河南省郑州地区2014—2016年秋冬季腹泻患儿轮状病毒基因分型及干预研究

王艳丽 杜远举 李春力 程艳波

(1.郑州市第一人民医院 消化儿科 河南 郑州 450003； 2. 河南出入境检验检疫局 河南 郑州 450003；3.郑州人民医院 儿科 河南 郑州 450003； 4.河南省人民医院 儿科 河南 郑州 450003)

河南省郑州地区2014—2016年秋冬季腹泻患儿轮状病毒基因分型及干预研究

王艳丽1杜远举2李春力3程艳波4

(1.郑州市第一人民医院 消化儿科 河南 郑州 450003； 2. 河南出入境检验检疫局 河南 郑州 450003；3.郑州人民医院 儿科 河南 郑州 450003； 4.河南省人民医院 儿科 河南 郑州 450003)

目的 研究2014—2016年郑州地区秋冬季腹泻患儿轮状病毒基因分型及疫苗干预后发病情况。方法 收集郑州市第一人民医院消化儿科、郑州人民医院儿科、河南省人民医院儿科2014年9月至2015年3月及2015年9月至2016年3月小于5岁门诊及住院部秋冬季腹泻患儿的粪便标本1 000份，采用免疫胶体金法检测RV抗原，阳性标本进行VP7和VP4基因分型。结果 1 000份粪便标本中，624份检测到A组轮状病毒抗原，阳性率为62.4%(624/1 000)；对阳性标本进行G、P分型，2014年9月至2015年3月轮状病毒G血清型以G9型为主，和P型的组合以G9P8型为主。2015年9月至2016年3月G血清型以混合型为主，P基因型以P8型为主。624份阳性标本中，口服RV疫苗干预后再次感染的患儿以混合型感染者居多。以口服RV疫苗者为观察组，以未使用者为对照组，观察组与对照组再感染发病率差异有统计学意义(χ2=6.78，P<0.01)；观察组再感染的患儿出现腹泻天数较少，差异有统计学意义(t=6.11，P<0.001)；观察组再感染的患儿发热症状明显减少，差异有统计学意义(χ2=75.21，P<0.001)；观察组再感染的患儿无脱水症状，差异有统计学意义(χ2=20.14，P<0.001)。结论 郑州地区RV腹泻患儿流行病毒株多样，口服轮状病毒疫苗后出现感染的以混合感染型别为主，且临床表现较未使用疫苗者轻。

轮状病毒；基因分型；腹泻；干预治疗

小儿腹泻病是一种多因素、多病原引起的消化系统疾病，为世界性公共卫生问题，严重危害小儿的生长发育，也是导致婴幼儿急诊、死亡的主要原因之一。A组轮状病毒(rotavirus ，RV)是导致婴幼儿非细菌性腹泻、院内交叉感染性腹泻的最重要病原体[1-2]。RV感染较普遍，目前治疗小儿RV腹泻方法主要是对症治疗，预防脱水，维持电解质平衡，以及使用轮状病毒疫苗，因此预防极其重要[3]。RV型别多样，流行病学较复杂，在不同地区不同季节其流行型别各不相同，郑州地区作为人口较多省会城市，为温带大陆气候，四季分明，也是我国RV流行的代表性地区之一。本研究旨在对郑州地区婴幼儿A组RV腹泻进行分子流行病学研究，并初步探讨RV干预后再次感染患儿RV基因分型与临床症状严重程度的关系，为RV的流行病学检测提供科学数据。

1 资料和方法

1.1 标本及其来源 收集2014年9月至2015年3月及2015年9月至2016年3月郑州市第一人民医院消化儿科住院部和门诊秋冬季腹泻患儿500例，郑州人民医院儿科300例，河南省人民医院儿科200例。其中2014年9月至2015年3月500份，2015年9月至2016年3月500份，符合临床诊断标准见参考文献[4-6]。该研究经医院医学伦理委员会批准后实施。

1.2 试验方法 RT-PCR扩增RV的VP7全长基因及net-PCRVP7血清分型。分型方法见参考文献[7]。Net-PCR进行VP4基因分型，分型方法见参考文献[8]。

1.3 统计学方法 数据采用SPSS 17.0统计学软件进行分析，定量资料采用独立样本t检验，定性资料采用χ2检验，P<0.05为差异有统计学意义。

2 结果

2.1 RV检测结果以及RV感染的年龄和性别分布 1 000份粪便标本中A组RV阳性样本为624份，阳性率为62.4%，624份阳性标本中年龄和性别分布如表1。

表1 2014年9月至2015年3月及2015年9月至2016年3月RV阳性标本年龄与性别分布(n)

2.2 RV的G血清型和P基因型型别特征 2014年9月至2015年3月G9型为优势株，P基因型以P8为主。2015年9月至2016年3月混合型成为优势株，P基因型以P8为主。见表2、3。

表2 2014年9月至2015年3月及2015年9月至2016年3月G分型

表3 2014年9月至2015年3月及2015年9月至2016年3月P基因分型

2.3 RV病毒分型及口服轮状病毒疫苗后再次感染情况 624份阳性标本中，以口服RV疫苗者为观察组，以未使用者为对照组。观察组再次受感染的患儿有149例，对照组191例，差异有统计学意义(χ2=6.78，P<0.01)；观察组再感染的患儿临床出现腹泻天数较少，差异有统计学意义(t=6.11，P<0.001)；观察组再感染的患儿发热症状明显较少，差异有统计学意义(χ2=75.21，P<0.001)；观察组再感染的患儿无脱水症状，差异有统计学意义(χ2=20.14，P<0.001)。见表4。

表4 口服轮状病毒疫苗后再次感染情况及感染症状比较

3 讨论

本课题研究结果显示，郑州地区2014—2016年秋冬季腹泻患儿RV阳性率为62.4%，其中2014年9月至2015年3月阳性率为59.6%，2015年9月至2016年3月RV阳性率为65.2%，高于程艳波等[7-8]2010年郑州地区监测阳性率的50%，低于王艳丽等[5]2011至2013年郑州地区监测阳性率的68%，感染比例较往年相比有所下降，但RV仍是引起郑州地区婴幼儿腹泻的主要因素。

RV由3层蛋白衣壳包裹11条双链核糖核酸(RNA)片段组成，2个外层衣壳蛋白VP4和VP7，可分别诱导中和抗体的产生，发挥免疫保护作用。目前人们发现RV已有27个G血清型和35个P基因型被确定。在世界范围内不同地域不同时间报道的RV流行株不同。全球最主要的流行毒株为G1型，其次是G3、G4、G2[9]，不同型别之间具有一定的免疫交叉保护性。2003年8月至2007年7月，G3型被认为是中国最常见的轮状病毒株，导致超过50%的病例[10]。如上海地区2001-2007年G基因型以G3为优势株，2008—2011年G9和G1呈波动上升趋势，尤其G9于2011年成为主要流行株[11]。兰州地区G2型在2011年为优势型，G3型在2009—2011年为优势株，G8、G9型在2011—2013年为优势株，G9和G3型在2013—2014年为优势株[6]。郑州地区2011年9月至2012年3月以G3型为主要流行株，2012年9月至2013年3月则以G9为主要流行株[5]。本研究发现郑州地区2014年9月至2015年3月以G9型为主要流行株，2015年9月至2016年3月以混合型感染型别为主，其次为G9型，混合型感染较前有上升趋势，流行株在郑州地区不同年份出现了变异，且流行株以混合感染为主，考虑可能与RV突变有关。

目前引起婴幼儿腹泻的轮状病毒P基因型多为P8和P4型，同时也发现了一些既往不常见的P6型。由于我国地域广阔，各省份的优势株更替速度不同，从全国总体来看P分型，自2006年以来以P8型为主，但G、P组合流行株随着G分型的变更也出现了变化[12]。豫北地区2006—2012年间发现P8型多见，其次有P4型、P11型、P6型、P12型、P10型[13]。本研究发现郑州地区2014—2016年P基因型均以P8型为主，有少量P6型出现，并发现P基因型混合感染，混合感染比例较往年有逐年增加的趋势。

目前世界上被批准应用的人类轮状病毒疫苗主要针对以往认为常见的G1～G4及P8型来预防感染[14]。关于在我国使用的轮状病毒减毒株的Ⅲ期临床评价，无相关文献报道。只有一些上市后的保护性调查研究。2002—2004年在广州的研究表明接种一剂轮状病毒减毒株对预防5岁以下儿童因轮状病毒腹泻导致的住院的保护率为73.3%，对12～23月龄的幼儿的保护率要比2～11月龄的婴幼儿的保护率髙，分别为80.9%和60.0%[15]，说明轮状病毒疫苗具有保护作用。本研究将624份阳性标本分为口服RV疫苗组(观察组)，以未使用RV疫苗者为对照组，研究发现使用RV疫苗干预后再次感染的病例以混合感染病例居多，且观察组临床表现一般为低热或中等热，腹泻次数为3～5次，病程为3～5 d，无脱水症状，对照组表现为高热，并伴有呕吐，且病程一般为1周左右，出现脱水症状患儿多，较观察组临床表现较重，差异有统计学意义(P<0.05)。这表明RV疫苗在预防患儿感染方面具有一定意义，但目前疫苗保护具有局限性，临床出现使用疫苗后再次感染情况，目前对使用疫苗干预再感染的研究报道较少，需要进一步深入研究以了解疫苗干预治疗后对临床的影响。

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The analysis and intervention study about genotypes of rotavirus in infantile diarrhea in Zhengzhou from autumn to winter in 2014—2016

Wang Yanli1, DU Yuanju2, Li Chunli3, Cheng Yanbo4

(1.Digestion of Peadiatrics, the First People's Hospital of Zhengzhou, Zhengzhou 450003, China；2. Henan Entry-Exit Inspection and Quarantine Bureau, Zhengzhou 450003, China；3.Department of Pediatrics, the People's Hospital of Zhengzhou,Zhengzhou 450003, China；4.Department of Pediatrics, the People's Hospital of Henan Province, Zhengzhou 450003, China)

Objective To study the genotypes and the reinfection after vaccines interventions of rotavirus in infantile diarrhea from September of 2015 to March of 2016 in ZhengZhou.Methods Stool samples were collected from 1 000 children who were in hospital and outpatients in the Department of Peadiatrics, the First People's Hospital and the People's Hospital of Zhengzhou, the people's Hospital of Henan Province from September of 2014 to March of 2015, and from September of 2015 to March of 2016. Immune colloidal gold reagent was used to detect rotavirus antigen. The positive samples were performed to identify rotavirus P and G genotypes. Results Out of 1 000 samples investigated,434 positive samples were detected rotavirus G genemic, the positive rate was 62.4%(624/1 000),612 positive samples were performed to identify genotypes G and P.G9 genotypes were dominated the main prevalence from September in 2014 to March in 2015, the main mixed infection types were G9P8. The mixed genotypes were dominated the main G genotypes from September in 2015 to March in 2016, the main mixed infection types were P8. 624 positive samples, after taking rotavirus vaccine the reinfection cases were most mixed genotypes.Taking rotavirus vaccine children and notaking rotavirus vaccine children were divided into observation group and control group. There was significant difference between the two groups in the reinfection rates(χ2=6.78,P<0.01); the children who got reinfection had less duration of hospitalizationin observation group, the difference was statistically significant(t=6.11,P<0.001); there were mild feverish symptoms in observation group, the difference was statistically significant(χ2=75.21,P<0.001); there were no dehydration symptoms in observation group, the difference was statistically significant(χ2=20.14,P<0.001) .Conclusion The prevalent types in Zhengzhou were various, the mixed infection cases increased than ever.The uncommon G9 types are the dominated prevence genotypes. After taking rotavirus vaccine, the reinfection cases are most mixed genotypes,and the clinical manifestation is lighter than the children who are not taking rotavirus vaccine.

rotavirus；genotype；diarrhea；therapeutic intervention

河南省科技厅公关计划项目(9412015Y0379)。

R 733.4

10.3969/j.issn.1004-437X.2017.11.002

2017-04-01)