银屑平丸对银屑病急性期患者表皮组织VEGF、KGF和AREG的影响*

张霞 康晓晶 缪泽群 王恒

（湖北省十堰市太和医院，湖北医药学院附属医院，湖北十堰442000）

银屑平丸对银屑病急性期患者表皮组织VEGF、KGF和AREG的影响*

张霞 康晓晶 缪泽群 王恒△

（湖北省十堰市太和医院，湖北医药学院附属医院，湖北十堰442000）

目的观察银屑平丸对银屑病急性期患者表皮组织双调蛋白（AREG）、角质形成细胞生长因子（KGF）及血管内皮生长因子（VEGF）的影响。方法将316例银屑病急性期患者按入院先后分为对照组和银屑平丸组。对照组口服阿维A、窄谱中波紫外线局部（或全身照射）及外用卤米松软膏，银屑平丸组在此治疗基础上加服银屑平丸。采用皮损面积和严重程度指数（PASI）对病变皮肤评分；ELISA法定量测定治疗前后表皮组织中AREG、KGF和VEGF蛋白量；测定表皮微血管密度（MVD），流式细胞仪检测静脉血清体外培养人永生角质形成细胞株（HaCaT）细胞增殖和细胞周期，并观察临床疗效。结果治疗4周后，银屑平丸组AREG、KGF、VEGF和PASI均显著降低，HaCaT细胞抑制率提高、S期细胞数降低，有效率为83.54％，与对照组比较，差异有统计学意义（P＜0.05）。结论银屑平丸通过降低表皮组织AREG、VEGF含量，抑制KGF诱导的HaCaT细胞增殖来减少表皮细胞角化和皮下组织血管新生，降低微血管的异常增生而达到治疗银屑病急性期的目的。

银屑平丸急性期银屑病双调蛋白角质形成细胞生长因子血管内皮生长因子人永生角质形成细胞株

银屑病中医学谓之“白疕”［1］。银屑病具有泛发性、易复发性和顽固性特点，牛皮癣发病与链球菌感染、患者的遗传和免疫异常等有关，临床有不同程度的瘙痒、皮肤红斑或银白色鳞屑脱屑现象［2］。研究表明，表皮组织双调蛋白（AREG）、角质形成细胞生长因子（KGF）及血管内皮生长因子（VEGF）蛋白过度表达可能与急性期银屑病病理改变密切相关［3］。VEGF蛋白可刺激真皮乳头微血管的异常增生，这会加重急性期银屑病发生发展，导致严重皮损。KGF作用的靶细胞为上皮细胞，能促进上皮细胞的增殖和生长，可诱导HaCaT细胞过度增殖加重细胞角化不全［4］。中药制剂银屑平丸临床用于治疗银屑病急性期。本临床研究重点在于观察AREG、KGF和VEGF蛋白表达、HaCaT细胞增殖、细胞周期与银屑病急性期的相关性，探索银屑平丸治疗银屑病急性期的机制，为临床治疗提供方案。现报告如下。

1 资料与方法

1.1 病例选择1）诊断标准：参照《皮肤性病学》［5］中关于银屑病急性期的诊断标准制定。2）纳入标准：西医诊断符合《皮肤性病学》急性期银屑病诊断标准；中医诊断符合符合《中医病证诊断疗效标准》中血热证的中医辨证分型标准［6］；本次治疗前1个月内未用皮质类固醇激素、银屑平丸或免疫抑制剂等药物；年龄18～62岁；本人或患者家属对治疗方法知情同意，且本治疗方案报请本院伦理委员会批准并接受监督。3）排除标准：本次治疗前1个月内应用银屑平丸或免疫抑制剂等药物或6个月应用皮质类固醇激素药物；有严重的电解质紊乱及肝肾功能损害；哺乳期或妊娠期妇女；合并严重精神系统疾及临床资料不全者。

1.2 临床资料选择十堰市太和医院皮肤科2015年5月至2016年7月期间收治的住院急性期银屑病患者316例。按照随机数字表法分为对照组和银屑平丸组，每组158例。对照组男性76例，女性82例；平均年龄（36.70±5.30）岁；平均病程（42.50±7.80）d。银屑平丸组男性74例，女性84例；平均年龄（34.20±5.90）岁；平均病程（40.30±6.20）d。两组病例在性别、平均年龄、平均病程等方面差异无统计学意义（P＞0.05）。

1.3 治疗方法对照组口服阿维A胶囊（重庆华邦制药有限公司，批号B1420007670），每日25 mg/次，治疗2周后效果不满意及无明显毒性反应，剂量可逐渐增至每日50～75 mg/L次；皮损区局部涂抹卤米松软膏（香港澳美制药厂，批号A201501011）；窄谱中波紫外线局部或全身照射治疗，照射剂量参数为0.3～0.5 J/cm2，若无红斑刺激等反应，每次可增加0.1 J/cm2剂量，但最大不超过1.6 J/cm2。隔日1次，视病情恢复情况照射治疗7～10次。银屑平丸组患者在对照组的治疗基础上加服银屑平丸（山西华元医药生物技术有限公司，规格0.24 g/丸，批号A1400012047），每次2～4丸，每日3次，以上治疗4周。

1.4 观察项目在治疗前后分别用ELISA法定量检测患者表皮组织中的AREG、KGF、VEGF、MVD；流式细胞仪检测静脉血清体外培养HaCaT细胞周期G0/ G1、G2/M、S和HaCaT细胞抑制率。

1.5 PASI评分标准及疗效标准1）PASI评分方法：皮损面积评价时先将全身分为头部、上肢、躯干、下肢4个部位，PASI评分时对以上部位皮损面积和严重程度指数分别评定。PASI总分为4个部位相加。皮损面积评分为7分制（0～6）：0分为0％；1分为＜1 0％；2分为10％～29％；3分为30％～49％；4分为50％～69％；5分为70％～89％；6分为90％～100％。严重程度指数是对身体各部位脱屑、红斑及浸润评分（5分制，0～4）：0分为无症状；1分为轻度；2分为中度；3分为重度；4分为极其严重。2）疗效评定分为治愈、显效、好转和无效。治愈为皮疹95％以上或完全消退；显效为皮疹消退达60％～95％；好转为皮疹消退在30％以上但不到60％；无效为不足30％或未消退。有效率=（治愈例数+有效例数）/总例数×100％。

1.6 统计学处理应用SPSS17.0统计软件。计量资料以（±s）表示，组间的均数检验采用多因素方差分析，率的比较用χ2检验，相应的多因素分析分别采用双向方差Cmh χ2检验，组间两两比较采用t检验。P＜0.05为差异有统计学意义。

2 结果

2.1 两组患者临床疗效比较见表1。银屑平丸有效率明显高于治疗组（P＜0.05）。

表1 两组临床疗效比较（n）

2.2 两组患者治疗前后AREG、KGF和VEGF含量的比较见表2。治疗后，对照组AREG明显降低（P＜0.05），但KGF和VEGF与同组治疗前比较，差异无统计学意义（P＞0.05）；银屑平丸组治疗后AREG、KGF和VEGF均较治疗前明显降低（P＜0.05）；银屑平丸组治疗后与对照组比较差异有统计学意义（P＜0.05）。

表2 两组治疗前后AREG、KGF和VEGF含量比较（±s）

表2 两组治疗前后AREG、KGF和VEGF含量比较（±s）

与同组治疗前比较，*P＜0.05；与对照组治疗后比较，△P＜0.05。下同。

组别时间VEGF（pg/mL）KGF（pg/mL）AREG（ng/mL）银屑平丸组治疗前21.58±2.81（n=158）治疗后10.25±2.20*△对照组治疗前22.17±3.42 59.62±7.2332.47±4.24 18.34±2.018*△15.56±2.07*△60.29±5.1231.73±4.51（n=158）治疗后20.03±2.27 57.18±5.7724.02±2.75*

2.3 两组患者治疗前后PASI和MVD比较见表3。两组治疗后PASI和MVD均明显降低（P＜0.05）；银屑平丸组治疗后PASI与对照组比较，差异有统计学意义（P＜0.05），但MVD与对照组相当（P＞0.05）。

表3 两组治疗前后PASI和MVD比较（±s）

表3 两组治疗前后PASI和MVD比较（±s）

组别时间MVD（％）PASI（分）银屑平丸组治疗前28.36±4.2311.56±1.39（n=158）治疗后16.96±2.11*3.02±0.21*△对照组治疗前29.14±2.7212.07±2.05（n=158）治疗后18.71±2.45*4.72±0.53*

2.4 两组患者静脉血培养HaCaT细胞周期及HaCaT抑制率比较见表4。银屑平丸组HaCaT细胞S周期低于对照组，HaCaT抑制率高于对照组（P＜0.05）。

表4 两组静脉血培养HaCaT细胞周期及HaCaT抑制率比较（±s）

表4 两组静脉血培养HaCaT细胞周期及HaCaT抑制率比较（±s）

与对照组比较，△P＜0.05。下同。

3 讨论

银屑病的发病多由寒湿、湿热、风热、风寒、燥毒之邪侵入肌肤引起，这类患者多先天禀赋不足或情志内伤而致气血运行不畅、内外之邪相合而致体内血气瘀积，特别当瘀血内停后瘀久而化热，瘀热互结，搏于气血而致病［7］。由于银屑病的“血瘀、血热和血燥”贯穿于疾病发展的全过程，故中医治疗多强调凉血养阴为主，兼以活血解毒为辅，银屑平丸就是基于这一病机和治疗原则拟方，具有清热解毒、疏通气血、软坚消积、凉血养阴、除燥湿及杀虫之效［8］。

VEGF可促进银屑病急性期病变皮损处组织血管新生，这可能会激活真皮乳头微血管的内皮细胞，促进表皮细胞的生长而加重银屑病急性期的病理改变［9］。而AREG也是一种与VEGF相似的表皮促生长因子，AREG可刺激人肿瘤细胞及成纤维细胞增殖，在银屑病急性期表皮组织中高表达［10］。另有研究表明，KGF主要来源于T淋巴细胞和成纤维细胞，其在皮肤角化不全和过度增殖等形态学改变的过程中发挥主导作用。KGF主要由表皮组织上的T淋巴细胞活化后刺激成纤维细胞分泌而来，KGF分泌过多会造成表皮细胞角质过度而加重银屑病急性期的病理改变［11］。本临床研究观察了银屑平丸对银屑病急性期皮肤组织中AREG、KGF、VEGF和HaCaT细周期及抑制率的影响。结果发现，银屑平丸组患者在治疗4周后，AREG、KGF、VEGF和PASI均显著降低，HaCaT细胞抑制率提高、S期细胞数降低，有效率达83.54％。这一结果提示银屑平丸主要是通过抑制AREG、KGF和VEGF分泌、降低Ha-CaT细胞数达到治疗银屑病的目的。这与本方中白花蛇舌草、生地黄、大青叶、半枝莲专清热解毒、凉血化瘀养阴有关。银屑平丸针对银屑病急性期的热瘀病机，方中赤芍、牡丹皮、丹参、紫草等具有清热凉血、活血化斑的作用；白鲜皮以皮达皮、清热祛风止痒；旱莲草和女贞子可养阴生津，还可助生地黄加强滋阴之功效，甘草清热解毒兼调和诸药，又可顾护脾胃；本方清热之中兼以养阴、凉血与活血散瘀配伍并用，共奏清热解毒、凉血散瘀、养阴生津之功［12］。在本临床研究中，笔者还发现银屑平丸可加强与阿维A胶囊抑制HaCaT细胞增殖的作用，阿维A胶囊为抗皮肤角化药，可直接抑制表皮I型转谷氨酰胺酶和T淋巴细胞增殖、促进角质形成细胞分化，同时还会抑制角质形成细胞增殖、调节表皮细胞分化和增殖作用［13-14］。银屑平丸通过提高HaCaT细胞抑制率、降低S期细胞数来达到降低角质形成细胞分化和增殖，减轻急性期银屑病临床症状，PASI评分得以降低。

总之，本研究表明，银屑平通过抑制VEGF分泌，抑制表皮病变组织皮下血管新生、重建、降低真皮乳头微血管的异常增生，提高HaCaT细胞抑制率、降低S期细胞数，与阿维A共同抑制T细胞增殖介导的炎症反应［15］，抑制与VEGF同源的细胞因子AREG的分泌来减少成纤维细胞和肿瘤细胞的增殖，使KGF介导的表皮细胞过度角化现象减轻，从而达到治疗寻常型银屑病的目的。

［1］刘涛，朱建平.“白疕”及其相关病名考辨［J］．中国科技术语，2016，12（1）：54-57.

［2］鹿见香，白彦萍.白彦萍教授应用清热凉血方治疗银屑病经验总结［J］.中国中医急症，2014，23（1）：68-78.

［3］刘俊伶，冯燕艳，普雄明，等.急性期银屑病与代谢综合征的流行病学［J］.实用皮肤病学杂志，2014，7（6）：444-445.

［4］鹿见香，李锘，朴珉贞，等.祛银颗粒对角质形成细胞生长因子诱导的HaCaT细胞增殖及分泌TNF-α的影响［J］.中国中医急症，2014，23（6）：1025-1028.

［5］张学军.皮肤性病学［M］．北京：人民卫生出版社，2012：141．

［6］国家中医药管理局.中医病证诊断疗效标准［M］.南京：南京大学出版社，1994：154-155.

［7］席建元，张亚南，李小鹏，等.凉血养阴法对寻常型银屑病患者外周血VEGF和OPN表达的影响［J］.中国中西医结合皮肤性病学杂志，2014，13（4）：216-215.

［8］彭丹，席建元，祁林，等.银屑平丸联合阿维A胶囊治疗寻常型银屑病的疗效观察［J］.中国中西医结合皮肤性病学杂志，2015，14（1）：41-42.

［9］龙剑文，皮先明，涂亚庭，等.进行期寻常性银屑病皮损β-连环蛋白、VEGF和VEGFR-2的mRNA表达［J］．中国皮肤性病学杂志，2015，1（1）：29-31.

［10］黄萍，郭俐宏，陈少秀，等.丹槐银屑浓缩丸对银屑病模型兔血管内皮生长因子及其受体表达的影响［J］.国际中医中药杂志，2016，38（4）：345-349.

［11］赵一，胡晋红.银屑病皮肤过度增殖相关细胞因子研究进展［J］.免疫学杂志，2013，29（1）：74-77.

［12］席建元，陶璇，李小鹏，等.银屑平丸治疗寻常型银屑病的疗效及对血清IL-8的影响［J］.湖南中医药大学学报，2012，32（1）：51-53.

［13］栾超，杨永红，王焱，等.急性期银屑病患者皮肤中原位记忆T淋巴细胞的检测［J］.中华皮肤科杂志，2014，47（11）：800-802.

［14］刘旭星.阿维A联合窄谱中波紫外线治疗65例中重度寻常型急性期银屑病疗效观察［J］.中国药物与临床，2012，12（6）：786-787.

［15］彭丹，席建元，祁林，等.银屑平丸联合阿维A胶囊治疗寻常型银屑病的疗效观察［J］.中国中西医结合皮肤性病学杂志，2015，14（1）：41-42.

Effect of Yinxieping Pill on Acute Epidermal Tissue of Patients with Psoriasis VEGF，KGF and AREG

Zhang Xia，Kang Xiaojing，Miu Zequn，et al.Shiyan Taihe Hospital of Hubei province（Affiliated Hospital of Hubei Medical College）；Shiyan 442000，Hubei Province，China

Objective：To observe the drugamphiregulin Yinxieping Pill on epidermal tissue of patients with acute psoriasis（AREG），keratinocyte growth factor（KGF）and vascular endothelial growth factor（VEGF）effect. Methods：316 cases of patients with acute psoriasis were divided into control group and Yinxieping pill group. The control group oral acitretin，A NB-UVB（local or systemic irradiation）and topical ointment Halometasone therapy，Ping pill group and psoriasis in Yinxieping pill.The psoriasis area and severity index（PASI）score of skin lesion；ELISA quantitative determination of AREG，KGF and VEGF protein before and after treatment in the epidermis of skin；Determination of microvessel density（MVD），flow cytometry detection serum in vitro cultured human immortalized keratinocytes strain（HaCaT）cell proliferation and cell cycle，and to observe the clinical curative effect.Results：After treatment，Yinxieping pill group AREG，KGF，VEGF and PASI were significantly decreased，HaCaT cell inhibition rate increased，the number of S cells decreased and the effective rate was 83.54％，compared with the control group and the same group before treatment（P＜0.05），the difference was statistically significant.Conclusion：Yinxieping pill by decreasing AREG and VEGF content of epidermal tissue，inhibit KGF induced proliferation of HaCaT cells to reduce angiogenesis of keratinized cells and subcutaneous tissue，hyperplasia of epidermal lesions，reduce microvascular and to treat psoriasis like pathological changes in acute stage

Yinxieping pill；Acute psoriasis；Amphiregulin；Keratinocyte growth factor；Vascular endothelial growth factor；Human immortalized keratinocyte cell line

R758.63

A

1004-745X（2017）06-1094-04

10.3969/j.issn.1004-745X.2017.06.052

2016-09-09）

湖北省十堰市太和医院科研项目（2016JJXM041）

△通信作者（电子邮箱：524078242@qq.com）