加味保元汤对慢性应激大鼠海马SOD、GSH-Px活性的影响

孙 莉，林宝旭，方硝杰，赵圆圆，徐 梅，侯 莉

（大连大学 医学院，辽宁 大连 116622）

加味保元汤对慢性应激大鼠海马SOD、GSH-Px活性的影响

孙 莉，林宝旭，方硝杰，赵圆圆，徐 梅，侯 莉

（大连大学 医学院，辽宁 大连 116622）

为了研究加味保元汤对慢性应激大鼠海马神经元氧化应激的影响，应用慢性复合应激建立抑郁症大鼠模型，将24只SD大鼠随机等分为正常对照组、模型组、加味保元汤组。采用分光光度法检测大鼠海马组织超氧化物歧化酶（SOD）、谷胱甘肽过氧化物酶（GSH-Px）活性。结果表明，模型组大鼠海马组织SOD、GSH-Px活性明显降低，与正常对照组比较有显著性差异（P＜0.01）；经加味保元汤干预治疗后，大鼠海马组织SOD、GSH-Px活性明显提高，与模型组比较有显著性差异（P＜0.01）。实验结果提示加味保元汤对慢性应激大鼠海马神经元氧化应激损伤具有保护作用。

慢性应激；大鼠；海马；加味保元汤；氧化应激

0 引言

长期慢性应激可引起海马神经元损伤[1,2]，进而产生抑郁行为[3]，其机制可能与心理应激诱发氧化应激有关[4,5]。因此，清除活性氧自由基和修复氧化损伤，从而抑制海马神经元凋亡是抗应激损伤，防治抑郁症的有效方法之一。

本研究采用慢性复合应激大鼠抑郁症模型，检测其海马组织SOD及GSH-Px活性变化，并给予加味保元汤干预，研究加味保元汤对慢性应激大鼠海马组织SOD及GSH-Px活性变化的调节作用，探讨其抗氧化应激作用。

1 材料与方法

1.1 材料

1.1.1 实验动物及分组

SD大鼠24只，健康、雄性，体重180～220 g，清洁级。随机等分为3组：正常对照组、模型组、加味保元汤组。

1.1.2 仪器与试剂

分光光度计：Thermo Fisher-1510（美国）。SOD、GSH-Px活性检测试剂盒，BCA蛋白含量检测试剂盒：江苏凯基生物技术股份有限公司。加味保元汤由五味子、人参、黄芪、肉桂、甘草，分别以5：5：6：5：3比例构成，由本校中药研究室制备水提取物，动物给药剂量为260 mg/kg体重。

1.2 方法

1.2.1 大鼠抑郁症模型制作

模型组和加味保元汤组应激方法为：①束缚，每日开始及束缚时间不同，第1天4 h，随后每2天增加0.5 h；②夹尾1 min；③25±1℃自来水游泳5 min。游泳装置为直径23 cm、高60 cm的测试桶。每天给予2种应激，其中束缚每天进行，另一种应激在夹尾、25±1℃水游泳中每天交替给予一种，且此2种应激方法累计进行的平均次数相等，持续21 d，其中加味保元汤组应激前给予加味保元汤水提取物灌胃，模型组应激前给予等量生理盐水灌胃。对照组不给予任何刺激，但给予等量生理盐水灌胃。应激期间各组均禁食、水。

1.2.2 SOD及GSH-Px活性测定

实验结束后，大鼠断头取脑，冰上分离提取大鼠海马组织，并按其重量：体积为1:9加入冰生理盐水，用玻璃匀浆器制备10%组织匀浆，3000 r/min低温离心15 min，留取上清液待进行测定。采用改良黄嘌呤氧化酶法测定SOD活性，以分光光度计波长为550 nm检测吸光度。采用谷胱甘肽过氧化物酶法以分光光度计波长为412 nm检测吸光度，再采用BCA蛋白含量检测试剂盒测定蛋白浓度，计算GSH-Px的活性。SOD及GSH-Px活性测定按说明书操作。

1.3 统计学方法

采用SPSS 17.0 软件进行统计分析，以均数±标准差表示。

2 结果

与对照组比较，模型组大鼠海马组织 SOD、GSH-Px活性明显降低， 有显著性差异（P＜0.01）；加味保元汤组与模型组比较，大鼠海马组织 SOD、GSH-Px活性明显提高，有显著性差异（P＜0.01），与对照组比较，无显著性差异（P＞0.05）。说明慢性应激可致大鼠海马组织SOD、GSH-Px活性明显降低，加味保元汤干预治疗后，大鼠海马组织SOD、GSH-Px活性明显提高，结果表1。

表1 各组大鼠海马SOD和GSH-Px含量比较（X±S）

3 讨论

抑郁症是一种常见的情感性疾病，其中长期慢性日常压力是引发抑郁的主要原因。抑郁症的发生发展与大脑功能密切相关，其中海马是关键的情绪整合区，极易受到应激的损伤[6,7]，其机制可能与心理应激诱发氧化应激有关[4,5]。

氧化应激是指体内的自由基及其产物超过机体抗氧化防御机制的一种病理状态。活性氧（ROS）是细胞内有氧呼吸产生的一系列副代谢产物[8]，其升高或氧化还原平衡改变时，就会出现氧化应激，通过对生物膜的损伤，对蛋白质的氧化损伤，对DNA的氧化损伤，对凋亡通路的影响等一系列直接和间接效应介导细胞调亡的发生。

SOD是一种氧自由基清除剂，能对超氧阴离子自由基进行歧化反应，生成过氧化氢，然后由GSH-Px和/或过氧化氢酶催化生成水，使机体免受自由基的攻击，SOD活力高低能间接反映机体清除氧自由基的能力[9]。脑内过氧化氢酶含量极低，清除过氧化氢主要依靠GSH-Px完成[10]。所以，测定SOD和GSH-Px的活性，能在一定程度上反映机体的自由基清除能力，即反映抗氧化应激的能力。

保元汤具有补气温阳之功效，由人参、黄芪、甘草、肉桂等四味药组成。五味子有宁心安神功效[11]，在保元汤中加入五味子，形成加味保元汤。前期实验表明，加味保元汤对慢性应激大鼠海马神经元损伤具有一定的保护作用[2]，本次实验进一步研究慢性应激致大鼠海马神经元损伤的氧化应激机制，并探讨加味保元汤对氧化应激损伤大鼠海马神经元的保护作用。研究结果显示，慢性应激使大鼠海马组织 SOD、GSH-Px活性明显降低，加味保元汤干预后，大鼠海马组织SOD、GSH-Px活性较模型组明显提高，说明慢性应激诱导的大鼠海马组织中存在氧化应激损伤，加味保元汤对慢性应激大鼠海马组织 SOD和GSH-Px的活性具有增强作用，因而能提高机体清除自由基的能力，抑制氧化应激反应，这也可能是加味保元汤对慢性应激大鼠海马神经元损伤的保护作用机制之一，加味保元汤对应激致大鼠海马神经元损伤的保护作用机制还需进一步研究。

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Effects of Modified Baoyuantang on the Activities of Hippocampal SOD and GSH-Px in Chronically Stressed Rats

SUN Li, LIN Bao-xu, FANG Xiao-jie, ZHAO Yuan-yuan, XU Mei, HOU Li
(College of Medicine, Dalian University, Dalian 116622, China)

The objective of this research was to study the effect of Modified Baoyuantang on the activities of hippocampal SOD and GSH-Px in chronically stressed rats. Depression in rats was established by chronic multiple stress. Twenty-four SD rats were randomly and equally divided into the following groups: 1. control group; 2.stressed group; 3. stressed group fed with Modified Baoyuantang. Hippocampal superoxide dismutase(SOD) and glutathione peroxidase(GSH-Px) activities were examined by spectrometer. The results showed that the activities of SOD and GSH-Px were significantly decreased in the stressed group (p ＜ 0.01, compared to those in the control group). Rats fed with Modified Baoyuantang had significantly elevated SOD and GSH-Px activities (p ＜ 0.01,compared to those in the stressed group). The results indicated that Modified Baoyuantang had a protective effect on the oxidative damage of hippocampal neurons in the chronically stressed rats.

chronic stress; rats; hippocampus; modified Baoyuantang oxidative stress

R285.5

A

1008-2395(2017)03-0051-03

2017-02-12

辽宁省大学生创新创业训练计划项目（201611258003）。

孙莉（1964-），女，副教授，研究方向：生理学、心理应激与行为医学。