正交试验优选藤三七提取工艺

阎思彤， 李 胜， 于浩淼， 徐雯娟， 朱翠玲， 林子豪， 徐先祥

(华侨大学 生物医学学院，福建 泉州 362021)

正交试验优选藤三七提取工艺

阎思彤， 李 胜， 于浩淼， 徐雯娟， 朱翠玲， 林子豪， 徐先祥*

(华侨大学 生物医学学院，福建 泉州 362021)

目的：优选藤三七的提取工艺。方法：采用正交实验法，以提取得率及总皂苷含量为评价指标，考察乙醇浓度、提取时间、温度和提取次数四种因素对提取工艺的影响。结果：温度和提取次数对藤三七得率有显著影响，最佳提取工艺条件为80 ℃水浴，以60%乙醇浓度提取藤三七3次，每次1.5 h。结论：优选的工艺简单可行。

藤三七；提取工艺；正交试验；总皂苷

藤三七又名洋落葵、土三七等，因其珠芽、地下块茎的外观与名贵中药三七相似而得名，来源为落葵科多年生蔓生植物藤三七[Anrederacordifolia(Ten.) Sreenis][1]，生长容易，福建省内可常见其野生分布，福建民间有采食藤三七嫩叶和茎尖的习惯。藤三七珠芽可入药，具有补肝肾、壮腰膝、抗疲劳、消肿散痰等功效，主治腰膝痹痛，病后体弱，跌打损伤等作用[2]，且安全无毒[3]。为进一步研究开发研究藤三七，本文以正交试验优选了藤三七的醇提取工艺。

1 材 料

干燥藤三七药材，由泉州市中医院洪佳妮中药师鉴定为藤三七[Anrederacordifolia(Ten.) Sreenis]珠芽，粉碎为粗粉备用。齐墩果酸对照品(含量测定用)，批号201206，中国食品药品检定研究院；香草醛、冰醋酸、高氯酸、95%乙醇、甲醇等试剂均为分析纯。UV-1100紫外可见分光光度计，上海美谱达公司；BSA124S万分之一电子天平，南京晟康生化科技公司；DUG-S2474电热恒温干燥箱，厦门科睿特仪器公司；HH-2 数字显示恒温水浴锅，常州国华仪器有限公司。

2 方法及结果

2.1 正交试验因素和水平

选取影响加热回流提取的因素包括提取次数、提取溶剂、提取时间、温度，建立四因素三水平L9(34)正交试验，见表1。分别按照不同的提取条件，称取藤三七药材粗粉50 g,乙醇回流提取，过滤提取液，水浴浓缩，蒸干，计算得率。

表1 L9(34)正交试验因素和水平表

2.2 对照品溶液的制备和比色标准曲线绘制

精密称取干燥至恒重的齐墩果酸对照品1.041 mg，加甲醇溶解并定容至1 mL。对照品溶液2倍等比稀释8个浓度，用热风吹去试管中溶剂，加入新配制5%香草醛-冰醋酸溶液0.2 mL,高氯酸0.8 mL，60 ℃水浴中加热15 min，立即冷却，加冰醋酸5 mL并摇匀。以空白试剂调零，于400～760 nm进行扫描，显示在550 nm处有最大吸收，于550 nm波长处测定吸光度，以齐墩果酸浓度为横坐标X，以吸光度(A)值为纵坐标Y，绘制标准曲线，得到回归方程Y=0.009X+0.092，相关系数γ=0.997 0，线性范围为0.651～10.41 mg/mL。

2.3 供试品溶液制备和含量测定

精密称取2.1项下制备的各藤三七提取干膏10.00 mg，置2 mL容量瓶中，加甲醇溶解并定容至刻度，移至试管中，用热风吹去溶剂，按2.2项下方法测定A值，计算各提取物中总皂苷含量。

2.4 精密度试验

取同一供试品溶液，按2.2项下方法连续测定6次A值，结果RSD=1.55%。

2.5 稳定性试验

取同一供试品溶液，按2.2项下方法，分别于0、10、15、20、25、30 min测定A，结果RSD=1.91%，表明供试品溶液在0.5 h内稳定。

2.6 正交试验结果分析

从表2和表3中藤三七提取得率结果看出，A与B因素有显着性差异，C与D无显著性差异，各因素影响作用主次顺序为D>C>B>A, 直观分析最优工艺条件为 A3B2C3D2水平。而从总皂苷含量结果看，A、B、C、D因素均无显着性差异，最优工艺条件为A1B1C1D3。考虑到中药提取大生产的实际情况以及生产成本，选择最佳提取条件为A3B3C3D2，即以80 ℃水浴，60%乙醇浓度提取藤三七3次，每次1.5 h。

表2 正交试验结果

干膏得率K11140.91128.32153.0297.58K12138.45160.02105.90234.62K13163.28154.30183.72110.44R18.27610.56625.94045.680总皂苷含量K2169.5462.5461.0142.43K2252.6848.4351.5454.34K2342.9854.2352.6568.43R28.8534.7033.1568.666

表3 方差分析

2.7 验证试验

称取藤三七粗粉100 g，按优选提取条件温度80 ℃，提取次数为3次，单次提取时间为1.5 h，乙醇浓度为60%的工艺进行提取，平行3份。结果浸膏得率分别为1.057%,1.564%，1.342%，其中的总皂苷含量分别为15.44，15.76，16.10 mg/mL，平均提取量15.77 mg/mL，RSD=1.38%，表明优选的工艺条件稳定可行。

3 讨 论

国内外对藤三七的化学成分研究较少，化学预试验结果表明藤三七含有多量的皂苷和糖类[4]，以及黄酮类等成分[5]。皂苷类是一类具有多种药理作用的中药成分，因此本试验参考文献方法[6]采用乙醇对藤三七进行提取，温度和提取次数对藤三七干膏得率有显著影响，而乙醇浓度、温度、提取次数、提取时间 4 因素对总皂苷含量无显著影响，综合考虑选择合理稳定的藤三七醇提工艺，优化的工艺简单易行，可用于提取藤三七的工业大规模生产。

[1] 国家中医药管理局《中华本草》编委会.中华本草：第2卷[M].上海：上海科学技术出版社，1999:760-761.

[2]吴萍，严建业，黄丹，等.藤三七的现代研究进展[J].科技导报，2012，30(16)：76-79.

[3]梁毅，陈君丽，吴思洋，等.落葵薯化学成分及急性毒性实验研究[J].临床医学工程，2010,17(1)：57-58.

[4]王丽兰，扬凤和，王春霖，等.藤三七的化学成分分析[J].中国药学杂志，1990，2(11)：673.

[5] 蒋珍藕，邱宏聪，邓聿胤.藤三七总皂苷和总黄酮提取工艺优选[J].中国实验方剂学杂志，2013，19(19):28-30.

[6] 蒋珍藕，邱宏聪，邓聿胤.藤三七总皂苷的大孔树脂纯化工艺优选[J].中国实验方剂学杂志，2014，20(1):26-29.

Optimization of Extraction Process forAnrederacordifoliaby Orthogonal Design

Yan Sitong,Li Sheng, Yu Haomiao,Xu Wenjuan, Zhu Cuiling, Lin Zihao, Xu Xianxiang*

(School of Biomedical Science, Huaqiao University, Quanzhou 362021, China)

Objective:To optimize extraction process forAnrederacordifolia. Method:Orthogonal design was used to study the influence of ethanol concentration, extraction times, temperature and extractive time. The extract yield and component content of total saponins were indexed as detective markers.Results: The extraction temperature and times have remarkable influence on extract yield ofAnrederacordifolia. The best extractive process conditions were heated in water bath in 80℃, extracting three times with 60% ethanol, for 1.5 hours per time. Conclusion:The optimized extraction process was reasonable and feasible．

Anrederacordifolia; extracion process;orthogonal test; total saponins

10.3969/j.issn.1006-9690.2017.01.010

2016-06-08

福建省大学生创新训练计划项目(201510385045)。

阎思彤(1996—)，女，华侨大学生物医学学院2014级药学本科生。E-mail：824148103@qq.com

*通讯作者： 徐先祥(1978—)，博士，助理研究员，主要从事中药药理研究与中药新药研制开发。E-mail: xuxianxiang@163.com

R284.2

A

1006-9690(2017)01- 0035-02