不同厂家试剂盒检测大鼠血清中碱性磷酸酶活性的比较

李 红, 余儒洋, 李 疆, 施嘉琛

(1. 北京市疾病预防控制中心/北京市预防医学研究中心, 北京100013;

2. 中国农业大学动物医学院 (学生), 北京100083)

不同厂家试剂盒检测大鼠血清中碱性磷酸酶活性的比较

李 红1, 余儒洋2, 李 疆1, 施嘉琛1

(1. 北京市疾病预防控制中心/北京市预防医学研究中心, 北京100013;

2. 中国农业大学动物医学院 (学生), 北京100083)

目的 比较两个厂家生产的碱性磷酸酶(ALP)试剂检测大鼠血清是否存在差异，开展大鼠血清ALP活性的检测。方法 用国际临床化学与检验医学联合会(IFCC)推荐的连续监测法，两个厂家生产的ALP试剂同时测定大鼠血清。 结果 两个厂家的ALP试剂检测大鼠血清差异极显著(P<0.01)。结论 两个厂家的ALP试剂均可开展大鼠血清检测工作，要分别建立实验室的参考范围，如果动物实验采用实验前后比较时，中间过程不能更换试剂的厂家。

碱性磷酸酶; 比对试验; 大鼠血清

碱性磷酸酶(alkaline phosphatase，ALP)存在于成骨细胞、白细胞、肝细胞、脾、肾、胎盘、前列腺和小肠内，血清中的ALP具有四种结构亚型: 肝-骨-肾型、小肠型、胎盘型和胚细胞型的变异体，其中肝-骨-肾型最为重要。儿童和青少年在骨骼成长时成骨细胞增加导致ALP活性会生理性升高, 甲状旁腺功能亢进、Paget病、佝偻病和骨软化病等骨骼疾病，阻塞性黄疸、胆汁郁积都会使ALP病理性升高[1]。诸多动物实验研究中，准确检测ALP的活性变化是重要研究依据[2-7]。在食品安全国家标准28 d经口毒性试验中也新增加了ALP活性的检测，因此，建立正确的ALP检测方法，对于相关动物实验具有重要意义。

1 材料与方法

1.1 仪器设备

7600-日立全自动生化分析仪(日立高新技术有限公司，日本)，仪器设备在中国计量科学研究院进行年检，检定合格，且检测过程在检定期内。

1.2 试剂、校准品和质控血清

厂家1: ALP试剂、酶校准品和多项质控品均由WaKo(和光纯药工业株式会社，日本)提供。ALP试剂R1: 4×49 mL，R2: 4×15 mL; 酶校准品批号: DR134，规格4×3 mL; 多项质控品1批号: EK476，规格10×5 mL; 质控品2批号：EK477，规格10×5 mL。厂家2: ALP试剂、酶校准品和多项质控品均由DiaSys[德赛诊断系统(上海)有限公司, 德国]提供。试剂货号: 14104101001,包装规格R1: 2×80 mL，R2: 2×20 mL; 酶校准品TruLab U货号: 591009910063，包装规格: 20× 3 mL; 多项质控品TruLab N货号: 590009910061，包装规格：6×5 mL; 多项质控品TruLab P货号：590509910061，包装规格：6×5 mL。

1.3 血样

本中心实验室送检Wistar大鼠血清66例，采集腹主动脉血样室温放置30 min，600A BAIYANG离心机，1 500×g，10 min离心分离血清。清洁级大鼠(雌雄各半)，体质量雌性168～216 g，雄性189～299 g，6～8 周龄。由军事医学科学院实验动物中心提供[SCXK(军) 2012-0004]。

1.4 实验方法

1.4.1 实验条件 进行仪器设备的常规维护保养，在P模块上分别建立分析参数，两个厂家的试剂都是液体双试剂均可直接使用，在37 ℃条件下，选用速率A法, 主波长405 nm、副波长505 nm，连续监测吸光度的上升速率(Δ A/min)，吸光度增高速率计算ALP活性, 大鼠样本血清为4.0 mL，WaKo试剂R1是160 mL，试剂R2是40 mL，选用24到34测光点。DiaSys试剂R1是200 mL，试剂R2是50 mL，选用21到31测光点。

1.4.2 校准程序 酶校准品为冻干粉状, 小心打开瓶盖。在酶校准品中准确加入3.0 mL离子交换水或者蒸馏水后，轻轻颠倒使其完全溶解混合均匀，复溶后保存于2～8℃可使用3 d。在P模块上执行两点定标程序。

1.4.3 质量控制程序 在多项质控品中准确加入5.0 mL(或者用称重法)离子交换水或者蒸馏水后，轻轻颠倒混合使其完全溶解分装保存，可放置在质控位或者是常规标本位置检测。

1.4.4 样品检测 执行两点定标程序通过后, 首先检测两个厂家提供的质控血清，再同时对66例大鼠血清进行ALP检测，质控血清放置在常规标本后再检测。ALP结果计算(U/L)=样品(ΔA/min)/校准(Δ A/min)×校准品活性(U/L)。

1.5 统计方法

全部实验测定结果直接由生化分析系统输出,数据使用SPSS 20.0软件包进行配对t检验统计处理; P<0.05为差异有统计学意义。

2 结果

多项质控品检测结果均在1个标准差以内，使用两个厂家试剂检测大鼠血清ALP结果差异极显著(P<0.01)(表1)。两个厂家试剂测定大鼠血清ALP活性结果的线性回归方程Y=1.0228x+0.635，相关系数r=0.9994, r2=0.9988。

表1 大鼠血清中ALP的检测结果

3 讨论

WaKo和DiaSys多项质控血清检测结果均在1个标准差以内，符合室内质量控制要求，可以用于检测大鼠血清ALP活性。两个厂家生产的试剂检测大鼠血清ALP结果相关性良好，但差异仍有统计学意义，应分别建立实验室的参考范围。生化检测结果的准确性在动物实验中至关重要，使用的仪器设备、试剂以及工作人员的责任心对检测结果都有很大影响[8～10]。实验组和对照组，实验动物结果前后比较时要使用同一检测方法同一厂家生产的试剂，中间不能更换。遇到试剂批间差异大时，为确保一致性应使用同一批号试剂，从而保证检测结果的准确性。

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Q95-33

C

1674-5817(2017)03-0222-02

10.3969/j.issn.1674-5817.2017.03.010

2016-11-15

李 红(1968-), 女, 本科, 副主任技师。主要从事生化分析工作。E-mail: benlih@sina.com