EGFR和PCNA在甲状腺乳头状癌中的表达及其临床意义

卢玉元，王新

（佳木斯大学附属第一医院肿瘤外科，黑龙江佳木斯154007）

EGFR和PCNA在甲状腺乳头状癌中的表达及其临床意义

卢玉元，王新*

（佳木斯大学附属第一医院肿瘤外科，黑龙江佳木斯154007）

目的：联合检测甲状腺乳头状癌组织中表皮生长因子受体（EGFR）和增殖细胞核抗原（PCNA）的表达及其相关性，并探讨其临床意义。方法：选取本院2010年9月至2015年12月经病理学确诊为甲状腺乳头状癌样本和癌旁组织样本各80例，病例临床资料完整。采用免疫组织化学方法检测甲状腺乳头状癌组织及癌旁组织中EGFR和PCNA的表达，并分析其临床病理特征与甲状腺乳头状癌中EGFR和PCNA表达情况的相关性。结果：EGFR和PCNA在甲状腺乳头状癌组织中的阳性表达率分别为78.75%和88.75%，在癌旁组织中的阳性表达率分别为35.00%和38.75%，差异均有统计学意义（P＜0.05）。EGFR和PCNA在有淋巴结转移与无淋巴结转移的甲状腺乳头状癌组织表达情况比较差异有统计学意义（P＜0.05）；EGFR和PCNA在不同年龄、性别、临床分期和有无家族史的甲状腺乳头状癌组织中的阳性表达率比较差异均无统计学意义（P＞0.05）。EGFR和PCNA在甲状腺乳头状癌组织中的表达呈正相关（r＝1，P＜0.01）。结论：EGFR和PCNA均有可能作为鉴别甲状腺组织良恶性病变的有意义指标。甲状腺乳头状癌组织中EGFR和PCNA的表达情况与其伴有淋巴结转移存在相关性，且EGFR和PCNA在甲状腺乳头状癌组织中的表达呈正相关。

甲状腺乳头状癌；表皮生长因子受体；增殖细胞核抗原

甲状腺癌被认为是一种在全身恶性肿瘤中约占1%的女性常见恶性肿瘤，并且在头颈部和内分泌系统中占据首位［1］，甲状腺癌的具体病因目前尚不明了，其发生可能与遗传、饮食、体内激素水平及电离辐射等多因素相关，针对甲状腺癌患者，手术治疗被认为是目前行之有效的方式，但一些患者发现时已经处于晚期或者其分化低或已转移，对这些特殊类型患者手术效果不理想［2］，甲状腺癌患者的预后与其组织学类型有一定的关系。人类表皮生长因子受体（EGFR）是一种参与细胞有丝分裂并对细胞增生、存活、黏附、迁移和分化状况等细胞生物学反应，具有调控作用的酪氨酸激酶受体家族成员［3］。细胞生物学行为的改变可能与EGFR的表达异常相关，从而引发疾病的发生。增殖细胞核抗原（PCNA）是一种对DNA合成和细胞增殖有作用的有DNA多聚酶δ辅助蛋白作用的细胞周期蛋白，细胞周期的调控失控是肿瘤共同具有的基本特征，将导致细胞异常增殖，其活性反映肿瘤的恶性倾向，细胞的增殖状态可由其在细胞内表达的高低状况来评价。已经有实验研究证明肿瘤的分级、分期及预后与PCNA的表达有一定的相关性［4］。本实验联合检测甲状腺乳头状癌组织及癌旁组织中EGFR和PCNA的表达情况，并探讨二者之间相关性及其意义。

图1 EGFR和PCNA在甲状腺乳头状癌组织和癌旁组织中的阳性表达（免疫组化染色×200）

1 材料与方法

1.1 一般资料选取2010年9月至2015年12月在本院经病理学确诊的甲状腺乳头状癌样本和癌旁组织样本各80例，其中有淋巴结转移45例，无淋巴结转移35例。患者临床资料完整，年龄21～67岁，平均年龄为（46.38±11.53）岁。

1.2 试剂兔抗人EGFR抗体即用型试剂盒和兔抗人PCNA抗体浓缩型试剂盒均购于武汉博士德生物公司；浓缩DAB试剂盒、枸橼酸盐抗原修复液、苏木素染液和免疫组化PV试剂盒均购自福州迈新公司。石蜡切片机、电烤箱、恒温水浴箱、冰箱、光学显微镜、可调微量加样器、计算机病理图文分析系统等均由佳木斯大学附属第一医院病理科提供。

1.3 方法采用免疫组化PV法研究甲状腺乳头状癌组织和癌旁组织中EGFR、PCNA的表达情况。将选取的标本蜡块按4μm厚度切片，PBS漂洗、抗原修复、再次冲洗，切片擦干后滴加3%H2O2溶液，再次冲洗，检测EGFR表达时滴加一抗（EGFR稀释度为1∶100）、检测PCNA表达时滴加适当浓度的一抗（PCNA稀释度为1∶200），冲洗，滴加相应二抗后再次冲洗，新鲜DAB工作液，苏木素染色2min，分化液浸洗后病理返蓝液洗，脱水、透明、封片，最后用PBS缓冲液代替一抗做阴性对照。

1.4 阳性结果判定由具有丰富工作经验的病理科两位医师在高倍镜视野下，双盲随机观察100个细胞，评判方法：（1）阳性细胞所占百分比：分为5个等级，分别为0分、1分、2分、3分、4分，其阳性细胞数分别＜10%、10%～25%、26%～50%、51%～75%、＞75%。（2）染色程度评分：分为3个等级，分别为：1分、2分、3分，分别为淡黄色、棕黄色、棕褐色。（1）+（2）＜3分为阴性，（1）+（2）≥3分为阳性。按分数将表达程度分4个等级：分别为0～2分、3～4分、5～8分、＞9分，对应阴性（-）、低表达（+）、中表达（++）、高表达（+++），其中低、中、高表达均按阳性记。

1.5 统计学方法采用SPSS16.0软件进行统计学分析，EGFR和PCNA在甲状腺癌和癌旁组织表达比较采用χ2检验，EGFR和PCNA的相关性采用Spearman等级相关分析，以P＜0.05为差异有统计学意义。

2 结果

2.1 EGFR和PCNA在甲状腺乳头状癌和癌旁组织中的表达EGFR和PCNA在甲状腺乳头状癌组织和癌旁组织中阳性产物主要存在于细胞核内，均为黄色或棕黄色颗粒，见图1。EGFR和PCNA在甲状腺乳头状癌组织中的阳性表达率分别为63/80（78.75%）和71/80（88.75%），在癌旁组织中的阳性表达率分别为28/80（35.00%）和31/80（38.75%），差异均有统计学上有意义（χ2= 13.412、9.753，P均＜0.05）。

2.2 EGFR和PCNA表达与甲状腺乳头状癌临床病理因素的关系甲状腺乳头状癌患者的年龄、性别、临床分期和家族史等临床病理因素与EGFR和PCNA在甲状腺癌组织中的表达均无明显相关性（P＞0.05）；甲状腺癌组织中有淋巴结转移者的EGFR和PCNA的阳性表达率均明显高于无淋巴结转移者（P＜0.05）。见表1。

表1 EGFR和PCNA表达与甲状腺乳头状癌临床病理因素的关系

2.3 甲状腺乳头状癌组织中EGFR和PCNA表达的相关性分析在甲状腺乳头状癌组织中，EGFR和 PCNA的表达呈正相关（r＝1，P＜0.01），见表2。

表2 甲状腺乳头状癌组织中EGFR和PCNA表达的相关性分析结果

3 讨论

甲状腺癌是一种近年来发病率呈上升趋势的常见内分泌肿瘤。甲状腺癌从病理学角度分为乳头状癌、滤泡状癌、髓样癌和未分化癌4个类型，乳头状癌占所有病理类型的80%，虽然其分化程度较好，但是淋巴结转移率却高达72%［5］。人类肿瘤细胞系中EGFR广泛表达，刘菊林等［6］研究发现在分化型甲状腺癌中EGFR的阳性表达率明显高于癌旁组织，可以作为甲状腺肿瘤良恶性的鉴别或甲状腺癌患者预后的生物学指标。叶宣光等［7］研究证实在甲状腺乳头状癌发生中，EGFR异常表达升高，并可能促使淋巴结转移。PCNA又称周期素，由Miyachi等通过免疫荧光的方法在系统性红斑狼疮患者的血清中检测到抗体的表达，因在增殖细胞的细胞核中出现，所以称为增殖细胞核抗原。其主要表现细胞的增殖状态，因此在肿瘤细胞中PCNA表达的更明显，尤其是在恶性肿瘤细胞中。探讨PCNA在肿瘤细胞中的表达对于研究细胞的生长、损伤修复，评估恶性肿瘤的增殖及转移能力都有重要的意义［8］。

本研究通过联合检测EGFR和PCNA在甲状腺乳头状癌组织及癌旁组织中的表达情况，结果显示EGFR和PCNA在癌组织中的表达率明显高于癌旁组织，差异均有统计学意义（P＜0.05），提示在甲状腺良恶性病变的判断中，二者均有可能作为鉴别诊断的有意义的指标。EGFR和PCNA在甲状腺乳头状癌伴有淋巴结转移组织中的表达均明显高于甲状腺乳头状癌无转移组织，差异均有统计学意义（P＜0.05），提示甲状腺乳头状癌容易早期向淋巴结转移可能与二者的高表达相关。EGFR和PCNA与甲状腺乳头状癌患者的年龄、性别、临床分期、家族史等临床病理因素均无关（P＞0.05），在甲状腺乳头状癌组织中PCNA和EGFR的表达呈正相关（r=1，P＜0.01），提示二者对甲状腺乳头状癌可能具有关系密切的协同作用，共同对甲状腺乳头状癌的发生及发展起促进作用，EGFR和PCNA在甲状腺乳头状癌组织中的共同高表达可能协同对癌细胞起作用。目前对于EGFR和PCNA的研究正在逐步深入，这将进一步阐明甲状腺癌的发生发展机制，并对甲状腺癌及其他恶性肿瘤的临床诊断与治疗具有潜在的价值。

［1］庄晓泉，苏柳.甲状腺乳头状癌误诊原因分析［J］.实用医学杂志，2011，27（5）：887-888.

［2］都镇先，张海燕，尹福在.存活素反义寡核苷酸在人甲状腺髓样癌裸鼠模型中的抑瘤作用［J］.中国组织化学与细胞化学杂志，2007，16（1）：40-44.

［3］王章桂，孙国平.表皮生长因子受体酪氨酸激酶抑制剂耐药机制研究进展［J］.肿瘤防治研究，2008，35（4）：298-301.

［4］Tzukerman MT，Esty A，Santiso-Mere D，etal.Human estrogen receptor transactivational capacity is determined by both cellular and promoter context and mediated by two functionally distinct intramolecular regions［J］.Mol Endocrinol，1994，8（1）：21-30.

［5］刘小华，张敬杉，陈金剑，等.甲状腺乳头状癌中央区淋巴结清扫术临床分析［J］.湖南医学，2010，21（20）：58-59.

［6］刘菊林，吴跃龙，李静，等.ER、EGFR在分化型甲状腺癌中的表达及其临床意义［J］.现代生物医学进展，2013，13（5）：908-910.

［7］叶宣光，张友元，任伟民，等.表皮生长因子受体在甲状腺乳头状癌中的表达及其与上皮-间质转化的关系［J］.中国临床医学，2013，20（2）：118-121.

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Expression of EGFR and PCNA in Papillary Thyroid Carcinoma Tissuesand Their Clinical Significances

LUYuyuan，WANGXin*
（DepartmentofSurgicalOncology，The FirstAffiliated Hospitalof JiamusiUniversity，Jiamusi 154007，China）

Objective：To detect the expression of EGFR and PCNA in papillary thyroid carcinoma tissues and to explore their clinical significances.M ethods：From Sep 2010 to Dec 2015，80 cases of papillary thyroid carcinoma tissues diagnosed by pathology and 80 cases of corresponding para-cancerous tissueswere enrolled.The clinical data of patientswith thyroid carcinoma were collected.Immunohistochemicalmethod was used to detect the expression of EGFR and PCNA in papillary thyroid carcinoma tissues and para-cancerous tissues.The correlations between clinical pathological characteristics and the expression of EGFR and PCNA were analyzed.Results：The positive expression rates of EGFR and PCNA in papillary thyroid carcinoma tissueswere 78.75% and 88.75%respectively，35.00%and 38.75%in para-cancerous tissues，there were statistically significant differences（P＜0.05）.The positive expression rates of EGFR and PCNA in papillary thyroid carcinoma tissues with lymph node metastasis were significantly higher than those in papillary thyroid carcinoma tissueswithout lymph nodemetastasis（P＜0.05）.The difference of the expression of EGFR and PCNA had no relatiorship with the patients'age，gender，clinical stage and family history of disease（P＞0.05）.There was positive correlation between EGFR and PCNA expression in papillary thyroid carcinoma tissues（r＝1，P＜0.01）.Conclusion：EGFR and PCNA are likely asmeaningful indicator of differential diagnosis of benign and malignant thyroid lesions.The expression of EGFR and PCNA in papillary thyroid carcinoma tissues are correlated with lymph nodemetastasis.The expression of EGFR and PCNA in papillary thyroid carcinoma tissues is positively correlated.

papillary thyroid carcinoma；EGFR；PCNA

R736.1

A

1008-2344（2017）03-0201-03

10.16753/j.cnki.1008-2344.2017.03.005

2016-11-23

（文敏编辑）

王新（1963—），男（汉），主任医师，教授，硕士研究生导师.研究方向：肿瘤学.E-mail：278389575@qq.com