高效液相色谱法测定食品中3 种碱性橙含量

李文辉++李窕妍++李俊毅

碱性橙是一种偶氮类碱性工业染料，主要用于纺织品、皮革制品及木制品的染色，已经被认定是一种可以使人致癌的物质，不得用于与人体长期直接接触的纺织和服装产品中。一些不法商贩为了增加食品的色泽光亮，以次充好， 在鲜海鱼、豆制品、腐竹、饮料等食品中使用碱性橙染色， 使消费者的身体健康受到了严重威胁。

碱性橙染料的种类主要有碱性橙21、碱性橙2和碱性橙22等3种，本方法采用高效液相色谱法，在GB/T 23496-2009的基础上，对色谱条件进行试验改进，建立一套更加快速、准确测定食品中非食用色素碱性橙含量的方法。

试验部分

试剂与溶液。除另有规定外，所有试剂均为分析纯，实验用水符合GB/T 6682中一级水要求。

液体样品：饮料；

甲醇，色谱纯；

乙腈，色谱纯；

20mmol/L乙酸铵溶液：称取1.54g乙酸铵溶于1000 mL水中；

定容液：取65mL甲醇加入35mL 20 mmol/L乙酸铵溶液中，混匀；

标准品：碱性橙2、碱性橙21、碱性橙22，纯度≥95 %；

1.0mg/mL 碱性橙染料标准储备溶液：分别称取100mg（精确至0.1mg）碱性橙2、碱性橙21、碱性橙22，置于100mL容量瓶中，加无水甲醇溶解并定容至刻度，混匀，该溶液在4 ℃条件下避光保存，有效期为1个月；

0.1mg/mL碱性橙染料标准溶液：准确移取10 mL碱性橙染料标准储备溶液于100mL容量瓶中，用定容液定容至刻度，混匀。

分别移取碱性橙染料标准溶液5.00mL、10.00mL、20.00mL于100 mL容量瓶中，用定容液定容至刻度，混匀，分别相当于5.00μg/mL、10.00μg/mL、20.00μg/mL浓度标准溶液。

仪器与设备。高效液相色谱，附有紫外检测器；天平：感量0.0001g和0.01g；超声波清洗仪；涡旋振荡器；电热板。

试验方法

将样品混匀，称取20g（精确至0.01g）样品于100mL烧杯中，电热板上加热挥发至近干，用定容液溶解转移到刻度试管中并定容至25mL，经0.45μm滤膜过滤后待进样。

高效液相色谱测定

色谱条件。

色谱柱：C18（4.6mm×250mm，5μm）；

流动相：甲醇+20mmol/L乙酸铵；

流速：1.0mL/min；

梯度洗脫程序参见表1；

柱温：30 ℃；

检测波长：449nm；

进样量：20μL。

标准曲线绘制。

用配制的碱性橙染料标准工作液绘制以峰面积为纵坐标、工作溶液浓度为横坐标的标准工作曲线。

结果计算

试样中每种碱性橙染料的含量按下式分别计算：

X=

式中：

X——试样中每种碱性橙染料的含量（mg/kg）；

c——由标准曲线查出的试样液中每种碱性橙染料的浓度（μg/mL）；

V——样品最终定容体积（mL）；

m——试样的质量（g）。

计算结果保留小数点后一位数字。

结果与讨论

标准谱图。如图1。

干扰试验。在色谱条件下，食品中的添加剂苯甲酸、山梨酸、糖精钠、咖啡因在449 nm 处几乎无吸收， 不会干扰碱性橙的测定。

线性关系及检出限。按试验方法对碱性橙2 、碱性橙21 、碱性橙22等3 种碱性橙混合标准溶液系列进行测定，均在5.0～20.0 μg/mL范围内与峰面积呈线性关系， 线性回归方程、相关系数及检出限（3S/N）见表2。

回收试验及精密度。按试验方法对样品做加标回收试验， 结果见表3。

作者简介：

李文辉（1971-），男，广东梅县人，工程师，研究方向：食品检验。