软枣猕猴桃“龙成2号”组培扩繁技术研究

邓践

（丹东市林业科学研究院，辽宁 丹东 118000）

软枣猕猴桃“龙成2号”组培扩繁技术研究

邓践

（丹东市林业科学研究院，辽宁 丹东 118000）

以“龙成2号”嫩茎段为外植体，研究外植体诱导扩繁的最佳条件。结果表明：最佳初代培养基为MS+6-BA 2.0 mg·L-1+IBA 0.2 mg·L-1；最佳增殖培养基MS+6-BA 0.5 mg·L-1+IBA 0.05 mg·L-1+ GA31.0 mg·L-1，增殖系数达5.0；最佳生根培养基为1/2MS+IBA 0.15 mg·L-1，生根率达94%。

软枣猕猴桃“龙成2号”；初代培养；增殖培养

软枣猕猴桃Actinidia arguta为猕猴桃科猕猴桃属落叶藤本，是我国珍贵的抗寒果树资源。主要生长在中国东北地区，是当今世界新兴果树，在国际上享有很高声誉。软枣猕猴桃果实酸甜可口，柔软多汁，含有丰富的营养成分，维生素C含量高达430.8 mg/l00 g，总氨基酸含量达800～1500 mg/l00 g，可用于鲜食和加工等[1-2]。软枣猕猴桃“龙成2号”是经辽宁省林业厅认定的优良品种，具有极大的发展潜力和推广价值。“龙成2号”树势生长旺盛、能早期丰产，果实外形美观、略带红晕，长卵圆形，果个较大，完全成熟后甜酸适度、有奶香风味，是品味极佳的优良晚熟软枣猕猴桃品种。本文以“龙成2号”为试材，对“龙成2号”组织培养技术进行了深入研究，为该品种组培快繁及推广应用奠定基础。

1 材料与方法

1.1 试验材料

6月上旬，“龙成2号”软枣猕猴桃苗木正处于生长旺盛阶段，选择当年生较为健壮、稍嫩的枝条，剪取20～30 cm长的茎尖，作为试验材料。

1.2 消毒方法

将剪取的枝条用清水洗净，剪成2 cm长并带有1～2个芽的茎段，放入小烧杯中罩纱布后，在自来水下冲洗30 m in，置于超净工作台上，采用75%酒精和0.1%HgCl2进行消毒处理，具体操作为75%酒精30 s+0.1%HgCl24 m in+75%酒精30 s+0.1%HgCl24 m in，最后用无菌水冲洗5～7次。

1.3 培养方法

1.3.1 初代培养

将消毒灭菌的带嫩芽茎段剪去两端多余部分后约2 cm带芽茎段，在无菌环境下接种于初代培养基中。MS为基本培养基，添加不同质量浓度的6-BA、NAA、IBA（表1），蔗糖30 g·L-1，琼脂7.5 g·L-1，pH值6.0。每个处理3次重复，每个重复接种10瓶，每瓶接种2个，观察腋芽萌发及生长情况。

1.3.2 增殖培养

待茎段腋芽伸长生长至3～4 cm后，将其从基部剪下，剪成长约1.5 cm的一芽一叶一段，分别转接于增殖培养基中培养。MS为基本培养基，添加6-BA 1.0 mg·L-1、IBA 0.1 mg·L-1，6-BA 0.8 mg·L-1、IBA 0.08 mg·L-1，6-BA 0.6 mg·L-1、IBA 0.06 mg·L-1，6-BA 0.5 mg·L-1、IBA 0.05 mg·L-1、GA31.0 mg·L-1，6-BA 0.4 mg·L-1、IBA 0.04 mg·L-1、GA31.0 mg·L-1，分别记为1、2、3、4、5，蔗糖30 g·L-1，琼脂7.5g·L-1，pH值6.0。每个处理3次重复，每个重复接种10瓶，每瓶接种2个。

1.3.3 生根培养

将高度5 cm以上的健壮新梢苗转到1/2MS中，添加IBA 0.1、0.15、0.2、0.25 mg·L-1。每个处理3次重复，每个重复接种10瓶，每瓶接种2个。

1.3.4 炼苗移栽

移栽前，将生根后的试管苗培养瓶移入到温室内，在常温、自然光下逐渐揭开组培瓶盖适应3～5 d，初期每天喷雾3次，逐渐减少喷雾次数。7 d左右取出健壮的生根苗，用清水洗净苗根部培养基，在温室内移栽到配好的基质中。

1.3.5 培养条件

白天温度（25±1）℃，夜间温度（20±1）℃，光照14 h，黑暗10 h，光照强度2 000～3 000 lx。

2 结果与分析

2.1 外植体的诱导

外植体在芽诱导培养基上培养第7天腋芽开始萌动；约14 d茎段长出绿色细长小叶。诱导培养20 d后的结果见表1。

表1 不同处理对外植体诱导的影响

从表1可以看出，不同浓度的激素处理均能诱导外植体腋芽萌发。其中6-BA 2.0 mg·L-1、IBA 0.2 mg·L-1和6-BA 1.5 mg·L-1、NAA 0.1 mg·L-1的诱导效果最好，萌发率较高，苗壮且高。观察发现，培养基添加NAA较添加IBA时根量多，叶片过大，木质化程度高，长有较多白色茸毛的无效根，添加IBA较添加NAA长势快、好且植株高，叶片趋于正常，所以IBA是腋芽萌发的最佳生长素，当质量浓度为0.2 mg·L-1时，萌发率达到85%，平均株高达3.1 cm，显著优于其它处理。所以“龙成2号”软枣猕猴桃腋芽萌发的最适培养基为MS+6-BA 2 mg·L-1+IBA 0.2 mg·L-1。

2.2 芽苗的增殖培养

增殖培养1周后，腋芽开始萌发，第20天观察记录生长情况，每个组合随机抽取10瓶测量株高，计算增殖系数，结果见表2。

由表2可以看出，当6-BA质量浓度高于0.5 mg·L-1时，植株易分化出较多丛生芽，植株高生长较慢，叶片扭曲、偏大；当6-BA质量浓度低于0.5 mg·L-1时，基本无丛生芽，大多为单芽生长，长势较快，当6-BA为0.5 mg·L-1时，表现效果显著优于其它处理，所以芽苗增殖的最佳培养基为：MS+6-BA 0.5 mg·L-1+IBA 0.05 mg·L-1+GA31.0 mg·L-1。

表2 不同处理对芽苗增殖的影响

2.3 生根培养

生根培养1周后，芽苗基部陆续出现根状突起，呈放射线状。30 d后观察发现IBA浓度大于0.15mg·L-1时，部分植株变黄，植株基部出现愈伤，且随IBA浓度增大愈伤增多，而愈伤上长出的根较长、细弱，容易脱落，根系生长情况见表3。

表3 不同处理对苗木根系生长情况的影响

由表3可以看出，IBA浓度为0.15 mg·L-1时生根率最高，达94%，且无愈伤组织产生，产生的根较壮且多，所以“龙成2号”软枣猕猴桃最适的生根培养基为1/2MS+IBA 0.15 mg·L-1。

2.4 炼 苗

苔藓基质有较好的保水性和透气性。本试验炼苗基质为消毒杀菌后加工打碎的苔藓基质，将苗取出，用清水洗去根部培养基，再用1 000～1 500倍的多菌灵溶液浸泡10 s，用塑料膜覆盖1周以增加空气湿度，1周后逐渐揭开塑料膜，棚内温度控制在15～28℃，湿度控制在70%以上，定期喷施低浓度的杀菌剂，苗木移栽成活率达到80%。

3 结论与讨论

以“龙成2号”软枣猕猴桃嫩茎段为外植体，研究激素种类与浓度对外植体诱导、增殖培养的影响，结果表明：“龙成2号”软枣猕猴桃的嫩茎段诱导最佳培养基为MS+6-BA2.0 mg·L-1+IBA 0.1 mg·L-1。增殖培养最佳培养基为MS+6-BA 0.5 mg·L-1+IBA 0.05 mg·L-1+GA31.0 mg·L-1，增殖系数达5.0。生根培养最佳培养基为1/2MS+IBA 0.15 mg·L-1，生根率达94%。

目前国内外已有许多软枣猕猴桃优良品种的人工繁殖获得成功[3-5]，我国野生猕猴桃品种资源丰富，虽然市场上已有一些人工繁殖并开发利用的品种，但是仍满足不了市场需求，且“龙成2号”软枣猕猴桃具有果个大、口感好的优势，在市场上比较稀有，本试验通过研究“龙成2号”软枣猕猴桃的组培繁殖技术，为“龙成2号”这一优良品种的开发利用和工厂化育苗奠定了基础。

［1］胡皓.软枣猕猴桃“魁绿”品种组培微繁技术研究［J］.吉林农业，2011，（2）：1-2.

［2］郭志欣，顾地周，闫中雪，等.软枣猕猴桃优良品系“2008-07”组织培养繁殖技术研究［J］.西北农林科技大学学报，2014，42（11）：1-3.

［3］刘小刚.野生软枣猕猴桃组织培养及褐变处理［J］.中国农学通报，2013，29（19）：113-119.

［4］隆前进，吴延军，谢鸣.‘红阳’猕猴桃叶片和带芽茎段的组织培养快繁技术［J］.浙江农业学报，2010，22（4）：429-432.

［5］田新华，卢慧颖，吴捷.软枣猕猴桃组织培养的研究［J］.林业科技，2008，33（6）：1-3.

（责任编辑：张素清）

S722.37

A

1001-1714（2017）02-0038-03

2017-02-23

邓践（1968-），男，工程师，从事林业栽培与育种研究。E-mail：371473898@qq.com。