左乙拉西坦对癫痫模型大鼠海马组织中GFAP及PSD95表达的影响①

王 禹，聂 磊，赵冬梅，邹艳红，李春玉

(佳木斯大学附属第一医院儿内二科,黑龙江 佳木斯 154003)

左乙拉西坦对癫痫模型大鼠海马组织中GFAP及PSD95表达的影响①

王 禹，聂 磊，赵冬梅，邹艳红，李春玉

(佳木斯大学附属第一医院儿内二科,黑龙江 佳木斯 154003)

目的：研究左乙拉西坦对癫痫模型大鼠海马组织中胶质纤维性蛋白(GFAP)及突触后致密物(PSD95)表达的影响。方法：选取清结级Wistar大鼠104只作为研究对象，随机分为4组：生理盐水组(NS组)23只，左乙拉西坦对照组(LEV组)24只，模型组(Li-pilo组)27只，模型+左乙拉西坦组(Li-pilo+LEV组)30只，LEV组与Li-pilo+LEV组的大鼠每日给予左乙拉西坦200mg/kg进行灌胃，连续给药4周。分别于第7d、14d、28d采用RT-PCR方法动态检测大鼠海马组织中GFAP及PSD95表达情况。结果：经治疗后，与NS组相比，Li-pilo+LEV组第7d、14d、28dGFAP的表达水平明显升高，PSD95的表达量明显降低(P<0.05)；与Li-pilo组相比，Li-pilo+LEV组第7d、14d、28dGFAP的表达水平明显降低，PSD95的表达水平明显升高(P<0.05)。结论：左乙拉西坦的抗癫痫作用可能与通过上调PSD95的表达及抑制GFAP的表达有关，具体作用机制还需进一步研究。

左乙拉西坦；癫痫模型；海马组织；GFAP；PSD95

癫痫是儿科常见的神经系统疾病之一，是一种由大脑神经元反复发作性异常放电所引起的暂时性中枢神经系统功能障碍的慢性疾病[1]。临床研究表明，癫痫的反复、持续发作以及多种抗癫痫药物均会对发育阶段儿童的认知功能造成不同程度的影响，严重影响了患儿的生活质量[2]。因此，寻找一种既能有效抗癫痫还具有脑保护的抗癫痫药物已成为国内为关注的焦点。左乙拉西坦是一种新型广谱抗癫痫药物，其主要通过与中枢神经元突触囊泡蛋白结合而发挥抗癫痫作用，对多种癫痫发作类型具有明显的疗效而且还能改善患儿认知功能[3]。本研究通过建立癫痫大鼠模型，旨在探讨左乙拉西坦对癫痫模型大鼠海马组织中胶质纤维性蛋白(GFAP)及突触后致密物(PSD95)表达的影响。

1 材料与方法

1.1 实验动物及分组

选取清结级Wistar大鼠104只(大连医科大学动物实验中心提供)作为研究对象，体重约为(100±20)g。随机分为4组：NS组23只，LEV组24只，Li-pilo组27只，Li-pilo+LEV组30只。

1.2 实验试剂

氯化锂和匹罗卡品(Sigma公司)、左乙拉西坦(药品注册号H20091019UCBS.A.Belgim公司)、RT-PCR试剂盒和引物合成(天津市宝坻区意园达生物试剂有限公司)。兔抗大鼠GFAP抗体和兔抗大鼠PSD95抗体(上海宝泰生物科技有限公司)。

1.3 动物模型的制备

模型建立的具体步骤[4]：Li-pilo组和Li-pilo+LEV组先给予120mg/kg氯化锂腹腔注射，于20h后腹腔注射1.5mg/kg东莨菪碱，再于0.5h后腹腔注射80mg/kg匹罗卡品，并观察大鼠的行为。根据RACINE癫痫等级分级标准[5]，0级：无反应或抽搐停止；1级：面部、嘴出现节律性抽动；2级：出现点头或甩尾的现象；3级：肌阵挛、单侧肢体抽动；4级：出现多肢抽动或强直；5级：全面性强直，伴不自主跌倒。当出现Ⅳ级或以上发作持续45min后，给予地西泮10mg/kg腹腔注射终止发作。成功建模后，LEV组与Li-pilo+LEV组的大鼠每日给予左乙拉西坦200mg/kg进行灌胃，NS组和Li-pilo组给予生理盐水灌胃，连续给药4周。分别于第7d、14d、28d提取大鼠海马组织，采用RT-PCR方法动态检测大鼠海马组织中GFAP及PSD95表达情况。

1.4RT-PCR方法检测大鼠海马组织中GFAP及PSD95表达水平

PCR反应条件：预变性(95℃，5min)，变形性(95℃，30s)，退火(55℃，30s)延伸(72℃，60s)，终末延伸(72℃，10min)。最后采用Quantityone凝胶成像系统采集和分析结果。

1.5 统计学方法

2 结果

(1)NS组与LEV组相比，GFAP及PSD95表达水平无明显差异(t=2.473,P>0.05)；(2)与NS组相比，Li-pilo+LEV组第7d、14d、28dGFAP的表达水平明显升高(t=5.849,P<0.05)；与Li-pilo组相比，Li-pilo+LEV组第7d、14d、28dGFAP的表达水平明显降低(t=6.752,P<0.05)。(3)与NS组相比，Li-pilo+LEV组的PSD95的表达量明显降低(t=4.137,P<0.05)；与Li-pilo组相比，Li-pilo+LEV组的PSD95的表达水平明显升高(t=4.642,P<0.05)。见表1。

表1 大鼠海马组织中GFAP和PSD95的相对表达量比较

3 讨论

癫痫是自发、短暂、慢性、反复发作的神经系统疾病，好发于小儿时期[6]。癫痫科引起患儿认知功能障碍、记忆力减退等表现，长期反复的癫痫发作可对患儿日后生长发育及生活质量造成严重影响[7]。国内外研究表明，左乙拉西坦作为一种新型广谱抗癫痫药物，在治疗各类型癫痫疾病中均有明显疗效，该药物主要通过与中枢神经元突触囊泡蛋白结合而发挥抗癫痫作用[8]。PSD95是突触后膜的一层致密的蛋白质复合体，与N-甲基-D-天冬氨酸结合，共同参与兴奋性突触的可塑性调节。GFAP属于细胞骨架蛋白家族，在调节星形细胞运动及神经突触形成过程中具有重要意义[9]。本研究结果表明，应用左乙拉西坦治疗后，大鼠海马组织中GFAP的表达水平明显升高，PSD95的表达水平明显降低。综上所述，左乙拉西坦的抗癫痫作用可能与通过上调PSD95的表达及抑制GFAP的表达有关，具体作用机制还需进一步研究。

[1]聂磊,王海燕,李春玉,等. 左乙拉西坦对癫痫大鼠海马组织中GFAP及5-HT2A受体表达的影响[J]. 黑龙江医药科学,2015,38(2):26-28

[2]聂磊,张涛,王海燕,等. 左乙拉西坦对癫痫大鼠海马组织中5-HT2A受体表达及其认知功能的影响[J]. 中国老年学杂志,2015,35(19):5415-5417

[3]韩丽萍,王海燕,乔霜,等. 左乙拉西坦对癫痫大鼠海马组织中μ-calpain及caspase-3表达的影响[J]. 黑龙江医药科学,2015,38(6):61-62，64

[4]潘晓华,王海燕. 左乙拉西坦对癫痫大鼠海马组织EphA4表达的影响[J]. 齐齐哈尔医学院学报,2016,37(10):1272-1273

[5]王禹,王海燕,王婧,等. 左乙拉西坦对癫痫大鼠海马组织中Syt1和PSD95表达的影响[J]. 黑龙江医药科学,2016,39(4):14-15

[6]王一川,穆国军,王影. 左乙拉西坦对致痫大鼠海马组织中BMP4表达的影响[J]. 黑龙江医药科学,2014,37(3):28-30

[7]冯宏达,王禹,王海燕,等. 左乙拉西坦对癫痫大鼠海马组织中突出后致密物PSD-95表达的影响[J]. 黑龙江医药科学,2014,37(4):63-64

[8]张岩,王海燕,王影,等. 左乙拉西坦对癫痫大鼠认知功能的影响研究[J]. 黑龙江医药科学,2013,36(2):6-8

[9]王海燕,王影,聂磊,等. 左乙拉西坦对癫痫大鼠认知功能及海马组织中NPY和NCAM-mRNA表达的影响[J]. 黑龙江医药科学,2013,36(3):3-5

1.黑龙江省卫生计生委科研课题，编号：2014-225；2.佳木斯大学校级面上项目，编号：13z1201542。

王禹(1968～)男，黑龙江佳木斯人，硕士，副主任医师。

R

A

1008-0104(2017)03-0018-02

2016-11-19)