微量残留白血病检测方法及对急性白血病的临床意义

郝梦哲+夏薇

【摘要】急性白血病患者经化疗后达到完全缓解可达80%，但5年存活率仅30～40%[1]，究其根源是完全缓解后，体内仍含少量白血病细胞。因此，对于微量残留白血病（MRD）的检测可更早预测急性白血病的复发。本文对MRD检测方法以及对急性白血病的临床意义进行综述。

【关键词】微量残留白血病；检测；急性白血病

【中图分类号】R733.7 【文献标识码】A 【文章编号】ISSN.2095-6681.2016.29.0.01

检测方法：MRD常用的监测方法分以下几类：细胞遗传学方法、分子生物学方法和免疫学方法。但这些方法都有一定局限性不能理想监测MDR。

1 细胞遗传学方法

1.1 染色体核型分析

多数白血病细胞伴随染色体核型的异常，如在AML中出现异常分裂象或数量结构的改变。用此法检测MRD的个体差异大且敏感性差，近年此法研究少在此不多叙述。

1.2 荧光原位杂交技术

荧光原位杂交技术（FISH）是利用荧光标记的特异染色体为探针检测白血病细胞中染色体的异常。改善了传统染色体核型分析的缺点，具有高敏感度且操作简单等优点，可短时间分析较多的骨髓、外周血或组织细胞，检出难以识别的基因异常及断裂点的异常。由于其检测的靶分子为基因，可避免由于表面抗原的改变造成的假阴性等问题。

荧光原位杂交技术的临床意义：在中国APL在AML中占有很大比例，90%以上的APL具有特征性融合基因PML-RARα，FISH为检测APL-MRD最常用的方法。黄正刚等[2]用FISH检测了30例已达完全缓解并经三轮巩固治疗后的APL患者，发现融合基因PML-RARα持续阳性的有3例并最终复发。张济等[3]用FISH检测34例完全缓解的APL患者，9例PML-RARα融合基因阳性的患者中3例检测结果为阴性；经巩固维持治疗后，4例PML-RARα融合基因阳性的患者中2例检测结果为阴性。所以，FISH检测APL-MRD的敏感性有待提高。

2 免疫学方法

2.1 多参数流式细胞仪检测（MFC）

因成本較低准确度敏感度较高，为目前应用最广的方法，它是依据识别在白血病细胞表面联合表达的特异白血病相关免疫表型（LAIPs）。能快速对单个细胞进行多参数分析，根据正常细胞与白血病细胞表达免疫表型的不同，可在104个细胞中检测出一个白血病细胞。但在化疗过程中，免疫表型可发生改变出现假阴性，要提高检出率可结合初诊LAIPs再辅以检测其他抗体组合，也可同时检测外周血和骨髓来提高检出率。但目前并没有标准化的抗体组合，且个体间差异也较大。

2.2 多参数流式细胞仪监测MRD的临床应用

MRD复发的患者检出LAIPs往往与患者初发时LAIPs相同，因此残留的白血病细胞会保持初期白血病细胞异常抗原的特征，可用MFC针对性的检测MRD患者初期抗原的免疫表型。研究表明，用MFC检测与AML密切相关的细胞特异性LAIPs信号，检出LAIPs阳性细胞的患者有60%在造血干细胞移植后复发。而检测LAIPs阴性的患者复发率极低。利用MFC对白血病细胞LAIPs的分析对AML患者预后有提示作用。

3 分子遗传学方法

3.1 实时荧光定量PCR（RQ-PCR）

RQ-PCR在普通PCR中加入与PCR产物结合的荧光探针或染料，可以在每一次循环中通过荧光强度的变化达到定量检测。可持续性检测白血病细胞的异常融合基因，突变基因等，动态观察患者体内融合基因表达水平变化，灵敏度可达106。用此法检测MRD比细胞遗传学法早数月。也可避开由于患者免疫表型改变造成假阴性。但其成本较高，普及难度大。

3.2 实时荧光定量PCR监测MRD的临床意义

高海涛等[4]持续监测20位AML患者治疗后的ETO融合基因表达水平，其中15位患者的表达水平直至观测结束均<0.001%，13位患者持续阴性，均未复发；其余5位在检测期间表达阳性且持续升高，最终复发。但仅35%的AML患者有特异性的异常基因，限制了它的应用。

4 展 望

MRD因其白血病细胞总数下降，用一般形态学方法难以检出，成为AML复发的根源。用现有技术检测MRD相关标志物有助于监测AML患者化疗后完全缓解或造血干细胞移植的预后效果，提高生存率。MFC成本低，但LAIPs易变，检出率不理想，而PCR与FISH虽不存在免疫表型改变等问题，但其敏感性和特异性有待提高，且成本较大难以普及。综上所述，目前检测MRD的方法各有利弊，可个体化要求监测，多种方法联合从而实现急性白血病患者的预后效果和复发的早期诊断。

参考文献

[1] Jie Jin，et al.Homoharringtonine-based induction regimens for patients with de-novo acute myeloid leukaemia：a multicentre，open-label，randomised，controlled phase 3 trial.Lancet Oncol，2013，14：599-608.

[2] 黄正刚，等.荧光原位杂交技术检测PML/RARa融合基因在儿童APL微小残留病中的应用[J].实用临床医学，2015，16（11）：65-68.

[3] 张 济，等.应用RT-PCR和荧光原位杂交监测急性早幼粒细胞白血病微小残留白血病[J].中国实验诊断学，2012，16（3）：423-425.

[4] 高海涛，等.微小残留病监测在急性髓系白血病中的预后意义[J].医药论坛杂志，2016，（8）：1-3.

本文编辑：王 琦