三种血清学检测方法在妊娠期妇女梅毒筛查中的应用评估

三种血清学检测方法在妊娠期妇女梅毒筛查中的应用评估

覃慧群1刘棣华2

目的评估三种血清学检测方法在妊娠期妇女梅毒筛查中的应用。方法采集妊娠期妇女空腹肘静脉血清，应用甲苯胺红不加热血清试验（TRUST）、酶联免疫吸附试验（ELISA）、胶体金免疫层析试验（GICA）、梅毒螺旋体颗粒凝集试验（TPPA）以及荧光实时定量聚合酶链反应（qRT-PCR）等5种方法同时进行检测。以TPPA和qRT-PCR方法同时阳性判断为梅毒感染。结果共采集妊娠妇女血清标本1 587份，梅毒感染阳性率3．2%。TRUST方法诊断梅毒的敏感性、特异性、阳性预测值和阴性预测值分别为72．5%、97．2%、46．3%和99．1%，ELISA方法分别为94．1%、98．9%、73．8%和99．8%，GICA方法为78．4%、99．0%、71．4%和99．3%。ELISA方法与TRUST和GICA方法的敏感性差异均有统计学意义（P＜0．05）；TRUST的阳性预测值与ELISA和GICA方法的差异均有统计学意义（P＜0．05）。结论ELISA方法在妊娠妇女梅毒筛查中有较高的敏感性、特异性和阳性预测值，多种检测方法的联合应用可为临床及时治疗妊娠梅毒，阻断其母婴传播提供可靠的保障。

梅毒；妊娠；筛查；血清学诊断

梅毒是由梅毒螺旋体（TP）感染所引起的一种慢性性传播疾病，此疾病可累及全身各组织及器官，症状及体征比较复杂，也可多年呈潜伏状态而无症状，具有较高的传染性，母婴传播和性传播是较为常见的传播途径[1]。近几年来我国梅毒的发病率呈逐年上升趋势[2-3]，妇女妊娠期梅毒及其导致的先天梅毒的发病率也呈逐年上升趋势[4-5]。患病的母体可以通过胎盘将TP传给胎儿，可导致死胎、流产、畸形、早产以及分娩先天梅毒患儿等严重后果[6]。对携带TP的孕妇进行准确和快速的筛查并进行正规有效的治疗是有效预防和控制妊娠梅毒和胎传梅毒的关键。本研究采用TPPA和PCR两种方法检测均阳性为TP阳性的“金标准”对临床上较常用的TRUST、ELISA和GICA三种检测方法进行评价，现报道如下。

1 材料与方法

1.1 一般资料

选取2014年1月—2016年6月到本中心进行孕期体检的妊娠期妇女1 587例，年龄19～38岁，平均年龄（24.4±4.6）岁。

1.2 试剂

TRUST试剂盒购自南京森贝伽生物科技有限公司，ELISA试剂盒购自上海新创生物技术有限公司，GICA试剂盒购自艾康（杭州）生物有限公司，TP颗粒凝集试验（TPPA）试剂盒购自日本富士瑞必欧株式会社，梅毒螺旋体核酸扩增（PCR）荧光检测试剂盒购自达安基因（深圳）公司。

1.3 仪器

酶标仪购自上海科华生物科技有限公司，洗板机购自上海科华生物科技有限公司，实时荧光定量PCR仪为ABI-7500，购自美国ABI公司。

1.4 方法

孕妇晨起后空腹，以不含添加剂的红帽真空采血管采集肘静脉血3～5 ml。室温静置凝固后，以3 000 r/min离心10 min，分离血清备用。每份血清同时采用TRUST、ELISA、GICA、TPPA以及实时荧光定量PCR（qRT-PCR）5种方法进行检测，每种检测方法以及每批次检测时均设阴性和阳性对照，每次实验均进行室内质控。每种试验的操作以及结果判读均按试剂盒说明书进行，以TPPA试验和qRT-PCR试验同时阳性作为TP阳性的“金标准”。

1.5 统计学分析

数据录入和处理采用SPSS 19.0软件，计量资料采用 （）表示，计数资料采用率（%）表示，比较采用χ2检验，以P＜0.05为检验水准。

2 结果

2.1 妊娠期妇女梅毒阳性率

以TPPA和qRT-PCR试验结果同时阳性作为TP阳性的“金标准”，在1 587例妊娠期妇女中，共检测出TP阳性51例，阳性率为3.2%。

2.2 TRUST、ELISA和GICA检测方法阳性率比较

3种检测方法阳性检出情况见表1，3种方法检出阳性率的差异无统计学意义（P＞0.05）。

2.3 TRUST、ELISA和GICA检测效能比较

3种方法的检测效能比较见表2。ELISA方法与TRUST和GICA方法的敏感性之间的差异均有统计学意义（P＜0.05），TRUST和GICA方法的敏感性之间的差异无统计学意义（P＞0.05）；3种方法之间特异性的差异无统计学意义（P＞0.05）；TRUST的阳性预测值与ELISA和GICA方法的差异均有统计学意义（P＜0.05），ELISA与GICA之间的差异无统计学意义（P＞0.05）；3种方法的阴性预测值之间的差异无统计学意义（P＞0.05）。

3 讨论

血清学检查是筛查妊娠梅毒感染非常有效的方法，主要有非特异性TP抗体检测及特异性TP抗体检测。TP感染人体后在破坏机体组织时可释放出一种抗原性物质—心磷脂，这种抗原性物质刺激机体会产生一些具有抗体性质的反应素—抗心磷脂抗体[7-8]。

本研究显示，ELISA方法的敏感性（94.1%）、特异性（98.9%）、阳性预测值（73.8%）以及阴性预测值（99.8%）均较高，其敏感性与TRUST和GICA方法敏感性的差异均有统计学意义（P＜0.05）。由于ELISA方法本身的局限性，不能区分现感染还是既往感染，既往TP感染但已治愈的患者体内的特异性抗体会持续存在，ELISA检测可能会出现假阳性。另外，对人不致病的密螺旋体感染产生的抗体与TP抗体有交叉反应，ELISA检测可能会有假阳性。

虽然实验室血清学检查是诊断梅毒的主要方法，但TP感染2～4周才可以检出特异性抗体，4～6周才可以检出非特异性抗体反应素[9]。因此，血清学方法对I期梅毒、神经梅毒以及合并艾滋病的梅毒等敏感性较低，并且不能区分母体梅毒和胎传梅毒，不能判断传染性[10]。因此，当临床上出现血清学呈阴性的I期梅毒时，PCR方法显示出其独特的优越性。

表2 三种检测方法检测效能比较

综上，ELISA方法在妊娠妇女梅毒筛查中有较高的敏感性、特异性和阳性预测值，每种方法都有其独特的优点和缺点。在临床中可采用TRUST和GICA方法对高危人群进行初筛，阳性者再采用ELISA、TPPA或PCR等方法进行确认。多种检测方法的联合应用可为临床及时治疗妊娠梅毒，阻断TP母婴传播提供可靠的保障。

[1] Onoe T，Honda M，Matsuo K，et al． Examination of the correlation between the manual and automated serological testing methods for syphilis[J]． The Journal of Dermatology，2012，39（4）：355-361．

[2] 陶长余，章士军，陈郁． 2005-2014年我国梅毒发病率趋势分析及预测[J]． 职业与健康，2015，31（21）：3026-3027，3030．

[3] 谢欣，田凤，宋潇，等． 2010～2015年我国隐性梅毒的流行病学及调查研究[J]． 中国保健营养，2016，26（7）：148．

[4] Zhang X，Zhang T，Pei J，et al． Time series modelling of syphilis incidence in China from 2005 to 2012[J]． PLos One，2016，11（2）：e0149401．

[5] Wang AL，Qiao YP，Wang LH，et al． Integrated prevention of mother-to-child transmission for human immunodeficiency virus，syphilis and hepatitis B virus in China[J]． Bull World HealthOrgan，2015，93（1）：52-56．

[6] Reed D，Stiller R． Challenges in the diagnosis and trearment of congenital syphilis[J]． Conn Med，2012，76（7）：397-400．

[7] 陈国菊，刘跃，刘江波，等． 妊娠梅毒母婴传播干预后不良妊娠结局分析[J]． 中国皮肤性病学杂志，2012，26（4）：321-323．

[8] 郭家权，洪敏，林永前． 酶联免疫吸附法检测与甲苯胺红不加热血清试验在梅毒检验中应用价值的比较[J]． 广东医学，2014，35（5）：738-740．

[9] 马开富，刘胜武． 梅毒血清学诊断实验方法研究进展[J]． 国际检验医学杂志，2012，33（1）：63-66．

[10] 樊尚荣． 重视妊娠合并梅毒的诊断和处理[J]． 中华产科急救电子杂志，2013，2（2）：79-81．

Evaluation on Three Serological Detection Methods for Syphilis Screening in Pregnant Women

QIN Huiqun1LIU Dihua21 Department of Clinical Laboratory, Honghu City Maternal and Child Health Family Planning Service Center, Honghu Hubei 433200, China; 2 Department of Clinical Laboratory, Honghu Hospital of Traditional Chinese Medicine, Honghu Hubei 433200, China

ObjectiveTo evaluate three serological detection methods for syphilis screening in pregnant women.MethodsThe serum samples ofpregnant women were collected and detected by Toluidine Red Unheated Serum Test (TRUST), Enzyme Linked Immunosorbent Assay (ELISA), Gold Immunochromatography Assay (GICA), Treponema Pallidum Particle Assay (TPPA) and Real-Time Quantitative Polymerase Chain Reaction (qRT-PCR). Syphilis infection in pregnant women was made definite diagnosis with positive TPPA and qRT-PCR simultaneously.Results1 587 serum samples were collected, and the positive rate of syphilis was 3.2%. The diagnostic sensitivity, specificity, positive predictive value, negative predictive value of TRUST was 72.5%, 97.2%, 46.3% and 99.1% respectively versus ELISA 94.1%, 98.9%, 73.8% and 99.8%, GICA 78.4%, 99.0%, 1.4% and 99.3% respectively. The difference of sensitivity between ELISA and TRUST or GICA was statistically significant (P＜ 0.05), the difference of positive predictive value between TRUST and ELISA or GICA also was statistically significant (P＜ 0.05).ConclusionThe diagnostic sensitivity, specif i city, positive predictive value of ELISA was higher for syphilis screening in pregnant women, the combined application of many methods can prompt treatment of patient and block mother-to-child transmission.

syphilis; pregnancy; screening; serological diagnosis

R759．15；R446．6

A

1674-9316（2017）11-0112-03

10．3969/j．issn．1674-9316．2017．11．067

1 湖北省洪湖市妇幼保健计划生育服务中心检验科，湖北洪湖 433200；2 湖北省洪湖市中医院检验科，湖北 洪湖433200