uH2B在原发性结肠腺癌中的表达及其与临床病理参数的关系

王海刚, 谢红梅, 韩 雪, 张立献, 赵文增

(华北石油管理局总医院 普外二科, 河北 任丘, 062552)



uH2B在原发性结肠腺癌中的表达及其与临床病理参数的关系

王海刚, 谢红梅, 韩 雪, 张立献, 赵文增

(华北石油管理局总医院 普外二科, 河北 任丘, 062552)

目的 探讨原发性结肠腺癌组织中组蛋白H2B单素泛化(uH2B)的表达水平及与患者临床病理参数的关系。方法 选取2013年1月—2016年1月本院胃肠外科手术切除的83例结肠腺癌组织标本、癌旁组织，既往收集的20例正常结肠组织，采用免疫组化染色观察各组组织标本中uH2B蛋白的表达程度，并分析与原发性结肠腺癌患者临床病理参数的关系。结果 结肠癌组织标本中uH2B蛋白的阳性表达率46.99%, 低于癌旁组织的83.13%、正常结肠黏膜组织的90.00%, 差异均具有统计学意义(P<0.05); 癌旁组织和正常结肠黏膜组织中uH2B蛋白的阳性表达率差异无统计学意义(P>0.05); 结肠癌组织标本中uH2B蛋白的阳性表达率与肿瘤的TNM分期、分化程度、淋巴结转移相关(P<0.05), 与患者的年龄、性别、肿瘤浸润深度、肿瘤最大径的关系不显著(P>0.05)。结论 结肠癌组织标本中uH2B蛋白表达率降低，并且与患者的肿瘤的TNM分期、分化程度、淋巴结转移具有相关性。

原发性结肠腺癌; 组蛋白H2B单素泛化; 临床病理参数

结肠癌是临床上较为常见的消化系统恶性肿瘤，相关研究证实结肠腺癌的发病率占到了各种结肠癌病理类型的35%以上，且近年来具有明显的上升趋势[1]。各种因素均可以促进结肠癌的发生发展，基因突变、癌基因相关蛋白的表达翻译等，是调控和促进结肠癌等恶性肿瘤发生发展的核心因素[2-3]。近年来研究[4-5]发现，表观遗传学领域中对于相关癌基因组蛋白的表达修饰，可以显著影响到消化系统上皮细胞来源恶性肿瘤的发生。组蛋白H2B(uH2B)的单素泛化的表达调控，可以通过影响下游基因转录水平，进而促进结肠癌的发生发展。本研究通过 选取2013年1月-2016年1月本院胃肠外科手术切除的83例结肠腺癌组织标本，探讨了uH2B在结肠癌、癌旁组织及正常组织中的表达，报告如下。

1 资料与方法

1.1 一般资料

选取2013年1月—2016年1月本院胃肠外科手术切除的83例结肠腺癌组织标本、癌旁组织，既往收集的20例正常结肠组织进行研究。原发性结肠腺癌83例，男48例，女35例; 年龄41～79岁，平均年龄(63.1±9.4)岁; 肿瘤分化程度：高分化24例，中分化22例，低分化37例; 浸润深度：肌层42例，浆膜层41例，淋巴结转移38例。正常结肠组织20例，男12例，女8例; 年龄36～79岁，平均年龄(61.7±13.6)岁。2组的年龄、性别构成差异无统计学意义(P>0.05)。纳入标准：所有患者均在本院接受手术治疗，术后病理学检查确诊为原发性结肠腺癌; 术前未接受放化疗、免疫治疗; 正常肠黏膜组织来源于外伤手术术后标本; 入选对象的各项基础资料完整。排除标准：转移性结肠癌患者; 伴有其他部位恶性肿瘤疾病的患者; 临床资料不完整、未经病理学证实的患者。

1.2 免疫组化方法

采用石蜡切片，切片厚度3 μm, 3% H2O2室温孵育5 min, 采用去离子水水冲洗3次，每次3 min, 采用浓度为10% 牛奶蛋白(1 g蛋白加入100 mL纯水)封闭，室温孵育5 min, 加入uH2B蛋白抗体(鼠来源，南京碧云天生物科技有限公司), 37 ℃ 孵育2 h, PBS缓冲液冲洗3次，每次5 min, 滴加HRP标记的二抗(兔来源，购自罗氏检测公司), 37 ℃ 孵育30 min, PBS 冲洗3次，每次5 min, 加入 NBT/BCIP色剂显色5 min, 复染，脱水，透明，封片，镜下观察。OLIPICS电子显微镜购自上海精密仪器有限公司，配套试剂购自南京泰康生物科技有限公司。

1.3 免疫组化判断标准

免疫组化阳性结果判定: uH2B蛋白的阳性着色表达于细胞膜，呈黄色、棕黄色、褐色颗粒表达，根据着色强度: 0分为无色、1分为淡黄色、2分为棕黄色、3分为褐色、黑色；根据阳性细胞比例：阳性细胞数目所占比例<10%为1分、阳性细胞所占比例11%～50%为2分、阳性细胞数51%～75%为3分、阳性细胞数所占比例>75%为4分，两种积分相乘总分<3分为阴性、≥3分为阳性。(-)为总分<3分，阴性表达; (+)为3～5分，弱阳性表达; (2+)为6-9分，中阳性表达; (3+)为>9分，强阳性表达。

1.4 统计学方法

数据统计分析采用SAS 10.0进行处理，计量资料采用均数±标准差进行统计描述; 计数资料采用百分率进行统计描述, 2组间比较采用χ2检验，P<0.05表示差异具有统计学意义。

2 结 果

2.1 3类组织标本的uH2B蛋白的阳性率比较

结肠癌组织标本中uH2B蛋白的阳性表达率46.99%, 低于癌旁组织的83.13%、正常结肠黏膜组织的90.00%, 差异均具有统计学意义(P<0.05); 癌旁组织和正常结肠黏膜组织中uH2B蛋白的阳性表达率差异无统计学意义(P>0.05), 见表1、图1。

表1 3类组织标本的uH2B蛋白的阳性率比较

2.2 结肠癌组织标本中的uH2B蛋白的阳性率 与患者病理参数的关系

结肠癌组织标本中uH2B蛋白的阳性表达率与肿瘤的TNM分期、分化程度、淋巴结转移具有相关性(P<0.05), 与患者的年龄、性别、肿瘤浸润深度、肿瘤最大径的关系不显著(P>0.05), 见表2。

3 讨 论

饮食习惯的改变、过度饮酒及遗传易感等因素均可以促进结肠腺癌的发生发展，特别是在年龄大于45岁的老年吸烟男性人群中，结肠腺癌的发病率可达0.005%以上，且近年来具有明显上升趋势[6-7]。结肠癌患者容易早期发生淋巴结及血行转移，临床预后较差, 5年生存率不足35%, 中位生存时间不足32个月[8], 而通过对于结肠腺癌发生发展过程中相关遗传学生物机制的研究，可以为结肠癌的免疫靶向治疗或者综合性的生物学治疗提供新的靶点或者思路。

A为正常结肠黏膜组织;B为癌旁组织;C为原发性结肠腺癌组织图1 免疫组化染色病理图(200倍)

表2 uH2B蛋白的阳性率与患者临床病理参数的关系[n(%)]

表观遗传学的改变对于恶性肿瘤的发生具有重要的调控作用，组蛋白的乙酰化、硫酸化、磷酸化及甲基化等修饰方式，可以通过诱导下游癌基因转录起始因子的活性，促进结肠上皮黏膜细胞周期的异常活化，导致癌细胞的过度增殖[9]。然而迄今为止对于组蛋白uH2B蛋白的单素泛化研究较少。uH2B蛋白可以在H2A、H2B、H3、H4的氨基末端区域的某些专一位置形成N6-乙酰赖氨酸，通过H1位点的磷酸化，进而影响转录共同抑制复合物的形成，参与转录阻遏和抑癌基因的沉默等过程[10-11]。已有的研究[12]探讨了uH2B蛋白的单素泛化改变与肝癌及食管癌发生的关系，认为uH2B蛋白的单素泛化可以提高消化系统恶性肿瘤的发生概率，并促进病情的临床进展。本研究的创新性在于探讨了uH2B蛋白在结肠腺癌组织中表达的同时，分析了其与结肠癌患者临床病理特征的关联。

本研究发现，在结肠腺癌及癌旁组织中uH2B蛋白均呈现出了明显的低表达态势，其表达浓度明显低于正常对照组织，特别是结肠腺癌组织中的uH2B蛋白的表达浓度更低，低于癌旁组织，差异具有统计学意义，这些均提示了uH2B蛋白参与到了结肠癌的发生发展过程中。uH2B蛋白的单素泛化改变，可以在影响组蛋白四级空间结构的基础上，促进癌基因转录和反应，从而导致结肠癌的发生发展。Coskun D等[13-14]通过免疫组化分析了72例结肠癌样本量的临床资料，发现uH2B在结肠癌组织中的表达强度仅仅为15%，明显低于癌旁组织，这与本研究结论较为一致。免疫组化染色分析可以发现, uH2B蛋白主要表达于癌细胞的细胞膜及细胞核周边，提示其可能通过影响到细胞内遗传物质的转录或者细胞膜上第二信使的合成等途径影响到结肠癌的发生，但相关具体机制仍然需要进一步探讨。对于uH2B蛋白与结肠癌临床病理特征的关系研究可以发现, uH2B蛋白与结肠腺癌的TNM分期、分化程度、淋巴结转移具有明显的相关性，表明uH2B蛋白可能影响到了结肠癌的细胞分化及淋巴结侵袭等病理过程, uH2B蛋白表观遗传性水平的修饰，对于癌细胞分化及淋巴结转移等的影响考虑主要与组蛋白的修饰有关，但需要注意的是，本研究并未发现uH2B蛋白与结肠癌组织浸润深度的关系，这与Kim D等[15]的结论并不完全一致，考虑到样本量的不足、临床资料的收集偏移等，均可能影响到了结论的差别。

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Expression of uH2B in primary adenocarcinoma of the colon and its relationship with clinicopathological parameters

WANG Haigang, XIE Hongmei, HAN Xue, ZHANG Lixian, ZHAO Wenzeng

(SecondDepartmentofGeneralSurgery,GeneralHospitalofNorthChinaPetroleumAdministration,Renqiu,Hebei, 062552)

Objective To study of primary colorectal adenocarcinoma histone H2B single prime generalization (uH2B) and its relationship with clinicopathological parameters.Methods Colonic cancer tissue samples and para-carcinoma tissue of gastrointestinal surgery resection of 83 cases were selected from January 2013 to January 2016 in our hospital, and normal colon tissue of 20 cases was collected, and uH2B protein expression level in tissue samples was observed using immunohistochemical staining, and its relationship with clinical pathological parameters of patients with primary colonic carcinoma was analyzed.Results The positive expression rate of uH2B protein in colon cancer tissues was 46.99%, which was lower than 83.13% of adjacent tissues and 90.00% in normal colon mucosa, the differences were statistically significant (P<0.05); But there was no significant difference in the positive expression of uH2B protein in adjacent tissues and normal colonic mucosa (P>0.05); The positive expression rate of tumor uH2B protein in colon cancer tissues in the TNM stage was correlation with degree of differentiation and lymph node metastasis (P<0.05), and it had no significant relationship with the patient′s age, gender, tumor invasion depth, tumor size (P>0.05).Conclusion The decreased expression rate of uH2B protein in colon carcinoma tissue is correlated with the TNM stage, differentiation degree and lymph node metastasis of the patients.

primary adenocarcinoma of the colon; generalization of histone H2B; clinical pathological parameters

2016-12-22

中国石油华北油田矿区临床医学研究项目(2011-HB-G27-3)

R 735.3

A

1672-2353(2017)09-099-04

10.7619/jcmp.201709025