高效液相色谱法测定吡罗昔康注射液的有关物质及含量

李倩

摘要：目的 建立HPLC法测定吡罗昔康注射液含量及有关物质方法。方法 色谱柱：Inertsil ODS-SP（4.6 mm×250mm，5 μm）；流动相：甲醇-0.5%冰乙酸溶液（60∶40）；流速1.0 ml/min；检测波长338 nm；柱温30 ℃。结果 吡罗昔康在2.04～51.10 μg/ml范围内呈良好线性关系Y=553235X-234531（r=0.9994），平均回收率为100.20%，RSD 1.3%。结论 本法方便、简单、准确，适于吡罗昔康注射液含量测定，而吡罗昔康注射液有关物质测定建议采用药典所用方法。

关键词：HPLC；吡罗昔康注射液；含量测定；有关物质

中图分类号：R927.2 文献标识码：A 文章编号：1006-1959（2017）14-0190-02

吡罗昔康（piroxican）是一种非甾体类抗炎药物，具有较好的解热、镇痛、抗炎疗效，主要用于缓解类风湿、风湿性关节炎及软组织病变的疼痛和肿胀等，在国内应用广泛[1-3]。查阅近年来药典发现，吡罗昔康注射剂含量测定已由最初的非水滴定衍生到目前的高效液相检测，且2015年药典中也把有关物质进一步引入到其药物质量控制当中[4]。目前可查文献中吡罗昔康有关物质及含量测定方法[5-6]与药典均有所差异，本文由此出发，考察其中报道较多的一种方法测定吡罗昔康注射剂有关物质及含量，并与药典法进行比较。

1资料与方法

1.1仪器与试药

日本岛津 LC-2010CHT型高效液相色谱仪；瑞士梅特勒XS205DU型电子天平；甲醇、乙腈由霍尼韦尔贸易（上海）有限公司提供，为色谱醇；二甲替甲酰胺、冰乙酸、磷酸二氢钾均为分析纯；吡罗昔康对照品（中国药品生物制品检定所，批号：151017，含量：98.4%）；吡罗昔康注射液（无锡华裕制药有限公司，规格为 2 ml∶20 mg）。

1.2方法

1.2.1高效液相色谱法

1.2.1.1色谱条件 色谱柱选择Inertsil ODS-SP（250 mm×4.6 mm，5 μm），流动相：甲醇-0.5%冰乙酸溶液（60∶40），检测波长338 nm，进样量10 μl，流速1.0 ml/min，柱温30 ℃[5]。

1.2.1.2溶液的制备 ①供试品溶液的制备：精密移取吡罗昔康注射液4 ml于100 ml的容量瓶中，加入2 ml二甲替甲酰胺溶解并加甲醇稀释至刻度，摇匀，取5 ml于25 ml容量瓶中，加入甲醇稀释并定容，取适量溶液经微孔滤膜（0.45 μm）过滤，取续滤液待用。②对照品溶液的制备：采用十万分之一天平称取吡罗昔康对照品10.22 mg于100 ml容量瓶中，用甲醇稀释至刻度，摇匀即得。

1.2.1.3方法学考察 ①精密度试验：在“1.2.1.1”项色谱条件下，对照品溶液过0.45 μm滤膜后重复进样6次，10 μl/次，分别测定峰面积，并计算6组数据所得的相对标准偏差RSD，结果为1.4%<2.0%，符合药典规定[7]，提示本组方法精密度良好。②重复性试验：选择同批号吡罗昔康注射剂，根据供试品“1.2.1.2①”项操作制备供试品溶液，采用“1.2.1.1”项色谱条件，进样10 μl，采集6份样品的色谱图，计算溶液的相对标准偏差RSD=1.6%（<2.0%），符合标准规定[7]，提示本组方法具有较好的重复性。③稳定性试验：于2 h、4 h、8 h、12 h取供试品溶液，采用相同色谱条件，进样10 μl，根据测得的色谱峰面积，供试品组RSD=1.7%<2.0%，提示供试品溶液在12 h内较为稳定。④回收率考察：精密移取“1.2.1.2①”项供试液2 ml于10 ml容量瓶中，保存至3个锥形瓶内，依次加吡罗昔康对照品溶液1 ml、2 ml和3 ml，加甲醇定容至刻度，过0.45 μm微孔滤膜后取续滤液，进样10 μl，对峰面积进行测定，得到回收率分别为：100.22%、100.18%和100.20%，平均100.20%，RSD 1.3%，与药典标准相符[7]。

1.2.1.4线性关系的考察 采用移液管精密移取“1.2.1.2②”下对照品溶液0.20 ml、0.50 ml、0.80 ml、1 ml、2 ml、5 ml于10 ml容量瓶中，使用甲醇稀释至刻度，澄清后，采用0.45 μm微孔滤膜过滤，得到系列标准溶液。结合對应色谱条件，进样10 μl，测定样品色谱峰面积，以峰面积和浓度为坐标，建立标准曲线，得到方程为Y=553235X-234531（r=0.9994），提示吡罗昔康浓度在2.04～51.10 μg/ml范围内与峰面积存在良好的线性关系。

1.2.2样品中吡罗昔康有关物质及含量测定 结合“1.2.1.1”项色谱条件，进样10 μl，分别测定吡罗昔康对照品溶液与3批吡罗昔康注射剂含量。记录色谱图至吡罗昔康峰保留时间的3倍，调节检测灵敏度，使对照溶液所得色谱图中吡罗昔康的峰高为满量程的20%～25%，通过自身对照法计算杂质含量。

2结果

结果显示，采用本法测定吡罗昔康注射剂中吡罗昔康含量与药典法比较，差异无统计学意义（P>0.05），而测定的有关物质含量经比较，药典法要高于本方法，差异有统计学意义（P<0.05），见表1。

3讨论

经方法学考察显示，本文所用高效液相法测定吡罗昔康含量的方法准确性高、精密度好、重现性和相关性均符合相关要求，且本法与药典方法比较可知，两组所测主成分含量差异无统计学意义（P>0.05），可见HPLC法测定吡罗昔康注射液主成分含量可行。但就有关物质来说，本法所测有关物质含量明显低于药典方法，由分析可知，药典考察体系以乙腈-0. 05 mol/L磷酸二氢钾溶液（用磷酸调节pH值至3.0）（35∶65）为流动相，检测波长为230 nm，与本文所用流动相甲醇-0.5%冰乙酸溶液（60∶40）、检测波长差异338 nm存在较大差异，而吡罗昔康相关物质中包含氯乙酸乙酯、2-氨基吡啶、糖精钠等，均在230nm有一定吸收而338 nm吸收较弱，可能是导致本文所测有关物质含量偏低原因。

综上所述，本文所用高效液相法可考虑用于吡罗昔康注射液的主成分含量分析的备选方法，而对于其相关物质测定，建议采用2015版药典中推荐的测定方式。

参考文献：

[1]陈敬苏，薛薇.吡罗昔康注射液的有关物质及含量分析[J].中国医药指南，2016（4）：46.

[2]李玲，姜燕，陈乃江.高效液相色谱法测定吡罗昔康片的有关物质[J].海峡药学，2016，28（9）：55-56.

[3]张宏祥，刘燕.高效液相色谱法测定吡罗昔康片的含量[J].现代科学仪器，2011（2）：104-105.

[4]国家药典委员会.中华人民共和国药典（二部）[S].北京：化学工业出版社，2015：471.

[5]刘洪海.HPLC测定吡罗昔康注射液含量及有关物质[J].中国现代应用药学，2015，32（9）：1125-1127.

[6]李存金，郭飞宇.反相高效液相色谱法测定吡罗昔康胶囊中吡罗昔康含量[J].中国药业，2010，19（23）：36-37.

[7]国家药典委员会.中华人民共和国药典（四部）[S].北京：化学工业出版社，2015：374-377.

编辑/王海静