RACK1和VEGF蛋白在非小细胞肺癌中的表达及意义

米小芳，姜 霞，郑绘霞，梁建芳，肖 虹(山西医科大学第一医院病理科,太原 0000;山西医科大学基础医学院病理教研室;运城市中心医院内分泌科；通讯作者，E-mail：xiaohonghong9999@6.com)

RACK1和VEGF蛋白在非小细胞肺癌中的表达及意义

米小芳1，姜 霞2,3，郑绘霞1，梁建芳1，肖 虹1*
(1山西医科大学第一医院病理科,太原 030001;2山西医科大学基础医学院病理教研室;3运城市中心医院内分泌科；*通讯作者，E-mail：xiaohonghong9999@163.com)

目的 研究RACK1和VEGF蛋白在人非小细胞肺癌中的表达及意义。 方法 应用免疫组织化学EnVision法检测127例非小细胞肺癌组织(包括癌旁组织45例及非小细胞肺癌组织82例)中RACK1和VEGF的表达情况。 结果 RACK1和VEGF在肺腺癌组织中的表达明显高于癌旁组织(P<0.05);RACK1在肺腺癌中的表达在不同淋巴结转移情况及TNM分期间差异有统计学意义(P<0.05),在不同性别和不同肿瘤分化程度间差异无统计学意义(P>0.05);VEGF表达在不同肿瘤分化程度、淋巴结转移及TNM分期间差异有统计学意义(P<0.05),在不同性别间差异无统计学意义(P>0.05)。相关性分析结果表明,在肺腺癌中RACK1蛋白表达与VEGF蛋白表达呈正相关性(P<0.05)。 结论 RACK1和VEGF在非小细胞肺癌中高表达,尤其在肺腺癌的发生发展过程中发挥了一定的作用,可能与RACK1和VEGF共同发挥作用促进细胞的增殖有关。

RACK1； VEGF； 非小细胞肺癌

肺癌具有患病率高、死亡率高的特点,其中非小细胞肺癌(non-small cell lung cancer,NSCLC)占到所有肺癌类型的80%,治疗方式仍然以手术辅助放化疗为主。然而,多数患者的预后却不尽如人意,不同组织学类型的患者预后不同[1]。所以,寻求有效的生物学标记来给每位患者建立个人治疗计划很有必要[2]。本实验通过免疫组织化学法检测RACK1和VEGF在非小细胞肺癌中的表达情况来探讨RACK1、VEGF在非小细胞肺癌的发生发展中的作用。

1 材料与方法

1.1 组织标本

收集山西医科大学第一医院2004-02～2016-08原发性非小细胞肺癌手术切除组织标本及活检标本共82例(其中包括鳞癌32例,腺癌50例,标本离体后立即投入4%福尔马林液中固定,另取远离肿瘤部位组织45例同法固定),年龄在35-73岁。病理类型:鳞癌32例,腺癌50例。肺腺癌患者中男性32例,女性18例;临床分期:Ⅰ-Ⅱ期15例,Ⅲ-Ⅳ期35例;分化程度:中-高分化35例,低分化15例;淋巴结转移者25例。选取45例癌旁组织作为对照组,所有患者术前均无放化疗史及治疗史。

1.2 试剂

兔抗人RACK1单克隆抗体与兔抗人VEGF多克隆抗体均购自Santa Cruz Biotechnology。

1.3 免疫组织化学

所有石蜡标本,切片厚度4 μm。采用EnVision法检测RACK1及VEGF的表达情况。加入兔抗人RACK1单克隆抗体(浓度1 ∶300),兔抗人VEGF(浓度1 ∶100)。4 ℃冰箱过夜,滴加50 μl的辣根过氧化物酶HRP标记的二抗,DAB显色。

结果判定:RACK1和VEGF以胞质中出现黄棕色或黄褐色均匀颗粒状物为阳性。高倍显微镜下随机观察5个视野,每个视野计数100个细胞计算百分比,阳性细胞1%-25%为1分,26%-50%为2分,51%-75%为3分,76%-100%为4分。阳性强度:无色为0分,淡黄色为1分,黄色为2分,棕黄色为3分。二者相乘>3分为阳性,≤3分为阴性。

1.4 统计学分析

采用SPSS 19.0统计学软件进行处理,组间比较采用χ2检验,以P<0.05为差异有统计学意义。

2 结果

2.1 RACK1在肺癌组织中的表达情况

RACK1在非小细胞肺癌组织中的表达明显高于癌旁组织(肺癌组织的阳性表达率为51%,癌旁组织为4%),差异有统计学意义(P<0.05);RACK1在肺癌组织中的表达与病理分型有关,在肺腺癌中的阳性表达率高于肺鳞癌(见图1),差异有统计学意义(P<0.05),RACK1在肺腺癌中的表达在不同性别、分化程度间差异无统计学意义(P>0.05),在不同淋巴结转移情况及TNM分期间差异有统计学意义(P<0.05,见表1,2)。

A.腺癌 B.鳞癌图1 RACK1蛋白在非小细胞肺癌中的表达 (EnVision,×100)Figure 1 Expression of RACK1 in non-small cell lung cancer (EnVision,×100)

表1 RACK1及VEGF在组织中的表达情况

Table 1 The expression of RACK1 and VEGF in NSCLC tissues

组织类型nRACK1+-χ2PVEGF+-χ2P癌旁组织4524328．0760．00134225．2090．001肺癌组织82424031．4900．00142405．9600．015 鳞癌324281121 腺癌5038123119

2.2 VEGF在肺癌组织中的表达情况

VEGF在非小细胞肺癌组织中的表达明显高于癌旁组织(肺癌组织的阳性表达率为51%,癌旁组织为7%),差异有统计学意义(P<0.05);VEGF在肺癌组织中的表达与病理分型有关,在肺腺癌中的阳性表达率高于肺鳞癌(见图2),差异有统计学意义(P<0.05),VEGF在肺腺癌中的表达在不同性别间差异无统计学意义(P>0.05),在不同分化程度、淋巴结转移情况及TNM分期间差异有统计学意义(P<0.05,见表1,2)。

2.3 RACK1与VEGF在肺腺癌中的相关性

由表3相关性分析显示,RACK1与VEGF存在正相关性(r=4.358,P=0.037)。

A.腺癌 B.鳞癌图2 VEGF蛋白在非小细胞肺癌中的表达 (EnVision,×100)Figure 2 Expression of VEGF in non-small cell lung cancer (EnVision,×100)

表2 RACK1及VEGF在腺癌组织中与临床参数的关系

Table 2 Relationships between the expression of RACK1 and VEGF and clinicopathologic parameters in adenocarcinoma tissues

临床病理特征nRACK1+-χ2PVEGF+-χ2P性别0．0150．9011．7190．19 男322572210 女1813599分化程度0．4230．5154 4020 036 中/高352872510 低1510569TNM分期4 3910 0364 4020 036 Ⅰ-Ⅱ期158769 Ⅲ-Ⅳ期353052510淋巴结转移10 9650 00114 3460 001 有25241223 无251411916

表3 RACK1与VEGF在肺腺癌中的相关性

Table 3 The correlation between RACK1 and VEGF in lung adenocarcinoma

RACK1VEGF+-rP+20184 3580 037-111

3 讨论

大多数非小细胞肺癌患者发现时多已晚期,传统的治疗方式治疗效果不理想,预后较差。早发现、早诊断、早治疗对于提高非小细胞肺癌患者的生存质量与预后相当重要。研究非小细胞肺癌的有效生物学指标对于早诊断、改善患者预后有重要意义[3-5]。

曹汐汐等[6]通过体内外实验研究证实RACK1在乳腺癌中高表达,并促进癌细胞增殖,迁移运动,侵袭转移,同时还收集160例人乳腺癌组织,通过免疫组织化学法研究RACK1与年龄、性别、临床分期和组织学分级等临床常用参数之间的关系,证实了RACK1是与乳腺癌患者预后有关的一个更优越的独立的分子指标。Li等[7]通过CCK8法检测细胞增殖实验、Western blot检验证实了RACK1在胰腺导管腺癌的发生发展中发挥作用,并且调控癌细胞的凋亡。Peng等[8]证实了RACK1与鼻咽癌的发生发展关系密切,且RACK1高表达并通过PI3K/Akt信号通路促进癌细胞的分化和转移。还有研究表明RACK1是与非小细胞肺癌患者早期诊断有关的一个指标[9]。本研究通过免疫组化的方法研究RACK1 在肺腺癌患者中的表达情况以及与临床病理参数之间的关系。结果表明RACK1在非小细胞肺癌中高表达,并且在肺腺癌中表达高于肺鳞癌,在肺腺癌中TNM分期Ⅲ-Ⅳ期中表达阳性率均较高,伴淋巴结转移的患者RACK1阳性表达达到96%,并且TNM分期越高,有淋巴结转移的患者RACK1阳性表达越高。随访结果显示伴有淋巴结转移的患者预后较差,因此，建议无淋巴结转移的患者中RACK1阳性表达的14位患者定期复查,防止复发转移。

有研究表明卵巢癌是一种死亡率最高的妇科系统癌症,其中血管内皮生长因子(VEGF)能调节肿瘤的血管生成、生长、转移和侵袭,VEGF介导的肿瘤血管再生已经运用于多种肿瘤的靶向治疗[10,14，15]。Sun等[11]通过PCR和免疫组织化学法证实VEGF在肺腺癌细胞A549中高表达。还有研究表明VEGF在胃癌组织中的表达高于癌旁组织,并且通过调控CRMP4促进了胃癌的发生与发展[12]。Goel等[13]认为VEGF是肿瘤干细胞的一种潜在的治疗靶点,然而从前列腺肿瘤中分离的肿瘤干细胞对VEGF靶向治疗有抵抗作用,结合P-Rex1抑制剂治疗可以显著提高化疗的敏感性。本研究通过免疫组化的方法研究VEGF在非小细胞肺癌患者中的表达表明VEGF在非小细胞肺癌中高表达,并且在肺腺癌中表达高于肺鳞癌,在分化程度低的非小细胞肺癌组织中VEGF阳性率高于分化程度中高组中VEGF阳性率。在TNM分期Ⅲ-Ⅳ期中表达阳性率高,伴淋巴结转移的患者VEGF阳性表达高于不伴淋巴结转移的患者,并且TNM分期越高,伴有淋巴结转移的患者VEGF阳性表达越高。

综上,通过研究RACK1与VEGF蛋白在非小细胞肺癌中的表达及与肺腺癌的临床病理联系,发现RACK1与VEGF蛋白与肺腺癌的发展有关,并且可能在肿瘤的转移与侵袭中发挥作用。

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Expression of RACK1 and VEGF in human non-small cell lung cancer and its clinical significance

MI Xiaofang1,JIANG Xia2,3,ZHENG Huixia1,LIANG Jianfang1,XIAO Hong1*
(1DepartmentofPathology,FirstClinicalMedicalCollege,ShanxiMedicalUniversity,Taiyuan030001,China;2DepartmentofPathology,SchoolofBasicMedicine,ShanxiMedicalUniversity;3DepartmentofEndocrinology,YunchengCentralHospital；*Correspondingauthor，E-mail：xiaohonghong9999@163.com)

ObjectiveTo investigate the expression of RACK1 and VEGF in human non-small cell lung cancer and its clinical significance.MethodsExpression of RACK1 and VEGF was detected by immunohistochemistry EnVision assay in 127 specimens of lung tissues,including 45 cases of cancer adjacent tissues and 82 cases of non-small cell lung cancer tissues.ResultsThe positive expression rates of RACK1 and VEGF proteins in lung adenocarcinoma tissues were significantly higher than that in cancer adjacent tissues (P<0.05).The expression of RACK1 in lung adenocarcinoma was significantly different among different lymph node metastasis or TNM stage(P<0.05),but there was no significant difference between different sex or different tumor differentiation(P>0.05).The expression of VEGF was significantly associated with tumor differentiation,lymph node metastasis or TNM stages(P<0.05),but not with sex(P>0.05).The expression of RACK1 was positively correlated with VEGF expression in lung adenocarcinoma (P<0.05).ConclusionThe expression of RACK1 and VEGF proteins is significantly high in non-small cell lung cancer tissues,especially in lung adenocarcinoma.RACK1 and VEGF may promote cell proliferation in the progression of lung cancer.

RACK1； VEGF； non-small cell lung cancer

米小芳,女,1989-01生,学士

2016-12-22

R734.2

A

1007-6611(2017)05-0458-04

10.13753/j.issn.1007-6611.2017.05.012