GC-MS法分析红皮云杉针叶挥发油成分①

赵宏博，沈 宇，方洪壮

(1.佳木斯大学康复医学院，黑龙江 佳木斯 154003；2佳木斯大学药学院，黑龙江 佳木斯 154007)

GC-MS法分析红皮云杉针叶挥发油成分①

赵宏博1，沈 宇2，方洪壮2

(1.佳木斯大学康复医学院，黑龙江 佳木斯 154003；2佳木斯大学药学院，黑龙江 佳木斯 154007)

目的：初步分析出红皮云杉针叶挥发油中的化学成分。方法：以水蒸气蒸馏法提取红皮云杉针叶挥发油，用GC-MS技术，采用自动解卷积定性系统(AutomatedMassSpectralDeconvolutionandIndentificationSystem,AMDIS)结合色谱保留指数进行定性分析。结果：在红皮云杉针叶挥发油中共得到74个色谱峰，最终确定了58种化学成分，峰面积总和占总含量的92.58%，其中含量最高的物质为乙酸龙脑酯。结论：用GC-MS方法，结合AMDIS和色谱保留指数能够高效快捷的分析重叠峰体系，使定性更加准确。

红皮云杉；GC-MS；水蒸气蒸馏法；AMDIS；色谱保留指数

红皮云杉(PiceakoraiensisNakai)为松科云杉属植物，又名虎尾松，高丽云杉，其耐荫，喜冷湿环境，抗病力强，主要分布在我国小兴安岭、长白山林区一带。现已被证实松针挥发油具有重要的药用价值，能够发挥镇痛、抗炎、抗菌、镇咳、化痰、降血脂和降血压等作用，同时也是香料、化妆品、食品及化学工业上的重要原料[1～6]。国内有学者研究发现，红皮云杉挥发油中的化学成分在数量和含量上与其他几种松科植物存在一定差异[7]，尚未有人将自动质谱解卷积定性系统(AMDIS)结合色谱保留指数对其挥发油样本总离子流图的重叠色谱峰进行解析，更加准确的对其化学成分进行定性分析。本研究首次采用GC-MS技术对黑龙江省萝北产红皮云杉针叶挥发油样品进行测定，对比质谱数据库，应用自动质谱解卷积系统并结合色谱保留指数，对红皮云杉针叶挥发油成分进行解析，为红皮云杉的开发和利用提供科学的理论依据。

1 仪器和材料

HP7890A-5975型气相色谱-质谱联用仪(美国安捷伦科技有限公司)；标准玻璃挥发油提取器(上海满贤经贸有限公司)。正己烷(天津市大茂化学试剂厂，分析纯)；无水硫酸钠(上海绿源精细化工厂，色谱纯)；正构烷烃混合对照品C8～C40(美国AccuStandard公司，编号：DRH-008S-R2)。红皮云杉新鲜针叶于2015年8月采于黑龙江省萝北市，经形态和显微鉴定为松科、云杉属植物红皮云杉(PiceakoraiensisNakai)的针叶。

2 实验方法

2.1 供试品溶液制备

取阴干粉碎后的红皮云杉针叶约50g，置1000mL圆底烧瓶中，加入10倍量的蒸馏水及少许沸石，采用水蒸气蒸馏法提取挥发油，加热回流6h，分离油层，加适量无水硫酸钠进行脱水，得淡黄色挥发油，即得。

2.2GC-MS条件

色谱柱为HP-5MS(30m×0.25mm×0.25μm)石英毛细管柱，进样口温度280℃，初始柱温50 ℃，以3 ℃·min-1升至140℃，保持10min，以15℃·min-1升至215℃，以5℃·min-1升至260 ℃，保持2min。载气为高纯氦气，分流比为40:1，进样量1μL。EI温度：230℃，接口温度280℃，四级杆温度150℃，扫描范围30～500aum，溶剂延迟时间为：3.75min。

2.3 化学成分分析

取红皮云杉针叶挥发油样品，按照上述实验条件进样，获得样品的总离子流图，利用AMDIS解析其中的重叠色谱峰并提取出每个成分的“纯净”质谱图和相关色谱信息，并将这些信息与目标物谱库中化合物进行比较，利用质谱工作站通过NIST08质谱库结合色谱保留指数对各个色谱峰进行结构确定。采用峰面积归一化法进行定量分析，计算红皮云杉针叶挥发油中各挥发性成分的相对百分含量。

3 结果与讨论

3.1 结果

在设定条件下对红皮云杉针叶挥发油进行测定，获得红皮云杉针叶挥发油总离子流图见图1。通过GC-MS色谱工作站积分，采用AMDIS结合保留指数的方法，从供试品样品中，共得到74个色谱峰，峰面积百分含量大于0.1的有69个化合物，占总含量的99.40%，最终确定了58个化合物见表1。其中，乙酸龙脑酯、龙脑、樟脑等成分的含量较高，分别占26.67%、11.68%和11.10%。所鉴定的化合物中，有40个化合物是采用质谱数据库进行比对确定；有18个化合物经过AMDIS解析并结合保留指数辅助定性确定。

表1 红皮云杉针叶挥发油化学成分

＊利用保留指数解析成分；#利用AMDIS辨别重叠峰。

图1 红皮云杉针叶挥发油的总离子流图

3.2 讨论

AMDIS软件能够高效、快捷的分析重叠峰体系，提取“纯净”的质谱图，降低了质谱库检索的不确定性。同时结合保留指数，对挥发油中同分异构体的区分将更加方便、准确。本研究共确定了供试品中58个化合物，应用AMDIS解析出6个化合物；应用保留指数解析出12个化合物。实践表明GC-

MS结合自动质谱解卷积定性系统和保留指数辅助定性方法可以提高对重叠色谱峰的辨别和鉴定能力，准确的分析出黑龙江萝北产红皮云杉针叶挥发油样品中的化合物，促进了红皮云杉的开发与利用。

[1]MillerB,MadilaoLL,RalphS,etal.Insect-inducedconiferdefense.Whitepineweevilandmethyljasmonateinducetraumaticresinosis,denovoformedvolatileemissions,andaccumulationofterpenoidsynthaseandputativeoctadecanoidpathwaytranscriptsinSitkaspruce[J].PlantPhysiol, 2005, 137(1):369-382

[2]BakkaliF,AverbeckS,AverbeckD,etal.Biologicaleffectsofessentialoils-Areview[J].FoodChemToxicol, 2008, 46(2):446-475

[3]LeeJH,YangHY,LeeHS，etal.ChemicalCompositionandAntimicrobialActivityofEssentialOilfromConesofPinuskoraiensis[J].MicrobiolBiotechnol, 2008, 18(3):497-502

[4]HongEJ,NaKJ,ChoiIG,etal.Antibacterialandantifungaleffectsofessentialoilsfromconiferoustrees[J].BiolPharmBull, 2004, 27(6): 863-866

[5]KimYS,ShinDH.Volatilecomponentsandantibacterialeffectsofpineneedle(PinusdensifloraS.andZ.)extacts[J].FoodMiembiol, 2005, 22(1):37-45

[6]李升, 郭楚君, 张燕, 等. 气相色谱-质谱技术分析中药丁香挥发油成分[J]. 黑龙江医药科学, 2016, 39(4):8-9

[7]周恩宝. 松科植物挥发油的提取及成分研究概况[J]. 黑龙江医药科学, 2007, 30(5):59-60

佳木斯大学科学技术研究项目，编号：S2014-011。

赵宏博(1986～)男，黑龙江佳木斯人，硕士，主管药师。

沈宇(1986～)女，黑龙江佳木斯人，硕士，讲师。E-mail:shenyu0406@126.com。

R

A

1008-0104(2017)03-0089-03

2016-12-18)