高效液相法分析诺氟沙星胶囊的溶出度

李倩

摘要：目的 采用HPLC法测定诺氟沙星胶囊溶出度。方法 选择色谱柱为Agilent HC-C18 （250 mm×4.6 mm，5 μm），流动相为：磷酸-三乙胺缓冲液∶水∶乙腈（60∶28∶12），流速为1.0 ml/min，检测波长为277 nm，柱温25 ℃，按照药典中浆法测定诺氟沙星胶囊溶出度。结果 HPLC法中诺氟沙星胶囊在2.03～50.95 μg/ml范围内线性关系良好，回归方程Y=634.4X-543.1，加样回收率平均值为100.23%，RSD 1.7%；诺氟沙星胶囊在醋酸缓冲液介质中溶出度均值为91.37%，符合药典标准。结论 高效液相法测定诺氟沙星胶囊准确、可靠，可以作为溶出度检测的参考方法。

关键词：高效液相法；诺氟沙星胶囊；溶出度

诺氟沙星属第三代喹诺酮类抗菌药，具有抗菌作用强、抗菌谱广、不良反应发生率低等特点，目前已有注射剂、滴眼剂、胶囊剂等多种剂型，且以胶囊剂较为多见[1]。近年来溶出度试验已成为评价制剂质量及生产工艺的指标之一，也已列入药典考察指标中。诺氟沙星含量测定方法目前有高效液相色谱法、紫外分光光度法等，2015版药典中对于诺氟沙星胶囊剂考察为紫外分光光度法[2]，但有报道指出，诺氟沙星所用胶囊在对应波长下存在一定吸收[3]，进而可能干扰检测结果，本文由此出发，考察高效液相法测定诺氟沙星的可行性。

1资料与方法

1.1仪器与试药 岛津 LC-2010CHT型高效液相色谱仪；瑞士梅特勒XS205DU型电子天平；乙腈、甲醇均由霍尼韦尔贸易（上海）有限公司提供，为色谱醇；冰醋酸、氢氧化钠、磷酸、三乙胺均为分析纯；诺氟沙星对照品（中国食品药品检定研究院，批号：130450-201206，含量：99.5%）；诺氟沙星片（浙江万邦药业股份有限公司）。

1.2方法

1.2.1高效液相法

1.2.1.1色谱条件 色谱柱选择Agilent HC-C18 （250 mm×4.6 mm，5 μm），流动相：磷酸-三乙胺缓冲液（磷酸4 ml与三乙胺7 ml，加50%甲醇稀释至1000 ml）∶水∶乙腈（60∶28∶12），检测波长277 nm，进样量10 μl，流速1.0 ml/min，柱温为室温（25℃）。

1.2.1.2溶液的制备

①供试品溶液的制备 精密称取20粒诺氟沙星胶囊，倾出全部内容物后，研细，混合均匀，精密称取上述供试品50 mg置于50 ml容量瓶中，加入0.1 mol/L盐酸适量溶解并定量稀释至刻度，取上述溶液5 ml于50 ml容量瓶中，加入0.1 mol/L盐酸稀释并定容，取适量溶液经微孔滤膜（0.45um）过滤，取续滤液待用。

②对照品溶液的制备 采用十万分之一天平称取诺氟沙星对照品10.19 mg于100 ml容量瓶中，用0.1 mol/L盐酸适量稀释至刻度，摇匀即得。

1.2.1.3方法学考察

①精密度试验 在“1.2.1.1”项色谱条件下，对照品溶液过0.45 μm滤膜后重复进样6次，10 μl/次，分别测定峰面积，并计算6组数据所得的相对标准偏差RSD，结果为 1.6%<2.0%，符合药典规定，提示本组方法精密度良好。

②重复性试验 选择同批號诺氟沙星胶囊6份，精密称定后，根据供试品“1.2.1.2①”项操作制备供试品溶液，采用“1.2.1.1”项色谱条件，进样10 μl，采集6份样品的色谱图，计算溶液的相对标准偏差RSD=1.4%（n=6）<2.0%，符合标准规定，提示本组方法具有较好的重复性。

③稳定性试验 于2 h、4 h、8 h、12 h、24 h取供试品溶液，采用相同色谱条件，进样10 μl，根据测得的色谱峰面积，供试品组RSD为1.3%<2.0%，提示供试品溶液在24 h内较为稳定。

④回收率考察 精密移取“1.2.1.2①”项供试液2 ml于10 ml容量瓶中，保存至3个锥形瓶内，依次加诺氟沙星对照品溶液1 ml、2 ml和3 ml，加0.1 mol/L盐酸定容至刻度，过0.45 μm微孔滤膜后取续滤液，进样10 μl，对峰面积进行测定，得到回收率分别为100.18、100.25%和100.20%，平均100.23%，RSD 1.7%，与药典标准相符。

1.2.1.4线性关系考察 采用移液管精密移取“1.2.1.2②”下对照品溶液0.20 ml、0.50 ml、0.80 ml、1 ml、2 ml、5 ml于10 ml容量瓶中，使用0.1 mol/L盐酸稀释至刻度，澄清后，采用0.45 μm微孔滤膜过滤，得到系列标准溶液。结合对应色谱条件，进样10 μl，测定样品色谱峰面积，以峰面积和浓度为坐标，建立标准曲线，得到方程为：Y=634.4X-543.1（r=0.9992），提示，诺氟沙星浓度在2.03～50.95 μg/ml范围内与峰面积存在良好的线性关系。

1.2.2溶出度考察[3] 按照药典中溶出度与释放度测定法，配置醋酸缓冲液（取冰醋酸2.86 ml与50%氢氧化钠溶液1 ml，加水900 ml，振摇，测定pH并结合所测pH用冰醋酸或50% 氢氧化钠溶液调节至4.0，加水至1000 ml）1000 ml作为溶出介质，调节溶出仪，设定转速50 r/min，取本品，依法操作，30 min后吸取溶液适量，经0.45 μm微孔滤膜过滤，取续滤液，用溶出介质稀释至约5 μg/ml，为供试品，根据“1.2.1.1”项色谱条件进行测定，并通过“1.2.1.4”标准曲线计算样品浓度，结合稀释倍数计算样品含量m测，结合胶囊标示量m标，计算30 min溶出度=（m测/m标）×100%。

2结果

高效液相法测定的诺氟沙星胶囊平均溶出度（与标识量比较）为91.37%，各自单独溶出度及平均溶出度均高于75%，符合药典要求，见表1。

3讨论

早期诺氟沙星HPLC法测定多以磷酸-乙腈系统为主，在实验过程中曾以此法进行检测，发现峰形拖尾严重，柱效低，保留时间过长，故舍弃该法，后查阅到文献[4]中提到三乙胺的加入可有效改善峰形，经摸索，选择磷酸-三乙胺缓冲液∶水∶乙腈（60∶28∶12）作为本次研究所用流动相。由本文结果可知，高效液相法测定诺氟沙星含量的方法准确性高、精密度好、重现性均符合相关要求，同时针对相关文献中提及的空胶囊壳本身存在吸收干扰，故而不利于紫外分光光度的准确性，采用高效液相法通过色谱柱的分离作用，将诺氟沙星制备过程中的有关物质、杂质等干扰有效分离，进而可提高其检测准确性[5]。

综上所述，高效液相法测定诺氟沙星胶囊准确、可靠，可以作为溶出度检测的参考方法。

参考文献：

[1]吴燕红，梁权辉，谢加庭，等.不同厂家诺氟沙星胶囊含量及其溶出度的观察[J].中国处方药，2016，14（11）：18-19.

[2]国家药典委员会.中华人民共和国药典（二部）[S].北京：化学工业出版社，2015：1198-1199.

[3]杨亮，蒋玲，李剑，等.口服诺氟沙星胶囊致多形红斑1例[J].中国医院用药评价与分析，2017（1）：143-144.

[4]陈珊珊，蔡建华，许巧云.诺氟沙星胶囊溶出度的研究[J].海峡药学，2010，22（10）：66-68.

[5]杨静，徐轶飞，苗爱东.诺氟沙星胶囊含量测定的不确定度评估[J].白求恩医学杂志，2015，13（6）：593-595.

编辑/王海静