MT-3基因表达在食管胸中段鳞癌中转移与预后的关系

王海军 许峰 陆欣 王建民 姜玉芳 国建飞 张少峰 刘聚良

·论著·

MT-3基因表达在食管胸中段鳞癌中转移与预后的关系

王海军 许峰 陆欣 王建民 姜玉芳 国建飞 张少峰 刘聚良

目的 讨论MT-3基因在食管胸中段鳞癌中的表达、术后病理及患者预后指标中的关系。方法 对2009至2011年手术切除的96例食管胸中段鳞癌患者进行回顾性研究。使用免疫组织化学染色方法检测MT-3基因在肿瘤组织中的表达。使用χ2检验判断相关性、Kaplan-meier法进行生存分析、Log-rank检验判断生存差异性，采用Cox比例风险模型行多因素分析判断独立预后因素。结果 96例标本中，伴有MT-3基因阳性表达41例，占总例数的41.28%。食管胸中段鳞状细胞癌组织中MT-3的阴性表达与肿瘤的分化程度(P=0.029)、T分期(P=0.001)和淋巴结转移个数(P=0.005)相关。97例病例中3年生存率为45.9%，其中MT-3基因表达阴性患者为20.1%，MT-3基因表达阳性患者为52.6%。两者比较差异有统计学意义(P=0.01)。Cox回归分析显示肿瘤分期以及MT-3基因阴性表达是食管胸中段癌术后的预后危险因素。结论 在食管胸中段癌中MT-3基因的表达降低，与肿瘤的分化程度，T分期和淋巴结转移个数相关。MT-3基因表达阳性较阴性表达患者的3年生存率明显提高。MT-3基因可能作为评估食管鳞状细胞癌手术预后的分子生物指标。

食管鳞状细胞癌;MT-3;预后;免疫组化

食管癌是常见的恶性肿瘤之一。据国际癌症研究组织(IARC)提供的数据显示[1]，亚洲地区，尤其是经济欠发达地区，其食管癌发病率迅速增长。我国特别是河北、河南和山西三省的部分地区食管癌发病率为全球最高[2]。现已知很多恶性肿瘤的发生和发展与基因的异常表达有关。食管癌也不例外，而有关MT-3基因在食管癌中表达情况少有报道。我们对本院经手术治疗的食管胸中段癌患者的临床术中病理资料进行研究，通过检测食管胸中段鳞癌患者肿瘤组织中MT-3基因的表达情况，探讨它和食管鳞癌临床病理资料及预后的关系。

1 资料与方法

1.1 一般资料 2009年3月至2011年4月河北省邢台市人民医院胸外科经手术治疗的胸中段食管鳞癌患者96例，年龄43～76岁，平均年龄52.4岁；其中男63例，女33例；年龄43～76岁，平均年龄57.9岁。国际TNM分期中T1分期20例，T2分期34例，T3+T4分期42例；N0分期41例，N1分期55例。分化程度：低分化24例，中～高分化72例；病变长度：小于等于3 cm 22例，3～5 cm 42例，大于5 cm 32例，体重减轻3 kg以上45例，体重减轻3 kg以下51例。本组病例均为首诊，无术前放化疗治疗。所有患者于术前签署知情同意书，肿瘤的解剖定位以及TNM分期参照UICC 1997年标准；平均每例清扫淋巴结12.4枚，淋巴结清扫依照UICC/AJCC食管癌淋巴结分布，所有患者均实现肿瘤完全切除。手术后患者平均随访 36.3 个月。

1.2 方法 采用免疫组化SP法，将切片常规脱蜡水化，用pH值=6.0柠檬酸盐溶液热修复抗原，其余操作严格按免疫组化SP试剂盒说明书进行。MT-3染色结果以细胞浆中出现黄色颗粒为阳性显色，按阳性细胞数比例(阳性细胞为胞浆内有黄色染色)评定阳性表达，对染色范围和染色强度分别进行评估。最后综合评定：(1)染色范围评分：每张切片随机选取5个高倍视野，按阳性细胞数占同类细胞数的百分比，﹤5% 记0分，5%～25%记1分，26%～50%记2分，51%～75%记3分，>76%记4分。(2)染色强度评分：无染色记0分，淡黄色记1分，棕黄色记2分，棕褐色记3分。(3)最终评分=染色范围评分+染色强度评分。(4)结果判断：总积分≤3分为阴性表达，总积分>3分为阳性表达[3]。见图1。

正常阴性(SP×100)弱阳性表达(SP×200)强阳性表达(SP×200)

图1 MT-3基因在食管鳞状上皮正常组织、食管鳞状癌组织中的表达

1.3 统计学分析 应用SPSS 22.0统计软件，采用χ2检验判断相关性、Kaplan-meier法进行生存分析、Log-rank检验判断生存差异性、应用Cox比例风险模型进行多因素分析判定独立预后因素,P<0.05为差异有统计学意义。

2 结果

2.1 免疫组化染色结果 96例中41例伴有MT-3基因阳性表达，占总例数的41.28%。病理资料分析：食管胸中段鳞状细胞癌组织中MT-3的阴性表达与肿瘤的分化程度(P=0.029)、T分期(P=0.009)和淋巴结转移个数(P=0.005)相关。但与患者的年龄、病变长度无关(P=0.754)。

2.2 MT3基因表达阳性和阴性的患者术后Kaplan-Meier生存曲线 96例随访6～44个月，中位随访时间36.3个月，MT-3基因表达阳性与MT-3基因表达阴性生存率1、2、3年分别为89.7%对69.9% ，62.4%和35.7% ，52.6%和20.1%，对比生存时间的差异有统计学意义(P=0.013)。见图2。

2.3 食管中段鳞状细胞癌患者预后危险因素Cox回归分析 Cox回归分析显示肿瘤分期以及MT-3基因阴性表达是食管胸中段癌术后的预后危险因素。见表1。

图2 MT3基因表达阳性和阴性的患者术后Kaplan-Meier生存曲线

3 讨论

我国是食管癌的高发国家，河北、河南和山西三省的部分地区食管癌发病率为全球最高。根据IARC提供的数据，2008年全世界新发食管癌约48万例，其中约41万例死亡。目前外科手术是食管癌的主要治疗手段之一，但目前的手术效果并不理想，5年生存率约为25%～50%[4,5]。术后病例，大约45%以上的患者在手术后2年内出现肿瘤复发或转移[6,7]。目前TNM分期是预测患者预后的主要依据，但由于不同术者手术方式及手术习惯不同，TNM分期并不十分准确。因此，寻找影响患者预后的分子生物学指标具有重要的临床意义。

表1 食管中段鳞状细胞癌患者预后危险因素Cox回归分析

金属硫蛋白(Metallothionein，MT)是细胞内的一种富含金属和巯基的低分子量蛋白。已知的在哺乳动物中，主要有四种金属硫蛋白亚型：MT-1、MT-2、MT-3及MT-4，它们普遍存在于真核细胞中，具有独特的分子结构，可以与金属离子结合，具有氧化还原能力，可以起到清除自由基、重金属、电离辐射、修复破损细胞、提高人体应激反应等作用[8]。在细胞内的金属硫蛋白表达在许多组织，并起着凋亡和增殖等至关重要的作用，其中能对致癌过程产生影响。与MT的其它家族成员不同的是，MT-3蛋白除上述作用外，还有很强的生长抑制活性[9,10]。在正常组织中，它们主要在神经系统，泌尿系统和胃肠[11]道表达。在恶性肿瘤中，除前列腺癌[12]外，在乳腺癌[13]、肝癌、卵巢癌[14]中也存在MT-3蛋白的表达。然而，在不同组织的恶性肿瘤中MT-3表达差异没有达成一致。

研究发现，MT-3在肿瘤的发生发展过程中有不同作用，在不同肿瘤中有不同作用，在同一肿瘤不同阶段也可能有截然相反的作用[15]。

本次研究结果表明，在食管胸中段鳞状细胞癌中伴有MT-3基因的表达下调，是随着T分期的升高，MT-3基因的表达逐渐减低；在淋巴结转移阳性组中，MT-3基因的表达低于阴性组，提示随着MT-3基因的表达减低，肿瘤的恶性程度不断增强。伴有MT-3基因表达阴性组患者的3年生存率明显低于表达阳性组患者，Cox回归分析结果证实MT-3基因的表达阴性是的预后不良因素，并且与患者分化程度和临床分期相关。因此MT-3基因可作为预测患者预后的分子生物指标。因此，建议对于伴有MT-3基因的表达阴性的患者，更应积极的辅助治疗如化疗、放疗以及生物治疗，以改善其预后生存期。但由于患者术后放化疗治疗方案并不统一，因而未对术后辅助治疗效果进行分析。

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15 田子强,刘俊峰,张月峰，等.食管鳞状细胞癌中MT3基因CpG岛甲基化及其临床意义.实用肿瘤杂志，2004,19:386-389.

Expression of MT-3 gene in esophageal squamous cell carcinoma and its relationship with patient’s prognosis

WANGHaijun*,XUFeng,LUXin,etal.

*DepartmentofThoracicSurgery,XingtaiPeople’sHospitalofHebei,Xingtai054001,China

Objective To investigate the expression of MT-3 gene in esophageal squamous cell carcinoma and its relationship with postoperative pathology and patient’s prognosis.Methods A retrospective study was performed in 96 patients with esophageal squamous cell carcinoma who

surgical resection in our hospital from 2009 to 2011.Immunohistochemical staining was used to detect the expression of MT-3 gene in tumor tissues.The χ2test was used to evaluate the correlation, and Kaplan-meier method was used to analyze survival rate,moreover,Log-rank test was used to determine survival difference.The Cox regression analysis was performed to determine the independent prognostic risk factors.Results Among 96 specimens,there were 41 cases of positive expression of MT-3 gene,accounting for 41.28%.The negative expression of MT-3 in esophageal squamous cell carcinoma was closely correlated with tumor differentiation,T staging and lymph node metastasis (P<0.05 orP<0.01). Among 96 patients,the 3-year survival rate accounted for 45.9%,in which the patients with negative expression of MT-3 gene accounted for 20.1%,and the patients with positive expression of MT-3 gene accounted for 52.6%,there was a significant difference between them (P<0.05).Cox regression analysis showed that tumor differentiation degree,lymph node metastasis and negative expression of MT-3 gene were prognostic risk factors in patients with esophageal carcinoma in middle thoracic esophagus after surgery.Conclusion The expression levels of MT-3 gene are decreased in middle thoracic esophageal carcinoma,which is correlated with tumor differentiation degree, T staging and lymph node metastasis.The 3-year survival rate in patients with positive expression of MT-3 gene is significantly higher than that of patients with negative expression of MT-3 gene.Therefor MT-3 gene may be used as a molecular marker for evaluating the postoperative prognosis of patients with esophageal squamous cell carcinoma.

esophageal squamous cell carcinoma; MT-3;prognosis;immunohistochemistry

10.3969/j.issn.1002-7386.2017.12.001

054001 河北省邢台市人民医院胸外科(王海军、姜玉芳、国建飞、张少峰、刘聚良)，精神心理科(许峰)，血液科(陆欣)，神经内科(王建民)

刘聚良，054001 河北省邢台市人民医院胸外科；

E-mail:82031516@qq.com

R 735.1

A

1002-7386(2017)12-1765-03

2017-01-18)