国内猪用疫苗中牛病毒性腹泻污染状况调查汇总

（天津市动物疫病预防控制中心天津300402）

国内猪用疫苗中牛病毒性腹泻污染状况调查汇总

徐国栋

（天津市动物疫病预防控制中心天津300402）

笔者对中国知网中关于国内猪用疫苗原料、半成品或成品中牛病毒性腹泻病毒（BVDV）污染的调查文献进行了检索，对其中所载BVDV污染相关因素进行了汇总，结果发现：2006年1月-6月，共检索、遴选到22篇文献，合计47篇次、15个时间节点、15类998份样品、10类286份阳性样品，样品平均阳性率为28.68%，各时间节点内的样品阳性率存在较大差异，其中2009年-2012年间的样品阳性率较高（31.86%，259/813），更接近于总体平均阳性率（28.66%）。

猪；疫苗；牛病毒性腹泻病毒；污染

牛病毒性腹泻病毒（bovineviraldiarrheavirus，BVDV）污染猪用疫苗是导致国内猪群中不断检出BVDV的重要原因[1-2]，为此，笔者对国内公开发表的相关文献进行了检索，对其中所载数据进行了汇总，以期能厘清国内猪用疫苗中BVDV污染的总体状况。

1 汇总方法

1.1 检索和遴选文献的方法和条件

检索中国知网中文数据库（硕博、期刊、重要会议论文）中公开发表的国内猪群BVDV感染状况调查的文献，主题是“猪＋牛病毒性腹泻”，其后通过以下5个约束条件遴选得到目的文献：①文献发表时间段为2006年-2015年；②论文所载内容详实可信；③调查对象是国内猪用疫苗；④调查内容是BVDV对猪用疫苗原料、半成品或成品的污染状况；⑤对所载内容重复、数据反复利用的个别文献，酌情选取最初发表的或检测数据较完整的一篇文献作为参考文献。

1.2 文献中原始数据的录入方法

以样品采集时间为序，依次录入文献中所载原始数据，包括：①采样时间（年）；②检测方法；③样品种类；④样品阳性相关数据，包括检测样品份数、阳性份数；⑤调查者，即参考文献中的第1调查者或调查者（调查者为硕博论文作者）。

1.2.1 采样时间的录入方法录入采样时间时，按文献所载的采样时间（年）顺序录入，若数篇不同文献为同年份采样则不分先后顺序录入，但先期已被录入的文献在同一时间段中应排列在前；若文献未记载采样时间则以文献投稿日期为假定采样时间，其次，若文献未记载投稿日期则以文献发表日期为假定采样时间；若同篇文献中同时记载了不同时间段的检测结果，则分别录入不同时间段及相关数据；若某文献所载采样时间段为连续的时间段，不能按每年记录时间节点，则按连续时间段为节点录入，例如某调查者在2014年-2015年的时间段连续采样，但检测数据中不能区分2014年、2015年中每年份中的检测结果，则以2014年-2015年为时间段录入。

1.2.2 检测方法的录入方法以采样时间为序，依次录入文献所载的检测方法。当文献应用的方法为检测BVDV遗传物质时，统一命名为“核酸检测法”，其中可能包括了RT-PCR、双重或多重RT-PCR、荧光RT-PCR和套式PCR等方法；当文献应用ELISA法检测样品中BVDV抗原时，统一命名为“ELISA-抗原法”；当文献记载的方法是对猪群免疫可疑的疫苗，而后应用ELISA检测猪群BVDV血清抗体，以此推断所用疫苗是否被BVDV污染进，统一命名为“ELISA-抗体法”。

1.2.3 样品种类的录入方法以采样时间为序，依次录入文献所载采集样品的种类，若同篇文献中记载了不同的样品，则分别录入。录入时，应遵循以下原则：①若样品种类为猪瘟疫苗，但只记载猪瘟疫苗、猪瘟活疫苗而未记载其中弱毒的培养来源（如细胞源或兔源等）时，统一命名为“CSF弱毒苗”；若记载同时检测了多种弱毒培养来源的猪瘟疫苗，但检测结果未按弱毒来源分类记载，则仍命名为“CSF弱毒苗”；若记载了弱毒来源则按原文分别录入，如：猪瘟脾淋苗录入为“CSF脾淋苗”、猪瘟细胞苗录入为“CSF细胞苗”等。②若样品种类为蓝耳病活疫苗则统一命名为“PRRS疫苗”，若样品种类为伪狂犬病活疫苗则统一命名为“PR疫苗”。③若样品种类为生产疫苗的细胞培养用进口商品胎牛血清、犊牛血清，则统一命名为“进口牛血清”；若为国产商品胎牛血清、犊牛血清，则统一命名为“国产牛血清”；若胎牛血清、牛血清不能区分源于进口还是国产，则统一命名为“牛血清”。

1.2.4 样品数量、阳性样品数量的录入及阳性率的计算方法以采样时间为序，依次录入文献所载的样品采集数量、阳性样品数，并按“阳性率＝阳性样品数/样品数×100%”计算阳性率（精确到0.01%）。

1.2.5 调查者的录入方法以采样时间为序，依次录入每篇文献的第1作者或作者，同时记录文献序号。

1.3 原始数据的汇总方法

1.3.1 时间节点-篇次-样品数-阳性数-阳性率的汇总方法以汇总的各时间段为原始数据，累计每个时间段（该时间段即为一个时间节点）中样品采集的频次，如2011年间有8次样品调查的记录，则该时间节点的采样频次记为“8”，即为样品采集的频次，并按出现频次高低在表格中降序排列。以汇总的调查结果为原始数据，通过累加每个时间节点相关数据，得出阳性率相关数据，包括样品数、阳性样品数及阳性率（精确到0.01%）。

1.3.2 检测方法-篇次-样品数-阳性数-阳性率的汇总方法以汇总的检测方法为原始数据，依次对每篇文献中所载检测方法进行分类累加，累计得出各种检测方法的应用频次，按出现频次高低在表格中降序排列，并对不同检测方法中样品的阳性率（精确到0.01%）进行汇总。

1.3.3 样品种类-篇次-样品数-阳性数-阳性率的汇总方法以汇总的样品种类为原始数据，依次对各类样品进行累加，并计算出各类样品在全部文献所载样品中的比例（精确到0.01%），并按出现频次高低在表格中降序排列。

表1 猪用疫苗原料、半成品及成品中BVDV检出原始数据表

样品数阳性数阳性率192011核酸检测法CSF弱毒苗10110邓宇等[13]202012核酸检测法国产牛血清10990邓宇等[14]212012核酸检测法牛血清55100邓宇等[14]222012核酸检测法MDBK细胞33100邓宇等[14]232012核酸检测法CSF弱毒苗201050邓宇等[14]242012核酸检测法CSF弱毒苗502652郑宇等[14]252012核酸检测法PRRS疫苗500郑宇等[14]262012核酸检测法PR疫苗300郑宇等[14]272012核酸检测法MDBK细胞55100郑宇等[14]282012核酸检测法国产牛血清555396.36郑宇等[14]292012核酸检测法进口牛血清1010100郑宇等[14]302012核酸检测法CSF弱毒苗2784215.11韩文等[15]312012核酸检测法CSF弱毒苗11100陶洁等[16]322012核酸检测法CSF细胞苗8787.5曹玉美等[17]332012核酸检测法CSF脾淋苗200曹玉美等[17]342012核酸检测法CSF细胞苗23521.74蒙明璐[18]352013核酸检测法CSF弱毒苗10110李晶梅等[19]362013核酸检测法CSF弱毒苗10110李晶梅等[19]372013核酸检测法牛睾丸细胞500李晶梅等[19]382013核酸检测法ST细胞100李晶梅等[19]392013核酸检测法PK15细胞100李晶梅等[19]402013核酸检测法牛血清4125李晶梅等[19]412013核酸检测法CSF弱毒苗1400王海光[20]422013核酸检测法CSF弱毒苗10110陶洁等[21]432014核酸检测法进口牛血清11100王竞晗等[22]442014-2015核酸检测法CSF细胞苗3226.25李天芝等[23]452015核酸检测法进口牛血清4125鞠厚斌等[24]462015核酸检测法国产牛血清8562.5鞠厚斌等[24]472015核酸检测法CSF弱毒苗15426.67鞠厚斌等[24]序号年份检测方法样品种类调查方法调查人

2 结果

2.1 原始数据的录入结果（见表1）

2.2 样品中BVDV污染相关因素汇总结果

原始数据中，共录入22篇文献的相关数据，合计47篇次、15998份样品、10类286份阳性样品，平均阳性率为28.66%。

2.2.1 时间节点-篇次-样品数-阳性数-阳性率的汇总结果汇总后发现文献中共计有11个时间节点，其中以2010年、2011年、2012年、2013年间的篇次较多，占全部篇次的72.34%（34/47），样品数占全部样品数的72.75%（726/998），阳性样品数占全部阳性数的78.67%（225/286）。各节点的样品阳性率结果见表2，各节点的样品阳性率比较图见图1。

2.2.2 检测方法-篇次-样品数-阳性数-阳性率的汇总结果汇总后发现核酸检测法应用频次最高，占全部检测方法的91.49%（43/47），应用ELISA-抗原法、ELISA-抗体法的频次分别为3、1；应用核酸法检测的样品数占全部样品数的88.38%（882/998），所检测出阳性样品数占全部阳性样品数的90.91%（260/286）。不同方法检出样品阳性率的结果见表3。

图1 时间节点-样品阳性率（%）比较图

表2 时间节点—篇次—样品数—阳性数—阳性率汇总表

表3 检测方法—篇次—样品数—阳性数—阳性率汇总表

2.2.3 样品种类-篇次-样品数-阳性数-阳性率的汇总结果汇总后发现共有15类样品被检测，汇总的单类样品阳性率在0%～100%间，其中以MDBK的阳性率最高（100%，8/8），此外，疫苗相关样品、牛血清相关样品的检测数量及其阳性率较高，结果是（见表4）：①猪用疫苗或其半成品（CSF细胞苗、CSF脾淋苗、CSF疫苗半成品、CSF弱毒苗、PRRS疫苗、PR疫苗）的检测频次为28，平均阳性率为21.65%（176/813），其样品数占全部样品数的81.46%（813/998），其阳性样品数占全部阳性样品数的61.54%（176/286）。②牛血清相关样品（进口牛血清、国产牛血清、牛血清、含牛血清的细胞培养物）的检测频率为12，其样品的平均阳性率为84.3%（102/121），其样品数占全部样品数的12.12%（121/998），其阳性样品数占全部阳性样品数的35.66%（102/286）。③5类样品检测结果为阴性。

表4 样品种类—篇次—样品数—阳性数—阳性率汇总表

3 结论

3.1 国内公开发表的关于猪用疫苗BVDV污染情况的调查数据偏少

由表1和表2可以看出：2006年-2015年间，共检索、遴选到22篇关于BVDV污染猪用疫苗的文献，合计47篇次、15个时间节点、15类样品、998份样品、286份阳性样品、平均样品阳性率为28.68%。

3.2 不同时间节点的样品阳性率有差异

由表2、图1可以看出：尽管2006年、2014年样品阳性率较高（均为100%），但样品数过少，分别为2、1，统计学意义较差，而2009年-2012年间的阳性率较高，此期间样品平均阳性率为31.86%（259/813），各节点阳性率在18.18%～37.5%间，样品数占全部样品数的81.46%（813/998），其平均阳性率相关数据在全部阳性率相关数据中权重较大，样品平均阳性率更接近于总体平均阳性率（28.66%），或可说明此期间猪用疫苗中BVDV的污染问题较受业界关注。

3.3 检测猪用疫苗中BVDV污染的方法以核酸检测法为主

由表3可以看出：核酸检测法的应用频次较高91.49%（43/47），但需指出的是：或许核酸法检出的BVDV阳性率与猪群疫苗源BVDV感染率并不呈正相关，因为即便在样品中检出BVDV遗传物质也不能推断所检阳性样品具有BVDV感染性。

3.4 不同样品种类的阳性率有差异

由表4可以看出：在15类样品中，检出率较高的样品依次有MDBK细胞、各类牛血清样品、疫苗类样品，在疫苗类样品中，CSF、PRRS疫苗可检出BVDV遗传物质。此外，众所周知，常规工艺生产的兔源CSF脾淋苗中不应存在BVDV或其相关物质，从CSF脾淋苗中检测到BVDV核酸阳性的事实推断，当时可能存在以细胞苗冒充脾淋苗的现象。■

略)

10.3969/j.issn.1008-4754.2017.04.002