(青海省湟源县畜牧兽医站青海西宁812100)
一例由污染饲料引发雏鸡沙门氏菌病的诊治
谈明禄
(青海省湟源县畜牧兽医站青海西宁812100)
目前鸡沙门氏菌病是危害现代养鸡业最常见的细菌性、急慢性传染病之一。该病的病原菌沙门氏菌血清型众多,地域差别较大,广泛存在于自然界和人畜肠道内,对外界环境如日光、干燥等有较强的抵抗能力。禽类是其最主要的感染宿主,尤其是2周龄以内的雏鸡最为易感。临床上根据沙门氏菌抗原结构的不同,可将鸡沙门氏菌病分为鸡白痢、鸡伤寒和鸡副伤寒三类。该病可经水平传播,也可经种蛋进行垂直传播,因此一旦鸡群发病,传染性非常高,给养鸡场造成严重的经济损失,同时带菌的鸡蛋的流通也会严重危害人类健康,危害公共卫生安全,因此必须加强沙门氏菌病的综合防治工作。本文针对本地区某一养鸡场内一例疑似鸡沙门氏菌病开展研究,根据临床表现,并结合实验室诊断,最终确诊为沙门氏菌感染,现简要汇报如下,以供参考。
某养殖场13日龄雏鸡群,突然出现精神萎靡,绒毛蓬松,不愿走动,闭眼昏睡,缩头颈,怕冷打寒颤,聚堆,拉白色稀薄如浆糊状粪便等症状;部分发病鸡迅速死亡;有的病鸡因肛门部粘有稀便引起炎症后疼痛,发出尖锐叫声,多因呼吸困难或心力衰竭而死亡;随着病程的进展,病死率逐渐增加,平均每天死亡20~30只。经调查,此次发病前鸡场鸡群均正常,但在饲喂新购入的饲料后,逐渐发病,怀疑饲料污染了沙门氏菌,因此在提取病死鸡的同时,也采集了饲料样本,一起进行实验室检测。
随机采取病死鸡20只,进行剖检。结果发现90%以上病死鸡的肝脏、脾脏、肾脏血管出现严重充血,部分有心包炎等浆膜炎和甲状腺增生症状。初步诊断为沙门氏菌感染,无菌条件下采取死鸡的肝脏等病变组织器官进行实验室检测。
3.1 试剂及设备
麦康凯培养基、细菌DNA提取试剂盒、常规药敏片、细菌生化反应管、显微镜、接种环、PCR仪、37℃恒温箱。
3.2 试验方法
3.2.1 细菌分离培养和形态鉴定将送检肝脏等病料组织及饲料无菌条件下接种到麦康凯培养基上,经过37℃环境中培养24h后,麦康凯培养基上均出现有小米粒大小、淡黄色菌落。将菌落涂片革兰氏染色后,进行镜检,观察细菌形态,可见革兰氏阴性菌短小杆菌。
3.2.2 PCR鉴定纯化后的病料分离菌落培养后,应用细菌DNA提取试剂盒提取基因组,-20℃保存备用。根据当地沙门氏菌的流行株设计一对PCR引物:上游引物-CAGGATACCTATAGTGCTGC,下游引物-CGCACCGTCAAAGGAACCGT,目的片段大小为580bp。
PCR反应体系:PCRMIX12.5μL,DNA0.5 μL,上下游引物各0.5μL,补H2O至总体积25 μL。
PCR反应条件:94℃预变性5min,95℃变性30s,56℃退火30s,72℃延伸30s,进行30个循环,最后72℃延伸10min。扩展结束后,PCR产物进行1%的琼脂糖凝胶电泳鉴定。结果显示扩增的目的片段与预期的大小一致(见图1)。
图1 PCR鉴定结果
3.2.3 生化试验将纯化好的分离细菌接种沙门氏菌到常用的细菌生化反应管进行鉴定,包括麦芽糖、甘露醇、葡萄糖、吲哚、色氨酸、枸橼酸铵盐、尿素、氨基酸对照、硫化氢等生化试验,结果均符合沙门氏菌的生化特性。
3.2.4 药敏试验将分离菌株均匀涂布接种于普通营养琼脂培养基上,并将常用的7种药物的药敏片(包括氨苄西林、粘杆菌素、阿莫西林、环丙沙星、强力霉素、硫酸头孢噻呋、林可霉素)等距离贴在涂好菌的平板上,后将平板置于37℃恒温箱培养24h。药敏试验结果表明:分离菌对硫酸头孢噻呋高度敏感,对环丙沙星、氟苯尼考、氨苄西林、粘杆菌素中敏,其它药物呈低度敏感或耐药。
根据临床症状、剖检结果及实验室诊断,最终确诊为该鸡场感染了沙门氏菌,参考实验室的药敏试验结果,选用中高敏药物制定有效治疗方案:按照氨苄西林1g加入到2L饮用水中的比例,让鸡群自由饮用,同时配合氟苯尼考1g添加到1.5L饮用水中的比例饮用,连用5~7d。用药后病情明显好转,食欲逐渐恢复,病死率逐渐下降,到第四天没有病死鸡出现,治疗结果明显。
经调查此次发生疫病的鸡场,发现该鸡场日常管理较为严格,每天都及时清理污水粪便,养殖场内外也经常消毒净化,雏鸡和种蛋也从正规的厂家引进,且在发病前鸡群均健康无病。更新饲料后不久陆续出现了发病及死亡病例,且疫情逐渐加重,实验室检测也从饲料中检测出了沙门氏菌,因此此次疫情是由于鸡群食用了污染沙门氏菌的饲料而引发的。确诊后,相关兽医人员和养殖人员及时治疗,调整饲料,使疫情得到了有效的控制,现已恢复正常。因该鸡场以往的净化程度较高,日常饲养管理水平较高及发病后及时治疗,所以并没有造成太大的经济损失。
近年来随着现代饲养规模和技术的快速发展,养殖场内饲养密度逐渐加大,鸡群极易感染各种细菌,因此现代的养殖模式对鸡的饲养环境和生物安全等方面提出了新的、更高的要求,尤其是目前疫病的混合感染是禽病流行中的主要趋势,一旦发病,病死率极高,很容易造成严重的经济损失。很多养殖单位在防治疫病的过程中盲目用药,随意在治疗中或饲料饮水中添加抗菌药物,由此导致了大量耐药菌株的出现,尤其是沙门氏菌血清型种类众多,且不同菌株间不产生交叉保护作用,因此极易出现对抗生素的耐药性,且多重耐药现象极为严重。沙门氏菌是危害畜禽健康养殖的病原菌之一,沙门氏菌病全年均可发生,同时该菌因污染人类食品主要包括禽肉类和蛋类等,进而导致食源性疾病的问题也是不容小视的,因此加强对沙门氏菌病的综合防控与流行病学调查具有十分重要的现实意义。■
10.3969/j.issn.1008-4754.2017.04.048
谈明禄(1982-),男,汉族,本科,助理兽医师,研究方向:兽医临床。