地榆、地榆炭对小鼠止血作用影响的实验研究※

张向阳 赵如同 刘春燕 张文立 田河林

(河北工程大学医学院生化教研室，河北 邯郸 056002)

地榆、地榆炭对小鼠止血作用影响的实验研究※

张向阳 赵如同 刘春燕 张文立 田河林

(河北工程大学医学院生化教研室，河北 邯郸 056002)

目的 探讨地榆及地榆炭止血作用机制。方法 将240只昆明种小鼠随机分为4个实验组，每组60只，雌雄各半，各组再随机分为空白组、云南白药组、地榆大剂量组、地榆小剂量组、地榆炭大剂量组、地榆炭小剂量组，每组10只，比较地榆炭和地榆对小鼠凝血时间、出血时间、血小板计数、凝血酶原时间(PT)、凝血酶时间(TT)及活化部分凝血活酶时间(APTT)的影响。结果 云南白药组、地榆大剂量组、地榆小剂量组、地榆炭大剂量组小鼠出血时间较空白组均缩短(P<0.01，P<0.05)。地榆炭小剂量组出血时间与空白组比较差异无统计学意义(P>0.05)。地榆大剂量组与地榆炭大剂量组出血时间比较差异无统计学意义(P>0.05)，地榆小剂量组与地榆炭小剂量组比较差异无统计学意义(P>0.05)。云南白药组、地榆大剂量组、地榆炭大剂量组小鼠凝血时间较空白组均缩短(P<0.01)。地榆小剂量组、地榆炭小剂量组凝血时间与空白组比较差异无统计学意义(P>0.05)。地榆大剂量组与地榆炭大剂量组凝血时间比较差异无统计学意义(P>0.05)，地榆小剂量组与地榆炭小剂量组比较差异无统计学意义(P>0.05)。地榆大剂量组、地榆小剂量组、地榆炭大剂量组小鼠血小板计数较空白组均升高(P<0.01，P<0.05)。云南白药组、地榆炭小剂量组血小板计数与空白组比较差异无统计学意义(P>0.05)。地榆大剂量组血小板计数高于地榆炭大剂量组(P<0.01)；地榆小剂量组血小板计数高于地榆炭小剂量组(P<0.05)。云南白药组、地榆大剂量组、地榆炭大剂量组小鼠PT、TT及APTT较空白组均缩短(P<0.05，P<0.01)。地榆小剂量组、地榆炭小剂量组PT、TT及APTT与空白组比较差异无统计学意义(P>0.05)。地榆大剂量组与地榆炭大剂量组PT、TT及APTT比较差异无统计学意义(P>0.05)，地榆小剂量组与地榆炭小剂量组比较差异无统计学意义(P>0.05)。结论 地榆和地榆炭的止血机制存在差异，但炒炭与否对止血作用没有显著影响。

地榆；止血；动物，实验

地榆为蔷薇科植物地榆SanguisorbaofficinalisL.或长叶地榆SanguisorbaofficinalisL. var.longifolia(Bert.)Yü et Li的干燥根，其性微寒，味苦、涩、酸，归肝、大肠经，具有解毒敛疮、凉血止血的作用[1]。中药炭化的目的为缓和药物药性，降低药物毒性，增强或产生收敛、止泻、止血作用[2]，有些中药炒炭后止血作用明显增强，也有些中药炒炭后止血作用反而减弱。地榆和地榆炭止血机制未见报道，本实验通过对地榆和地榆炭的止血机制研究，为地榆、地榆炭的临床应用提供实验依据。

1 材料与方法

1.1 药品 地榆和地榆炭药材购自北京同仁堂药店，经河北省邯郸市药品检验所专家鉴定为蔷薇科植物地榆SanguisorbaofficinalisL.的干燥根。按照水煎剂的制备方法[3]，将地榆和地榆炭制备成1 g/mL的水煎液。云南白药(云南白药集团股份有限公司，国药准字Z53020798，批号ZFA1316)。

1.2 动物 昆明种小鼠240只，雌雄各半，体质量(20±2) g，许可证编号：SCXK(冀)2008-1-003，动物合格证编号：1303141，购自河北省实验动物中心。

1.3 分组及给药 将240只昆明种小鼠随机分为4个实验组，每个实验组60只，雌雄各半，各实验组再随机分为6组，分别为空白组、云南白药组、地榆大剂量组、地榆小剂量组、地榆炭大剂量组、地榆炭小剂量组，每组10只，雌雄各半。给药：云南白药组0.667 g/kg，地榆大剂量组8.000 g/kg，地榆小剂量组2.000 g/kg，地榆炭大剂量组8.000 g/kg，地榆炭小剂量组2.000 g/kg，每日灌胃1次，连续3 d。

1.4 仪器 START-4半自动血凝仪(法国倍肯公司)；TG16-WS台式高速离心机(湖南湘仪实验室仪器开发公司)；202-3型电热恒温干燥箱(上海实验仪器厂)；B203LED型生物显微镜(重庆奥特光学仪器有限责任公司)。

1.5 观察指标

1.5.1 出血时间 实验1组第3次给药1 h后，每只小鼠在距尾尖3 mm处将其剪断，自断尾处有血液溢出开始计时，每间隔30 s用滤纸轻轻吸去血滴，在断尾处吸不到血时停止计时，即为小鼠出血时间。

1.5.2 凝血时间 实验2组第3次给药1 h后摘小鼠左侧眼球，舍弃第1滴血液，迅速在洁净载玻片滴约直径8 mm左右的血滴，立即计时，每间隔30 s从血滴边缘用大头针向中间轻挑1次，能挑起丝状纤维蛋白时终止计时，即为凝血时间。

1.5.3 血小板计数 实验3组第3次给药1 h后从小鼠内眦球后静脉丛吸血20 μL,放入380 μL血小板稀释液中，立即混匀，然后取悬液1滴加入血细胞计数板内，在显微镜40倍数下对小鼠血小板计数。

1.5.4 小鼠凝血酶原时间(PT)、凝血酶时间(TT)、活化部分凝血活酶时间(APTT) 实验4组第3次给药1 h后，用眼科镊摘除小鼠眼球，舍去第1滴血液，在含3.8%枸橼酸钠0.1 mL的eppendorf管中加入0.9 mL血，混匀后离心，3 000 r/min，15 min，取上层血浆，在2 h内测定PT、TT、APTT。

2 结 果

2.1 各组小鼠出血时间比较 见表1。

表1 各组小鼠出血时间比较 ±s

与空白组比较，*P<0.05,**P<0.01

由表1可见，云南白药组、地榆大剂量组、地榆小剂量组、地榆炭大剂量组小鼠出血时间较空白组均缩短，差异有统计学意义(P<0.01，P<0.05)。地榆炭小剂量组出血时间与空白组比较差异无统计学意义(P>0.05)。地榆大剂量组与地榆炭大剂量组出血时间比较差异无统计学意义(P>0.05)，地榆小剂量组与地榆炭小剂量组比较差异无统计学意义(P>0.05)。

2.2 各组小鼠凝血时间比较 见表2。

表2 各组小鼠凝血时间比较 ±s

与空白组相比，**P<0.01

由表2可见，云南白药组、地榆大剂量组、地榆炭大剂量组小鼠凝血时间较空白组均缩短，差异有统计学意义(P<0.01)。地榆小剂量组、地榆炭小剂量组凝血时间与空白组比较差异无统计学意义(P>0.05)。地榆大剂量组与地榆炭大剂量组凝血时间比较差异无统计学意义(P>0.05)，地榆小剂量组与地榆炭小剂量组比较差异无统计学意义(P>0.05)。

2.3 各组小鼠血小板计数比较 见表3。

表3 各组小鼠血小板计数比较

组 别n血小板计数空白组10657.40±108.29云南白药组10754.70±120.12地榆大剂量组10972.10±186.44**△△地榆小剂量组10797.70±126.89*#地榆炭大剂量组10787.40±89.54*地榆炭小剂量组10663.10±94.58

与空白组比较，*P<0.05,**P<0.01；与地榆炭大剂量组比较，△△P<0.01;与地榆炭小剂量组比较，#P<0.05

由表3可见，地榆大剂量组、地榆小剂量组、地榆炭大剂量组小鼠血小板计数较空白组均升高，差异有统计学意义(P<0.01，P<0.05)。云南白药组、地榆炭小剂量组血小板计数与空白组比较差异无统计学意义(P>0.05)。地榆大剂组血小板计数高于地榆炭大剂量组，差异有统计学意义(P<0.01)；地榆小剂量组血小板计数高于地榆炭小剂量组，差异有统计学意义(P<0.05)。

2.4 各组小鼠PT、TT及APTT比较 见表4。

由表4可见，云南白药组、地榆大剂量组、地榆炭大剂量组小鼠PT、TT及APTT较空白组均缩短，差异有统计学意义(P<0.05，P<0.01)。地榆小剂量组、地榆炭小剂量组PT、TT及APTT与空白组比较差异无统计学意义(P>0.05)。地榆大剂量组与地榆炭大剂量组PT、TT及APTT比较差异无统计学意义(P>0.05)，地榆小剂量组与地榆炭小剂量组比较差异无统计学意义(P>0.05)。

表4 各组小鼠PT、TT及APTT比较

组 别nPTTTAPTT空白组1018.48±1.5136.71±4.0527.33±1.53云南白药组1017.03±1.45*29.40±2.36**24.58±1.78**地榆大剂量组1017.20±1.16*32.11±3.19**25.44±1.18**地榆小剂量组1017.81±1.3334.29±3.9426.50±1.66地榆炭大剂量组1017.15±1.41*33.41±2.82*25.66±1.45*地榆炭小剂量组1017.92±1.6434.91±3.2926.81±1.89

与空白组比较，*P<0.05,**P<0.01

3 讨 论

正常凝血和止血机制包括血小板、凝血因子和血管壁三方面的作用，凝血因子止血作用又分为内源性、外源性和共同途径3条途径[4]。PT能反映出外源性凝血系统活性，其时间长短与外源性凝血因子Ⅰ、Ⅱ、Ⅴ、Ⅶ、Ⅹ的活性相关；TT反映出纤维蛋白原的利用度；APTT反映出内源性凝血系统中凝血因子Ⅷ、Ⅸ、Ⅺ、Ⅻ等因子的活性[5]。

地榆根部鞣质类化合物的含量约17%[6]，鞣质具有降低毛细血管通透性，收缩微血管的作用[7]，鞣质还能与蛋白质结合在血管破损处形成硬块，血液外流受阻而达到止血目的。地榆中鞣质的单体没食子酸及d-儿茶素，能增强血小板的聚集和黏附功能，没食子酸单体还能增高Az-巨球蛋白含量，竞争性抑制纤溶酶原活化素及纤溶酶的活力，导致纤溶活力的降低，从而起到止血作用[8]。地榆中还含有总皂苷，具有促骨髓细胞增殖作用，对血小板数量、外周血白细胞和红细胞有明显的改善作用[9]。可见，地榆通过凝血因子、血小板及血管壁三方面因素的作用，最终达到止血效果。

地榆中大量的钙以草酸钙晶体的形式存在，通过制炭过程的高温可释放出可溶性钙离子。钙离子为凝血因子，对血小板、内源性和外源性凝血系统有激活作用，转化纤维素蛋白原为纤维蛋白，起到促进凝血、止血的作用[10]。地榆炒炭过程中会产生大量炭素，血液遇炭素后可释放一种使平滑肌紧张性加强的物质，能促进血管收缩而止血，同时炭素可以促进释放血小板因子、血浆凝血因子激活及血小板裂解，促进血液凝固[11]；但同时，地榆炒炭过程中，由于时间和温度参数不易控制，导致部分地榆发生灰化，致使地榆中总皂苷、鞣质等止血成分减少，减弱止血作用[12]。另外，地榆炭与地榆相比，由于制炭过程发生的化学、物理变化，地榆炭中的铁、铝、锰、锌、铜等19种微量元素含量均高于地榆[13]，而以上这些微量元素都是血液中不可或缺的物质，它们或通过影响血液成分，或间接作用于凝血因子，或参与激素和酶的活动，从而对全身性和局部性的凝血、出血过程产生影响。

本研究结果表明，地榆和地榆炭均能缩短小鼠出血时间和凝血时间，二者比较差异无统计学意义；地榆和地榆炭均能升高小鼠血小板，地榆作用更强；与空白组相比，地榆和地榆炭能缩短小鼠PT、TT和APTT，二者比较差异无统计学意义。

综上所述，地榆炒炭后，成分发生变化，导致地榆和地榆炭的止血机制存在差异，但从实验数据看，二者的止血作用差异无统计学意义。由于止血作用是多种成分协同作用的结果，而中药成分复杂，影响因素比较多，对于地榆制炭后止血作用机制的变化还需进一步实验研究。

[1] 国家药典委员会.中华人民共和国药典(一部)[M].北京：中国医药科技出版社，2010：117.

[2] 单鸣秋，张丽，丁安伟.中药炭药的研究进展[J].中草药，2008,39(4)：631-634.

[3] 李仪奎.中药药理实验方法学[M].上海：上海科学技术出版社，2006:119.

[4] 王鸿利.止血与凝血机制研究进展[J].继续医学教育，2006,20(26)：13-19.

[5] 李娴，张丽，丁安伟.丹皮炭止血作用有效部位及作用机制研究[J].中草药，2009,40(8)：1278-1280.

[6] 夏红旻，孙立立，孙敬勇，等.地榆化学成分及药理活性研究进展[J].食品与药品，2009，11(7)：67-69.

[7] 何希瑞，樊鹏程，李茂星，等.常用止血中药及其止血机制研究进展[J].中国实验方剂学杂志，2010,16(15)：217-221.

[8] 邬浩杰.止血中药作用机理研究概况[J].新中医，2009，41(4)：116-117.

[9] 邹文俊，刘芳，吴建明，等.地榆总皂苷促造血细胞增殖效应研究[J].中草药，2012，43(5)：929-933.

[10] 韩邦志，谢金鲜.中药止血与凝血机制的研究进展[J].广西中医药，2009,32(2)：6-8.

[11] 彭云寿.浅谈中药炭药的炮制[J].中华临床医药，2001，2(7)：87-88.

[12] 王琦，郭长强，张云端.十种商品地榆饮片质量分析[J].中成药，1993，15(1)：24-25.

[13] 余南才，叶明波.地榆炮制前后鞣质及微量元素含量的变化[J].中国中药杂志，1994，19(3)：153-154.

(本文编辑：李珊珊)

Experimental study on hemostatic function of Radix Sanguisorbae and Charred Radix Sanguisorbae in mice

ZHANGXiangyang,ZHAORutong,LIUChunyan,etal.

DepartmentofBiochemistryandofMolecularBiologyLaboratory,MedicalcollegeofHebeiUniversityofEngineering,Hebei,HanDan056002

Objective To explore the hemostasis mechanisms of Radix Sanguisorbae and charred Radix Sanguisorbae. Methods 240 Kunming mice were randomly divided into 4 groups, 60 mice in each group with half males and half females. The rats in each group were randomly divided into blank group, Yunnanbaiyao group, high dose of Radix Sanguisorbae group, low dose of Radix Sanguisorbae group, high dose of charred Radix Sanguisorbae group, low dose of charred Radix Sanguisorbae group, 10 mice in each group. The effects of clotting time, bleeding time, platelets count, thrombin time (TT), prothrombin time (PT) and activated partialthromboplastin time (APTT) were compared between the Radix Sanguisorbae and charred Radix Sanguisorbae in mice. Results The bleeding time in Yunnanbaiyao group, high dose of Radix Sanguisorbae group, low dose of Radix Sanguisorbae group and high dose of charred Radix Sanguisorbae group were shorter than those in blank group (P<0.01,P<0.05). There was no statistical difference on bleeding time between low dose of Radix Sanguisorbae group and blank group (P>0.05), high dose of Radix Sanguisorbaeand high dose of charred Radix Sanguisorbae group(P>0.05), low dose of Radix Sanguisorbae group and low dose of charred Radix Sanguisorbae group(P>0.05). The clotting time in Yunnanbaiyao group, high dose of Radix Sanguisorbae group and high dose of charred Radix Sanguisorbae group was shorter than that in blank group (P<0.01). There was no statistical difference on clotting time among low dose of charred Radix Sanguisorbae group, low dose of charred Radix Sanguisorbae group and blank group (P<0.05). There was no statistical difference on clotting time between high dose of Radix Sanguisorbae high and dose of charred Radix Sanguisorbae group(P>0.05), low dose of Radix Sanguisorbae group and low dose of charred Radix Sanguisorbae group(P>0.05). The platelets count in high dose of Radix Sanguisorbae group, low dose of Radix Sanguisorbae group and high dose of charred Radix Sanguisorbae group was higher than that in blank group (P<0.01,P<0.05). There was no statistical difference on platelets count among Yunnanbaiyao group, low dose of charred Radix Sanguisorbae group and blank group (P>0.05). The platelets count in high dose of Radix Sanguisorbae was higher than that in high dose of charred Radix Sanguisorbae group (P<0.01), and which in low dose of charred Radix Sanguisorbae group was higher than that in low dose of charred Radix Sanguisorbae group (P<0.05). The PT, TT and APTT in Yunnanbaiyao group, high dose of Radix Sanguisorbae group and high dose of charred Radix Sanguisorbae group were shorter than that in blank group (P<0.05,P<0.01). There was no statistical difference on PT, TT and APTT among low dose of Radix Sanguisorbae group, low dose of charred Radix Sanguisorbae group and blank group (P>0.05). There was no statistical difference on PT, TT and APTT between high dose of Radix Sanguisorbae group and high dose of charred Radix Sanguisorbae group(P>0.05), low dose of Radix Sanguisorbae group and low dose of charred Radix Sanguisorbae group(P>0.05). Conclusion Radix Sanguisorbae and charred Radix Sanguisorbae have different hemostasis mechanisms, but frying charcoal or not have no significant effect on the hemostasis function.

Radix Sanguisorbae; Hemostasis; Animal; Experiment

10.3969/j.issn.1002-2619.2017.05.023

※ 项目来源：河北省邯郸市科学技术研究与发展计划(编号：1523108076-8)

张向阳(1970—)，男，高级实验师，硕士。主要从事基础中医药学方面的研究。

R973.1

A

1002-2619(2017)05-0735-04

2016-11-23)