沙棘籽油中维生素E含量的CGC法测定

沈 琪，王 梅

（新疆医科大学药学院，新疆 乌鲁木齐 830011）

沙棘籽油中维生素E含量的CGC法测定

沈 琪，王 梅

（新疆医科大学药学院，新疆 乌鲁木齐 830011）

目的：研究沙棘籽油中脂肪酸成分，定量分析并建立毛细管气相色谱法（CGC）测定沙棘籽油中维生素E（Vit E）含量的方法。方法：采用溶剂回流提取法提取沙棘油中挥发油成分，并用气相色谱-质谱联用法（GC-MS）对其进行定性、定量分析。采用岛津GC-2010 plus气相色谱仪，以正三十二烷为内标物对Vit E进行测定，并对该方法进行方法学考察。结果：从沙棘籽油中分离鉴定出28个化合物；采用Rtx-5毛细管色谱柱（30 m×0.25 mm，0.25 μm）；柱温为程序升温：150 ℃保持13 min，以10 ℃·min-1的升温速率升至300 ℃，保持8 min；FID检测器温度为300 ℃；进样口温度为310 ℃；无分流进样。在此条件下，Vit E和内标物分离良好，在0.02 ～ 0.43 mg·mL-1浓度范围内呈良好线性关系，r = 0.999 6。结论：建立以CGC测定沙棘籽油中维生素E含量的方法，灵敏、准确、重复性好，可作为沙棘籽油中Vit E的含量测定方法。

沙棘油；维生素E；毛细管气相色谱法

沙棘（Hippophae rhamnoides Linn.）为胡颓子科（Elaeagnaceae）沙棘属植物，是蒙药、藏药习用药材。从沙棘中提取分离得到的沙棘油，富含大量营养活性物质，近年来逐渐引起医药界的重视，并在其资源、药理、制剂、临床等方面进行了系统研究，证实沙棘油是一个药理活性强、高效、安全的药物[1-2]。现代研究表明，沙棘油具有防治胃溃疡、保护化学性肝损伤[3]、促进创面修复等作用[4]。维生素E（Vitamin E，Vit E）是沙棘油中天然抗氧化剂，含量越高，油越稳定，作为沙棘油中的重要有效成分，具有多种功效[5]。本文以Vit E为沙棘油质量控制的主要指标，通过加热回流法提取沙棘籽油，用GC-MS对其进行成分分析，并建立以CGC测定沙棘油中Vit E含量的方法[6]，旨为沙棘油的开发利用提供理论参考。

1 仪器与试药

Perkin-Elemer Autosystem XL-Turbemass型气质联用色谱仪（美国PE公司）；GC-2010 plus型气相色谱仪（日本岛津公司）；AB135-S型万分之一天平（瑞士Mettler公司）。

沙棘籽油（实验室自制，沙棘药材购自阿勒泰地区，纯度99.9%）；Vit E对照品（中国食品药品检定研究院，纯度98%，批号：G3D7-DS8F）；正三十二烷（美国Sigma公司，纯度97%）；正己烷、甲醇（色谱纯，天津市福晨化学试剂厂）；氢氧化钾（分析纯，天津市光复科技发展有限公司）。

2 方法与结果

2.1 沙棘籽油提取

通过溶剂回流提取法，将沙棘籽中的沙棘籽油溶于石油醚，回收石油醚后得到沙棘籽油[7]。得油率为8.9%。

2.2 沙棘籽油中脂肪酸成分分析及结果

色谱条件：采用PE-5MS柱（60 m×0.25 mm，0.25 μm）；柱温为程序升温：50 ℃保持3 min，以3 ℃·min-1的升温速率升至200 ℃，5 ℃·min-1升至280 ℃，保持30 min；进样口温度为300 ℃；分流比为50 : 1；载气为He（99.99%）；进样量为0.8 μL。通过GC-MS全分析共鉴定出沙棘籽油中28种化合物。

2.3 沙棘籽油中Vit E含量测定[8]

2.3.1 色谱条件 采用Rtx-5毛细管色谱柱（30 m×0.25 mm，0.25 μm）；柱温为程序升温：150 ℃保持13 min，以10℃·min-1的升温速率升至300 ℃，保持8 min；进样口温度为310 ℃；FID检测器温度为300 ℃；载气为N2，流速1 mL·min-1；无分流进样；进样体积为1 μL。

2.3.2 溶液的制备 内标物溶液：精密称取正三十二烷适量，加正己烷溶解并稀释成1 mg·mL-1的溶液，摇匀，即得。

对照品溶液：精密称取Vit E对照品适量，加正己烷溶解并稀释成含1 mg·mL-1的溶液，摇匀，即得。

供试品溶液[9-10]：称取沙棘籽油0.5 g，置25 mL棕色量瓶中，精密加入乙醚-正己烷（2 : 1）2.5 mL，甲醇2.5 mL，静置2 h，再精密加入2 mol·L-1氢氧化钾甲醇溶液1 mL，于60 ℃水浴中摇匀，静置5 min，加蒸馏水至刻度。吸取上层溶液置10 mL试管中，精密加入内标溶液3 mL，摇匀，滤过，取续滤液，即得。

2.3.3 系统适用性实验 将上述3种溶液各1.0 μL，按“2.3.1”项下方法分别进样分析，色谱图结果显示，Vit E与正三十二烷色谱峰的分离度大于2.6，Vit E理论塔板数大于5000，色谱峰形对称，见图1。

2.3.4 线性关系 分别精密吸取对照品储备液0.05、0.10、0.50、0.70、0.90、1.10、1.30 mL置25 mL棕色量瓶中，前处理后吸取上层脂肪酸甲酯，置10 mL试管中，精密加内标溶液3 mL，摇匀。分别自动进样1 μL，以进样量（X，μg）为横坐标，峰面积比值（Y，对照品/正三十二烷）为纵坐标，绘制标准曲线，线性回归方程为：Y = 0.705 7 X＋0.002，r = 0.999 6。结果表明：Vit E在0.02 ～ 0.43 mg·mL-1范围内，线性关系良好。

图1 GC图谱A – 对照品，B – 供试品；1 – 正己烷，2 – Vit E，3 – 正三十二烷Fig 1 GC chromatogramsA – reference substance, B – sample; 1 – n-hexane, 2 – Vit E, 3 –n-dotriacontane

2.3.5 精密度实验 精密吸取对照品溶液（0.43 mg·mL-1），连续进样5次，计算Vit E与内标峰面积比值的RSD为0.47%（n = 5），结果表明仪器的精密度良好。2.3.6 重复性实验 取沙棘籽油0.05 g，共6份，按“2.3.2”项下方法制备，按“2.3.1”项下色谱条件进行测定，计算Vit E与内标峰面积比值的RSD为0.48%（n = 6），表明方法重复性良好。

2.3.7 稳定性实验 称取沙棘籽油0.05 g，按“供试品溶液制备”项下方法制备，分别于配制后0、2、4、6、8 h进样测定，计算Vit E与内标峰面积比值的RSD为1.40%，结果表明样品在8 h内稳定。

2.3.8 加样回收率实验 精密称取已知准确Vit E（0.047 mg·mL-1）含量的沙棘籽油共9份，每份0.05 g，置25 mL量瓶中，分别精密加入Vit E对照品溶液储备液（1 mg·mL-1）0.5 mL、0.7 mL、1.1 mL，每个浓度制备3份，按“2.3.2”项下方法制备，按“2.3.1”项下色谱条件进行测定，结果显示Vit E的平均回收率为96.83%，RSD为0.54%，详见表1。

2.3.9 样品含量测定 取自提沙棘籽油3批，按“2.3.2”项下方法制备，按“2.3.1”项下色谱条件进行测定，详见表2。

3 讨论

GC-MS测得沙棘籽油中脂肪酸的总离子流图，经与标准谱库的质谱数据检索核对，共鉴定出28种化合物，将峰面积进行归一化法处理后，沙棘籽油中亚油酸（44.5%）和油酸（37.52%）的相对含量高于沙棘油标准（SL 493-2010沙棘籽油）中脂肪酸组成指标。亚麻酸成分略低，这可能是干燥恒重时亚麻酸因氧化损失。

表1 加样回收率实验结果. n = 9Tab 1 Result of sample recovery rate test. n = 9

表2 沙棘籽油中Vit E的含量. n = 3Tab 2 Determination of contents of Vit E in Hippophae rhamnoides oil. n = 3

《中国药典》中采用CGC内标法测Vit E的含量，选择的毛细管柱为100%二甲基聚硅氧烷固定液填充[11]。参考文献[12]使用Rtx-5型毛细管色谱柱，经实验确定检测器温度为300 ℃，进样口温度为310 ℃，柱温使用程序升温：150 ℃保持13 min，以10 ℃·min-1的升温速率升至300 ℃，保持8 min，沙棘油中指标性成分能与内标物达到很好的分离并均能被检测出。因沙棘油中化学成分复杂，参照文献[9-10]将加入甲醇和氢氧化钾甲醇溶液后的静置时间分别定为2 h和5 min，Vit E与内标物的分离效果更好。考查结果：供试品溶液中沙棘籽油浓度为0.018 g·mL-1，测得供试品溶液中Vit E浓度为0.054 mg·mL-1，即1 g油中含3 mg Vit E。

[1] 车锡平，关晓红，郭峰，等．沙棘籽油的毒性实验研究[J]．沙棘，2007，20（4）：31-33.

[2] 臧茜茜，邓乾春，从仁怀，等．沙棘油功效成分及药理功能研究进展[J]．中国油脂，2015，40（5）：76-81.

[3] Sodergren E, Cederberg J, Vessby B, et al. Vitamin E reduces lipid peroxidation in experimental hepatotoxicity in rats[J]. Eur J Nutr, 2001, 40(1): 10-16.

[4] 范惠玲，白生文，张芬琴，等．河西走廊5种沙棘果主要活性成分及对ROS清除作用比较分析[J]．天然产物研究与开发，2016，28（1）：107-111，163.

[5] 谭晓琳，彭东红．维生素E与儿童哮喘关系的研究进展[J]．国际儿科学杂志，2016，43（9）：681-684.

[6] 蔡乐，姚兰，白林．维A酸软膏中维A酸的含量测定及有关物质的检查[J]．中国药物应用与监测，2015，12（3）：144-146.

[7] 张逸，黄凤洪，马方励，等．沙棘油提取工艺研究进展[J]．中国油脂，2016，41（3）：16-20.

[8] 张凤枰，索有瑞，王洪伦，等．毛细管气相色谱内标法测定沙棘油中的脂肪酸[J]．中国粮油学报，2008，23（1）：198-202.

[9] 李娟，周震．超临界二氧化碳萃取沙棘籽油的化学成分分析[J]．中国药学杂志，1996，31（1）：19-20.

[10] 中华人民共和国药典委员会.中华人民共和国药典[S]．二部.北京：化学工业出版社，2015：1242-1243.

[11] 李奇．大豆油脱臭馏出物中生育酚、甾醇和脂肪酸的提取工艺研究[D]．天津：天津大学，2008：11-16.

[12] 毛多斌，贾春晓，孙晓丽，等．几种功能性植物油中角鲨烯和维生素E分析[J]．中国粮油学报，2007，22（2）：79-82.

Determination of vitamin E content in the oil from seed of Hippophae rhamnoides by CGC

SHEN Qi, WANG Mei
(College of Pharmacy, Xinjiang Medical University, Urumqi 830011, China)

Objective: To analyze the fatty acids composition in the oil from seed of Hippophae rhamnoides, and establish a capillary gas chromatography (CGC) method to determine the content of vitamin E in the seed oil of Hippophae rhamnoides. Methods: Oil was extracted from Hippophae rhamnoides seed by heated reflux solvent. GC-MS was adopted to determine its chemical constituents. The quantif i cation of the vitamin E (Vit E) content was conducted by GC-2010 plus. Dotriacontane was acted as the internal standard. Results: Totally 28 chemical constituents were extracted. The GC system consisted of a Rtx-5 capillary column (30 m × 0.25 mm, 0.25 μm). Column temperature was temperature programming including 150 ℃ for 13 min, rose to 300 ℃by the rate of 10 ℃·min-1and maintained 300 ℃ for 8 min. The temperature of FID detector and the injection was 300 ℃ and 310 ℃respectively. The splitless injection was adopted, Vitamin E was separated satisfactorily from dotriacontane. The calibration curve for Vitamin E was linear in the range of 0.02 – 0.43 mg·mL-1(r = 0.999 6). Conclusion: The capillary GC method was sensitive and reliable. It could be used to determine the content of vitamin E in the Seed oil of Hippophae rhamnoides.

Hippophae rhamnoides oil; Vitamin E; Capillary gas chromatography (CGC)

R917

A

1672 – 8157(2017)03 – 0154 – 03

2017-02-12

2017-04-11）

新疆维吾尔自治区优秀青年科技创新人才培养工程项目（qn2015yx018）；沙棘油纳米乳的制备研究（CXCY096）

王梅，女，副教授，研究方向：药物新剂型和药物传输系统。E-mail：wm630@163.com

沈琪，女，硕士研究生，研究方向：药物新剂型。E-mail：2529110682@qq.com