三种药物相关基因多态性在黑龙江省东部地区糖尿病患者中的分布①

方 舟，方 芳，季方茹，李艳翠

(佳木斯大学附属第一医院药剂科，黑龙江 佳木斯 154003)

三种药物相关基因多态性在黑龙江省东部地区糖尿病患者中的分布①

方 舟，方 芳，季方茹，李艳翠

(佳木斯大学附属第一医院药剂科，黑龙江 佳木斯 154003)

目的：比较黑龙江佳木斯地区健康人群和2型糖尿病患者中药物相关基因TCF7L2SNPrs12255372、IRS-1SNPrs2943650、MTHFRC677TSNPrs1801133基因多态性的分布，为糖尿病患者的诊断与个体化治疗提供临床依据。方法：应用荧光染色原位杂交法(Fish法)检测佳木斯地区健康人群和2型糖尿病(T2DM)患者TCF7L2、IRS-1、MTHFRC677T的基因型。采用SPSS17.0软件，计数资料采用χ2检验方法分析。结果：佳木斯地区健康人群和2型糖尿病患者TCF7L2、IRS-1的三种基因型频率分布组间比较P>0.05，基因型分布无统计学意义；MTHFRC677T三种基因型频率分布组间比较(P<0.05)，基因型分布有统计学意义。结论：黑龙江佳木斯地区健康人群MTHFRC677TSNPrs1801133位点基因多态性分布与2型糖尿病患者存在关联；IRS-1SNPrs2943650、TCF7L2SNPrs12255372基因位点与2型糖尿病患者没有相关性。

糖尿病，药物相关基因，基因多态性，荧光原位杂交

1 仪器和试剂

荧光原位杂交DNA测序分析程序：北京华夏时代基因科技发展有限公司；TL-988实时荧光定量PCR仪：西安天隆科技仪器有限公司；掌式离心机：珠海博迈杰生物科技有限公司；HC-3017高速离心机：科大创新股份有限公司中佳分公司；PHARM-GENE200SNP分析样品处理试剂，PHARM-GENE01SNP分析保存液(北京华夏时代基因科技

发展有限公司)。

2 方法

2.1 标本来源

选取2014-06～2016-06住院的2型糖尿病患者324例，体检健康人270例，糖尿病排除1型糖尿病、妊娠型糖尿病和特殊类型糖尿病，诊断依据WHO1998年新的诊断标准。

2.2 基因检测

2.2.1 基因多态性检测方法

检测条件：95℃预变性600s；95℃变性30s，62℃复性75s，45或50个循环。在样品检测的同时，加测3种不同基因型的质控品作为对照。

方法：取150μL新鲜全血加入含有1000μL氯化铵溶液的Eppendorf试管中，混合混匀后室温放置5min，离心5min，加入100μL耀金保，震荡混合混匀，室温放置20～30min。吸取本液1.0～1.5μL加入待测基因对应的耀金分试剂中，漩涡混合均匀，瞬时离心，上至机器中检测。

解析：分析已知反应物和产物,结合题意“调节pH≈3”可知缺项是 H+,Ce3+→Ce(OH)4,失1 e-,H2O2→Ce(OH)4,得2 e-,根据得失电子守恒,Ce3+前的化学计量数为2,H2O2前的化学计量数为1,再根据电荷守恒,H+前的化学计量数为6,最后观察可知H2O2前的化学计量数为6,配平的方程式为2Ce3++H2O2+6H2O==2Ce(OH)4↓+6H+。

2.2.2 基因型的判断

将检测的样品荧光曲线图与质控品曲线图进行比较。

TCF7L2SNPrs12255372荧光拟合曲线见图1；IRS1SNPrs2943650荧光拟合曲线见图2；MTHFRSNPrs1801133荧光拟合曲线见图3。

2.3 统计学方法

采用SPSS17.0统计软件χ2检验来计算糖尿病组和健康人组的三种基因型的分布频率，P<0.05为差异具有显著性。

图1 TCF7L2 SNP rs12255372(G>T)荧光拟合曲线

图2 IRS 1 SNP rs2943650(C>T)荧光拟合曲线

图3 MTHFR SNP rs1801133(C>T)荧光拟合曲线

3 结果

3.1TCF7L2基因多态性在健康人和糖尿病患者中的分布

选取健康人对照组270例，糖尿病患者324例，按上述方法测定TCF7L2SNPrs12255372基因型，结果：GG基因型155例，分布频率为57.4%；GT型75例，频率27.8%；TT型40例，频率14.8%，其中G等位基因频率为66.7%，T等位基因频率为33.3%。糖尿病患者324例，TCF7L2SNPrs12255372基因GG型170例，频率52.5%；GT型86例，频率26.5%；TT型68例，频率21.0%，其中G等位基因频率为65.7%，T等位基因频率为34.3%。健康人与糖尿病患者TCF7L2基因分布频率见表1。

表1 健康人与糖尿病患者TCF7L2基因型分布频率表

对照组与糖尿病组TCF7L2SNPrs12255372其等位基因概率经χ2检验，可知(χ2=0.104，P>0.05)，其等位基因分布频率没有显著性差异，无统计学意义。三种基因型GG/GT/TT分布频率，经χ2检验，可知(χ2=3.826，P>0.05)，三种基因型分布频率没有差异性，不具有统计学意义。

3.2IRS-1 基因多态性在健康人和糖尿病患者中的分布

选取糖尿病患者324例，按上述方法测定IRS1SNPrs2943650基因型：测定结果：CC型6例，频率1.9%；CT型36例，频率11.1%；TT型282例，频率87%，其中C等位基因频率为48%，T等位基因频率为92.2%。选取健康人对照组270例，测定结果：CC型9例，频率3.3%；CT型36例，频率13.3%；TT型225例，频率83.3%，其中C等位基因频率为10%，T等位基因频率为90%。健康人与糖尿病患者IRS-1基因型分布频率见表2。

表2 健康人与糖尿病患者IRS 1基因型分布频率表

对照组与糖尿病患者IRS-1SNPrs2943650基因型频率，其等位基因概率经χ2检验，可知(χ2=1.654，P>0.05)，其等位基因分布频率无显著性差异，不具有统计学意义。三种基因型CC/CT/TT频率经χ2检验，可知(χ2=2.117，P>0.05)，三种基因型分布频率没有差异性，不具有统计学意义。

3.3MTHFR基因多态性在健康人和糖尿病患者中的分布

选取健康人对照组270例，测定MTHFRSNPrs1801133基因，结果：CC型36例，频率13.3%；CT型135例，频率50%；TT型99例，频率36.7%，其中C等位基因频率为38.3%，T等位基因频率为61.7%。测定糖尿病患者324例，MTHFRSNPrs1801133基因CC型70例，频率21.6%；CT型119例，频率36.7%；TT型135例，频率41.7%，其中C等位基因频率为40.0%，T等位基因频率为60.0%。健康人与糖尿病患者MTHFR基因分布概率见表3。

表3 健康人与糖尿病患者MTHFR基因型分布频率表

对照组与糖尿病组MTHFR677等位基因概率经χ2检验，可知(χ2=0.331，P>0.05)，其等位基因分布频率没有显著性差异。对照组与糖尿病组MTHFR677基因CC/CT/TT三种基因型频率，经χ2检验，可知(χ2=12.647，P<0.05)，三种基因型分布频率有显著性差异性，具有统计学意义。

4 讨论

TCF7L2基因(又称T细胞因子-4)是Wnt信号传导通路中的转录因子，参与细胞增殖与分化的调节[5]，它位于人类10号染色体长臂25区(染色体10q25.3)，共有2159个碱基对，包含17个外显子，其表达产物是T细胞因子/淋巴细胞增强子结合因子中的一个。一些研究认为TCF7L2基因变异与2型糖尿病相关[7]，但是同时也有研究认为没有关联[8]。这可能是不同的研究者选取的基因位点及病例入选标准不同有关。总之关于TCF7L2基因多态性与2型糖尿病的关联还没有定论，有必要进行大样本深入研究。本试验研究本地区健康人TCF7L2TSNPrs12255372基因多态性与2型糖尿病患者的基因多态性不相关。MTHFR基因位于染色体1q36.3，编码区长1980bp，MTHFR基因的677位碱基胞嘧啶(Cytosine,C)变异为胸腺嘧啶(Thymine,T)，使编码的丙氨酸(Ala)变异为缬氨酸(Val)[9]而产生多态性，它与很多疾病相关[10]，本实验表明MTHFRSNPrs1801133三种基因型分布频率在黑龙江省佳木斯地区健康人和糖尿病患者中有显著性差异性。胰岛素受体底物1(IRS-1)基因突变导致胰岛素对血小板活性的抑制作用削弱，导致胰岛素抵抗。胰岛素受体底物1(IRS-1)广泛存在于胰岛素敏感的组织中，在胰岛素受体信号传导通路中处于关键部位，是胰岛素受体激酶的第一个直接底物。本实验对IRS-1SNPrs2943650基因CC/CT/TT三种基因频率进行统计分析，经χ2检验，可知(χ2=2.117，P>0.05)，三种基因型分布频率没有差异性，不具有统计学意义。

[1]唐金玲.胰岛素抵抗的2型糖尿病患者细胞因子及CRP测定的意义[J].中国现代药物应用,2014,8(3):165-166

[2]王歆，方舟，方芳,等.糖尿病患者IRS-1和MTHFR基因多态性分析[J].黑龙江医药科学，2015，38(6)：46-47

[3]RungJ,CauchiS,AlbrechtsenA,etal.GeneticvariantnearIRS1isassociatedwithtype2diabetes,insulinresistanceandhyperinsulinemia[J].NatGenet,2009,41(10):1110-1115

[4]DeFrancoE,Shaw-SmithC,FlanaganSE,etal.GATA6mutationscauseabroadphenotypicspectrumofdiabetesfrompancreaticagenesistoadult-onsetdiabeteswithoutexocrineinsufficiency[J].Diabetes,2013,62:993-997

[5]何珂,胡蕴,毛晓明.TCF7L2基因与2型糖尿病发生相关性的研究进展[J].现代医学,2013,41(2):140-143

[6]王志达,钱丹,任珉,等.亚甲基四氢叶酸还原酶基因多态性与2型糖尿病肾病的关系[J].中国慢性病预防与控制,2013,21(6):687-689

[7]边澈,李佳,张晓蕾,等.转录因子7样2基因290487-T/C多态性与2型糖尿病患者胰岛素抵抗的相关性[J].中国生物制品学杂志,2012,25(8):1017-1020

[8]刘国政,晏文强,刘双,等.TCF7L2基因rs7903146多态性与2型糖尿病的相关性研究[J].检验医学,2012,27(7):549-553

[9]任珉,齐秀英.亚甲基四氢叶酸还原酶基因多态性与2型糖尿病视网膜病变关系的Meta分析[J].中国慢性病预防与控制,2011,19(1):42-45

[10]孙玲玲，方芳，荆洪英,等.MTHFRC677T基因多态性与复发性自然流产相关性的Meta分析[J].黑龙江医药科学，2015，38(6)：52-55

佳木斯大学科学技术面上项目，编号：S2014-031。

方舟(1984～)男，黑龙江佳木斯人，硕士，主管药师。

李艳翠(1973～)女，黑龙江鹤岗人，硕士，主任药师。E-mail:liyancui3400@163.com。

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1008-0104(2017)03-0084-03

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