以小鼠半数溶血值为指标对北沙参茎叶提取物的探索研究

宋丽丽 王志江 许一平 王瑜 吕方军(山东中医药高等专科学校，山东 烟台 264199)

以小鼠半数溶血值为指标对北沙参茎叶提取物的探索研究

宋丽丽 王志江 许一平 王瑜 吕方军(山东中医药高等专科学校，山东 烟台 264199)

目的：以小鼠半数溶血值(HC50)为指标，对伞形科植物北沙参茎叶的提取物进行研究，为扩大其开发利用提供依据。方法：制备北沙参茎叶的水提取物和醇提取物，设置空白对照组、西洋参胶囊组及不同剂量的给药组，连续给药15天，第10天按体重注射绵羊红细胞（sRBC）。5天后对小鼠进行眼球取血分离血清，取上清液1ml和都氏试剂3ml于试管内，同时取10%sRBC0.25ml，加都氏试剂至4ml，于另一支试管内充分混匀，于540nm处以对照（SA液）管作空白对照，测定吸光度值，计算HC50。结果：将不同剂量北沙参的茎叶提取物给小鼠灌胃给药15天，与对照组对比，水提取物2.34g/kg剂量组、醇提取物2.34g/kg剂量组、西洋参胶囊组小鼠半数溶血值明显升高（P＜0.05）。结论：北沙参茎叶具有调节体液免疫的作用。

北沙参茎叶提取液；半数溶血值；体液免疫

近些年国内外学者对北沙参（根）的物质基础及药理作用进行了大量的研究[1,2]。莱阳沙参，系人工栽培的北沙参，具有养阴清肺、益胃生津之功效，用于肺热燥咳、劳嗽痰血、热病津伤，咽干口渴等病症，为养阴佳品[3]。从北沙参茎叶水溶性提取物和醇溶性提取物含量及多糖含量及各种溶剂提取物的薄层色谱[与吸收光谱来看，北沙参茎叶的物质基础非常丰富。

研究表明，北沙参茎叶提取物具有抑制环磷酰胺致小鼠外周血白细胞数、胸腺指数降低的作用，增强免疫低下小鼠网状内皮系统吞噬碳粒的K值及α指数的作用[4]；具有促进小鼠迟发型变态反应(DTH)的作用[5]。本研究旨在观察北沙参茎叶提取物对小鼠半数溶血值(HC50)的影响，以确定其是否具有调节体液免疫的作用。以期为北沙参茎叶的开发利用提供理论支持。

1 实验材料

1.1 实验动物及饲料

动物：昆明种小鼠，雌性，体重17～22g，SPF级，许可证号：SCXK（鲁）20030004，山东大学实验动物中心提供。配合饲料（鼠）：山东省实验动物中心济南康大饲料有限公司提供，许可证号：SCXK（鲁）20040014。

1.2 主要药品与试剂

北沙参，两年生，伞形科植物珊瑚菜（大红袍品种），产地：山东省莱阳市高格庄镇胡城村；采集时间：2011年10月；0.9%氯化钠注射液，山东新华制药股份有限公司，批号：20070112，规格：250ml∕瓶；西洋参胶囊，规格：0.5g∕粒，深圳万基药业有限公司，批号：20080512；；绵羊红细胞sRBC（自制）。

1.3 试验仪器

BSA224S-CW电子分析天平（上海金鹏分析仪器有限责任公司）WFJ2100型可见分光光度计（外商独资上海合利仪器有限公司），，S-DK600电热恒温水箱（上海贺德实验设备有限公司），TG20-W高速离心机（长沙湘智离心机仪器有限公司）。

2 实验方法

2.1 北沙参茎叶提取物的制备

取北沙参茎叶洗净，通风阴凉处晾干，50℃干燥98h后收集备用。称取一定量样品，用蒸馏水浸泡6h后，超声提取3次，每次30min，提取液合并，浓缩，制成生药含量1g∕ml的药液，作为北沙参茎叶的水提物；用80%的乙醇超声提取晾干后的残渣2次，每次45min，提取液合并浓缩，制成生药含量1g∕ml的药液，作为水提后醇提物。

2.2 药物剂量设置

北沙参茎叶用量：9g;小鼠的临床等效剂量经计算设为1.17g∕kg,所以，提取物低剂量：0.59g∕kg（小鼠临床等效剂量的1∕2）；提取物的高剂量：2.34g∕kg（小鼠临床等效剂量的2倍）。西洋参胶囊：临床等效剂量的2倍。

2.3 动物分组与给药

将小鼠按体重随机分为6组，每组12只。标记为醇提取物0.59g∕kg组、醇提取物2.34g∕kg组、水提取物0.59g∕kg组、水提取物2.34g∕kg组、西洋参胶囊0.78g∕kg组、空白对照组灌胃给药，每日1次，连续给药15d，对照组灌胃等容量的生理盐水。

2.4 检测方法[2]

于试验第10天，取绵羊血，用生理盐水洗涤3次，每只小鼠腹腔注射2%(体积分数)sRBC0.2ml。5d后即末次药后1h，摘除眼球取血于离心管内，常规方法分离血清。用SA缓冲液将血清稀释200倍。取稀释后的血清1ml置于试管内，依次加入10%sRBC0.5ml，补体1ml(用SA液按1：8稀释)。另设不加血清的对照管(以SA液代替)，置37℃恒温水浴中保温30min后，冰浴终止反应。2000r∕min离心10min。取上清液1ml和都氏试剂3ml于试管内。同时取10%sRBC0.25ml，加都氏试剂至4ml，于另一支试管内充分混匀，放置10min后。于540nm处以对照管作空白，分别测定各管吸光度值。

样品HC50=×稀释倍数

3 实验结果

北沙参茎叶提取物对小鼠半数溶血值的影响，结果见下表。

北沙参茎叶提取物对小鼠半数溶血值的影响(±s,n=12)

北沙参茎叶提取物对小鼠半数溶血值的影响(±s,n=12)

注：*P＜0.05与对照组比较

组别正常对照组醇提取物低剂量组醇提取物高剂量组水提取物低剂量组水提取物高剂量组剂量（g/kg）N．S 0．59 2．34 0．59 2．34半数溶血值101．51±11．31 106．19±34．23 128．42±36．71* 109．31±22．64 127．63±21．33*

由表1结果可知，将不同剂量北沙参的茎叶提取物给小鼠灌胃给药15天，与对照组对比，水提取物2.34g∕kg组、醇提取物2.34g∕kg组、西洋参胶囊组小鼠半数溶血值明显升高（P＜0.05），其他各组亦有升高的趋势，但结果无统计学意义。

4 结语

实验表明：北沙参茎叶醇提取物和水提取物的高剂量组与西洋参胶囊组一样，与对照组比较均能明显增加小鼠血清半数溶血值，表明北沙参茎叶提出液具有调节体液免疫的作用。本研究为北沙参茎叶药用、食用价值的开发提供了一些基础数据。北沙参茎叶的水提取物与醇提取物非常丰富，分别达45.65%和16.80%，这些药理作用来源于哪些物质基础有待于进一步探讨。

[1]原忠,赵梦飞,陈发奎,等.北沙参化学成分的研究[J].中草药,2002,33(12):1063-1065.

[2]吕方军,叶国华,许一平,等.北沙参茎叶提取液对免疫抑制小鼠免疫功能的影响[J].时珍国医国药,2012,23(4):936-937.

王志江，副教授。