俞原配穴针灸用于改善心肌缺血再灌注效果及作用机理探讨*

尹家琛，温 勇

南宁市第三人民医院(南宁530003)

俞原配穴针灸用于改善心肌缺血再灌注效果及作用机理探讨*

尹家琛，温 勇

南宁市第三人民医院(南宁530003)

目的：探讨俞原配穴针灸用于改善心肌缺血再灌注效果及作用机理。方法：以30只Wistar大鼠为研究对象，分为3组：对照组、心肌缺血再灌注模型组、针灸治疗组，每组10只，对照组不做造模，心肌缺血再灌注模型组、针灸治疗组型冠状动脉左前降支结扎建立心肌缺血再灌注模型，针灸治疗组俞原配穴针灸治疗3 d，观察各组标准II导联下ST段电压值、CK、AST、CK- MB、c- TnT、MDA、SOD、ET-1、NO变化。结果：造模缺血后30 min、再灌注30 min时心肌缺血再灌注模型组、针灸治疗组ST段电压值均高于对照组(P<0.05)，针灸治疗组ST段电压值明显低于心肌缺血再灌注模型组(P<0.05)；再灌注3d时心肌缺血再灌注模型组、针灸治疗组ST段电压值、CK、AST、CK- MB、c- TnT、MDA、ET-1高于对照组(P<0.05)，SOD与NO低于对照组(P<0.05)，针灸治疗组ST段电压值、AST、CK- MB、c- TnT、MDA、ET-1低于心肌缺血再灌注模型组(P<0.05)，SOD与NO高于心肌缺血再灌注模型组(P<0.05)。结论：俞原配穴针灸能明显改善心肌缺血再灌注损伤模型大鼠心肌缺血损伤，可能是通过降低心肌酶、抗氧化应激、减轻血管内皮损伤等作用途径来起效的。

心血管疾病是引起中老年死亡的主要疾病之一，其中以高血压、急性冠脉综合症等最为多见，严重威胁着人类的身体健康。急性冠脉综合症患者主要表现为冠状动脉缺血表现，在冠状动脉发生急剧减少时冠状动脉相应供血的心肌细胞会出现缺氧缺血，导致心肌细胞的不可逆损伤，心功能明显下降。对心肌缺血的治疗主要是改善及恢复血供，组织细胞坏死的进一步发展，早期再灌注是改善缺血心肌细胞存活的关键，但是现代医学中溶栓、冠状动脉搭桥术等在恢复冠状动脉血供后还会引起缺血再灌注损伤(Myocardial ischemia-reperfusion injury，MIRI)[1- 2]，有报道显示针灸内关、心俞等穴位具有抗心肌缺血效应[3-5]，有改善缺血再灌注损伤的作用，因此本研究对俞原配穴针灸用于改善心肌缺血再灌注效果及作用机理进行了探讨，为临床针灸治疗心肌缺血再灌注损伤的临床和理论研究提供实验依据，现将实验结果报告如下。

材料与方法

1 实验动物 健康Wistar大鼠30只，SPF级，体重200-220g，雄性，均购自北京华阜康生物科技有限公司，动物合格证SCXK(京)2015-0009。随机分为3组：对照组、心肌缺血再灌注模型组、针灸治疗组，每组10只。

2 实验试剂及针刺工具 购自天津亿明医疗器械有限公司的针灸毫针，华佗牌一次性针灸针，规格0.25mm×15mm；购自天津市鼎盛鑫化工有限公司生产的水合氯醛(批号20150212)；购自南京建成生物工程研究所生产的肌酸激酶(CK，批号20150905)、门冬氨酸氨基转移酶(AST，批号20150205)、肌酸激酶同工酶(CK- MB，批号20141228)、肌钙蛋白T(c- TnT，批号20150129)试剂盒；购自北京北免东雅生物技术研究所生产的丙二醛(MDA)、超氧化物歧化酶(SOD)，测定血浆内皮素-1(ET-1)、一氧化氮(NO)试剂盒。

3 造模方法 大鼠适应性喂养1周，对照组不做处理，10%水合氯醛经腹腔注射将心肌缺血再灌注模型组、针灸治疗组大鼠麻醉，大鼠麻醉成功后仰卧位下固定在解剖台，颈部取正中切口暴露气管后气管插管，接呼吸机，将电极分别插在大鼠的四肢内侧皮下并与心电图电极相连，在复制模型前先对大鼠进行心电图检测，如存在心电图异常则进行剔除，沿着左侧胸骨外缘切开暴露心脏，切开心包膜，以冠状动脉主干为标志找到左心耳，在左心耳下方2 mm处找到冠状动脉左前降支，在根部上中1/3位置处穿过0号医用缝合线(穿一小聚乙烯管)，拉紧缝线引起左前降支缺血，放松即可形成再灌注。观察心电图变化，心肌缺血再灌注模型组、针灸治疗组如出现左心室前壁发绀及膨胀，在标准II导联出现ST段抬高0.1 mv以上、T波高耸、心律不齐，则提示急性心肌缺血造模成功，造模成功30 min后开放左前降支血供形成再灌注。

4 治疗方法 心肌缺血再灌注模型组不做治疗。针灸治疗组在再灌注后进行针灸治疗，参考《动物针灸穴位图谱》中对动物的穴位定位方法对针灸治疗组大鼠进行取穴，大陵：在前肢内侧腕部横纹正中；神门：在前肢内侧腕部横纹尺骨边缘；心俞：在第5胸椎棘突下旁开7 mm处；内关：在前肢内侧距离腕关节3 mm左右尺桡骨缝间；厥阴俞：在第4胸椎旁开5 mm处。取好穴位后进行标记，将穴位及周围剔除毛，75%酒精消毒穴位处，用0.25 mm×15 mm毫针垂直或斜刺入穴位，捻转轻手法得气后留针30 min，取1 cm的艾条插在针柄末端，点燃艾条，共灸2柱，连续治疗3 d。

5 检测指标 ①各组心电图变化。记录造模前、造模缺血后30 min时、再灌注30 min时、再灌注3 d时各组标准II导联下ST段电压值。②再灌注3 d时眼眶静脉采集血标本，测定造模前、造模后再灌注血清心肌酶CK、AST、CK- MB、c- TnT，测定血清抗氧化物质MDA、SOD，测定血浆ET-1、NO。以上项目的检测均按照试剂盒操作说明进行。

结 果

1 各组标准II导联下ST段电压值比较 在造模前各组ST段电压值比较差异无统计学意义(P>0.05)，造模缺血后30 min、再灌注30 min时心肌缺血再灌注模型组、针灸治疗组ST段电压值均高于对照组(P<0.05)，心肌缺血再灌注模型组、针灸治疗组组间ST段电压值比较差异无统计学意义(P>0.05)，再灌注3 d时心肌缺血再灌注模型组、针灸治疗组ST段电压值均高于对照组(P<0.05)，针灸治疗组ST段电压值明显低于心肌缺血再灌注模型组(P<0.05)，见表1。

2 各组再灌注前后心肌酶水平比较 在造模前各组心肌酶CK、AST、CK- MB、c- TnT比较差异无统计学意义(P>0.05)，再灌注3 d时心肌缺血再灌注模型组、针灸治疗组心肌酶高于对照组(P<0.05)，针灸治疗组心肌酶低于心肌缺血再灌注模型组(P<0.05)，见表2。

表1 各组标准II导联下ST段电压值比较(mv)

注：* 表示与心肌缺血再灌注模型组同时间比较P<0.05，△表示与对照组同时间比较P<0.05，对照组不做造模，造模及再灌注不同时间是指与心肌缺血再灌注模型组和针灸治疗组造模缺血后及再灌注后平行时间

表2 各组再灌注前后心肌酶水平比较

注：* 表示与心肌缺血再灌注模型组同时间比较P<0.05，△表示与对照组同时间比较P<0.05，对照组不做造模，造模及再灌注不同时间是指与心肌缺血再灌注模型组和针灸治疗组造模缺血后及再灌注后平行时间

3 各组再灌注前后血清抗氧化物质水平比较 在造模前各组MDA、SOD比较差异无统计学意义(P>0.05)，再灌注3 d时心肌缺血再灌注模型组、针灸治疗组MDA高于、SOD低于对照组(P<0.05)，针灸治疗组MDA低于、SOD高于心肌缺血再灌注模型组(P<0.05)，见表3。

4 各组再灌注前后血管内皮功能水平比较 在造模前各组ET-1、NO比较差异无统计学意义(P>0.05)，再灌注3 d时心肌缺血再灌注模型组、针灸治疗组ET-1高于、NO低于对照组(心肌缺血再灌注模型组：t=5.52、t=5.95，针灸治疗组：t=2.38、t=2.67，P<0.05)，针灸治疗组ET-1高于、NO低于高于心肌缺血再灌注模型组(t=2.47、t=2.95，P<0.05)，见表4。

表3 各组再灌注前后血清抗氧化物质水平比较(U/ml)

注：* 表示与心肌缺血再灌注模型组同时间比较P<0.05，△表示与对照组同时间比较P<0.05，对照组不做造模，造模及再灌注不同时间是指与心肌缺血再灌注模型组和针灸治疗组造模缺血后及再灌注后平行时间

表4 各组再灌注前后血管内皮功能水平比较

注：* 表示与心肌缺血再灌注模型组同时间比较P<0.05，△表示与对照组同时间比较P<0.05，对照组不做造模，造模及再灌注不同时间是指与心肌缺血再灌注模型组和针灸治疗组造模缺血后及再灌注后平行时间

讨 论

急性心肌缺血可出现心肌细胞的缺血坏死，表现为胸闷、胸前区疼痛等，由于血管堵塞局部细胞坏死，血管的再次疏通血供通畅的情况下会发生再次损伤，西医认为心肌细胞再恢复血流的供血下产生了不可逆的损伤，在此过程中涉及到细胞信号复杂的相关机制，如细胞外信号分子、细胞内信号转导通路、细胞膜信号接收器等多方面的变化[7]。在心肌细胞生物膜损坏后可导致通透性增加，CK、AST、CK-MB、c-TnT等在心肌细胞内含量最高，心肌细胞膜受损导致以上心肌酶从细胞内溢出，引起血清心肌酶的升高，因此以上指标常作为心脏疾病诊治指标。氧化应激在心血管疾病中起到极为重要的作用，大量的临床研究显示活性氧自由基的产生是形成氧化应激的基本机制[8]，SOD是分布在生物体内的金属酶，是有氧代谢细胞生存所必需得酶，能反应自由基的含量，MDA是自由基在体内脂质过氧化产物的，可反应出细胞损伤程度。TT-1是重要的血管内皮损伤因子，为血管内皮细胞所释放，具有强大的缩血管和促进血管平滑肌增殖的作用，在ET-1水平较高时可引起细胞毒作用，在心肌细胞缺血缺氧时可释放大量的ET-1，从而导致冠状动脉缺氧进一步加重，再灌注损伤也会进一步加重。NO是舒张血管因子，在心血管疾病中能抑制血小板在损伤血管局部聚集，防止血小板粘附在血管壁，能诱导GMP机制来减少血管平滑肌细胞的分裂和增殖，阻止动脉粥样硬化的发生，如心肌细胞缺血缺氧时血NO往往会降低，导致血管痉挛发生，引起病情加重。

祖国医学中并无心肌缺血及冠心病等病名，但根据此病的临床表现及特征，可将其归纳在“胸痹”、“心悸”、“心痛”等范畴，认为阳虚阴盛是其病机，缺血时间越长则阳虚阴盛会越重，而再灌注的存在可导致阳气复来，脏器从阳虚阴盛到阳气骤然来复，从一个极端到另一个极端，机体形成了阴盛格阳、阴阳格拒的病机。对心肌缺血再灌注损伤的防治祖国医学有较多经验，临床相关研究显示葛根素等中药对再灌注损伤有明显改善作用[9]，针灸作为中医学中的一个特殊分支，在《黄帝内经》中就有治疗心病的相关记载，提出针灸可从手少阳三焦经、手太阳小肠经、手少阴心经和手厥阴心包经入手进行治疗，也可从大陵、昆仑等腕踝取穴进行治疗；《脉经》中也提出针灸取穴可选用大陵、劳宫、中冲等，易与四时之气相合取穴。临床有研究显示针灸治疗心肌缺血再灌注损伤有较好疗效，研究主要集中在对心功能、神经递质、心肌酶、血管活性物质等的影响方面，大量研究显示针灸治疗在改善心肌缺血再灌注过程中可能是通过模式心肌缺血预适应-中介-效应子信号转导模式来实现的[3-5]，如对造模大鼠内关等穴针刺能促进腺苷和NO的释放，能降低中介物质蛋白激酶C的表达等。本研究对俞原配穴针灸用于改善心肌缺血再灌注效果及作用机理进行了探讨，选取大陵、神门、心俞、内关、厥阴俞为治疗穴位，不对大鼠作针灸预处理，在形成心肌缺血再灌注后进行针灸治疗，观察了对缺血再灌注损伤的改善作用，研究结果显示针灸以上穴位后大鼠心肌酶和ST段电压值的恢复明显，显示受损心肌细胞明显恢复，再灌注3d时针灸治疗的大鼠CK、AST、CK- MB、c- TnT、MDA、ET-1低于心肌缺血再灌注模型组(未做针灸治疗)，SOD与NO高于心肌缺血再灌注模型组，提示针灸治疗的大鼠再灌注损伤相对较轻，结合前述相关文献研究结果分析其对心肌缺血再灌注损伤的保护机制，笔者认为可能也是通过减轻血管内皮损伤、抗氧化应激等途径来实现的。

综上所述，俞原配穴针灸能明显改善心肌缺血再灌注损伤模型大鼠心肌缺血，可能是通过降低心肌酶、抗氧化应激、减轻血管内皮损伤等作用途径来起效的。

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(收稿：2017-02-22)

Effect of acupuncture and moxibustion in rats with myocardial ischemia-reperfusion injury and mechanism of action

Yin Jiachen，Wen Yong

Department of Internal Medicine, the Third People's Hospital of Nanning(NanNing 530003)

Objective：To explore the effect of acupuncture and moxibustion in rats with myocardial ischemia-reperfusion injury and mechanism of action.Methods：Thirty Wistar rats were randomly divided into control group,model group,acupuncture and moxibustion treatment group,10 rats in each group.The control group did not do processing,the rats in model group and acupuncture and moxibustion treatment group were opened thoracic cavity and ligated anterior descending coronary,acupuncture and moxibustion treatment of 3 d were acupuncture and moxibustion treatment group,Under the observation of standard II lead ST segment voltage value,CK,AST,CK- MB,c- TnT,MDA,SOD,ET-1,NO.Results：30 min Ischemia and 30 min reperfusion,voltage value of model group and acupuncture and moxibustion treatment group higher than control group(P<0.05),acupuncture and moxibustion treatment group lower than model group(P<0.05).ST segment voltage value,CK,AST,CK- MB,c- TnT,MDA,ET-1,model group and acupuncture and moxibustion treatment group higher than control group in 3 d reperfusion(P<0.05),acupuncture and moxibustion treatment group lower than model group in 3 d reperfusion(P<0.05),SOD and NO,model group and acupuncture and moxibustion treatment group higher than control group in 3 d reperfusion(P<0.05),acupuncture and moxibustion treatment group lower than model group in 3 d reperfusion(P<0.05).Conclusion：Acupuncture and moxibustion on myocardial ischemia-reperfusion injurymodel in rats with anti-oxidative stress effect can reduce the changes of myocardial enzyme,reduce vascular endothelial injury,through the above a variety of ways to lessen ischemia-reperfusion injury.

Myocardial ischemia/ Chinese medicine therapy Rats Animal Experimentation

*广西自治区医疗卫生适宜技术研究与开发课题(S201409-02)

心肌缺血/中医药疗法 大鼠 动物，实验

R737.31

A

10.3969/j.issn.1000-7369.2017.07.081