血样数，猪瘟细胞毒苗稍优于猪瘟脾淋苗。

在上述检测结果的基础上对免疫不合格的猪场进行了详细调查，并收集了12种猪瘟疫苗（其中猪瘟脾淋苗6种、猪瘟细胞毒苗6种）。对这12种猪瘟疫苗进行了效力检验（测疫苗兔体感染量），发现4种猪瘟脾淋苗和1种猪瘟细胞毒苗不合格。这说明猪瘟免疫失败疫苗不合格是一个重要原因，但不可能是唯一原因。

该研究的分析结果提示鲁北养猪行业在猪瘟防疫过程中，一方面要选择合格猪瘟疫苗，另一方面要正确使用猪瘟疫苗。

[1] 单虎，李明义，沈志强．现代兽医兽药大全[M]．中国农业大学出版社，2011：304-307．

[2] 蔡宝祥．家畜传染病学． [M]．3版.北京：中国农业出版社，2000：147-151．

[3] 蔡奕琪，朱燕秋，王悦彬．2001-2008年猪瘟抗体和猪瘟病毒监测结果分析[J] ．养猪，2009(3)﹕73-74．

[4] 杨慧君．浅谈猪瘟流行新特点与防治措施[J]．农业科技与信息，2009(5)﹕50．

2017-01-15）

山东省现代农业产业技术体系生猪创新团队项目 SDAIT-08-17

魏凤，女（1979-），河南遂平人，硕士，助理研究员，主要从事兽用生物制品研究，E-mail：hzndzwt1@163.com