高效液相色谱法测定银翘解毒颗粒中连翘苷的含量

汪玉萍 李传响

高效液相色谱法测定银翘解毒颗粒中连翘苷的含量

汪玉萍 李传响

目的建立银翘解毒颗粒中连翘苷的含量测定方法。方法采用高效液相色谱法(HPLC)进行连翘苷的含量测定, 色谱柱为SHIMADZU VP-ODS柱(150 mm×4.6 mm, 5 μm ), 流动相：水—乙腈—甲醇(60∶30∶10), 在277 nm波长处检测。结果在0.1～0.5 mg/ml浓度范围内连翘苷呈良好的线性关系(r=0.9998), 平均回收率为100.2%,RSD=1.12%(n=5)。结论本含量测定快速准确, 可用于本制剂的质量控制。

银翘解毒颗粒 ；连翘苷；高效液相色谱法

银翘解毒颗粒为临床常用中成药, 为解表剂, 具有辛凉解表、清热解毒之功效。主治风热感冒, 症见发热头痛, 咳嗽口干, 咽喉疼痛。经分析其处方组成, 作者认为连翘苷也是药效的重要成分之一, 为更好地控制该品种的质量, 应对其含量进行质量控制, 而现版药典未对其进行含量控制［1］,为此作者研究其含量测定的方法, 报告如下。

1 仪器与试剂

LC—20AT型高效液相色谱仪(日本岛津公司)；LC solution色谱工作站。连翘苷对照品(中国药品生物制品检定所, 批号：110821-201213, 含量：95.3%)；银翘解毒颗粒(规格：15 g/袋, 160203;160721;160815)；试剂均为分析纯。

2 方法与结果

2. 1 处方组成金银花、连翘、薄荷、荆芥、淡豆豉、牛蒡子(炒)、桔梗、淡竹叶、甘草。

2. 2 含量测定经处方分析, 本方中金银花、连翘为主要药材, 绿原酸与连翘苷是该制剂两个主要成分。连翘苷本文实验条件下与样品中其他成分间分离很好, 在277 nm有最大吸收［2］, 重现性好, 见图1～3。现行版药品标准［1］只确定了绿原酸的含量测定, 不能够全面控制该制剂质量, 作者增加连翘苷作为质控指标之一, 应用HPLC法全面有效控制银翘解毒颗粒的质量。

图1 连翘苷紫外吸收图谱

图2 连翘苷对照品色谱图

图3 银翘解毒颗粒样品色谱图

2. 3 系统性实验 色谱柱：SHIMADZU VP-ODS柱(150 mm× 4.6 mm, 5μm )；水—乙腈—甲醇(60∶30∶10), 检测波长：277 nm；流速：1 ml/min, 柱温：30℃；进样量20μl。

2. 4 配制对照品溶液 精取连翘苷对照品约10 mg置于10 ml容量瓶中, 用甲醇溶解并稀释至刻度制成1 mg /ml的对照品溶液［4］。

2. 5 制备供试品溶液 加氯仿分3次水浴回流萃取［1］20 min银翘解毒颗粒20 g加水溶解过滤后的滤液, 合并氯仿液, 水浴蒸干, 用1 ml甲醇溶解得供试品溶液。

2. 6 制备阴性对照溶液 依照处方比例, 自制不含连翘的阴性对照样品, 按2.3项下要求同法制备。

2. 7 绘制标准曲线精密吸取2.4项下溶液1、2、3、4、5 ml, 分置10 ml容量瓶中, 用甲醇稀释至刻度, 制成不同浓度的溶液, 分别6次进样20 μl, 以平均色谱峰面积(A)与连翘苷浓度(C)绘制标准曲线, 得回归方程为C=7.1638×10-7+ 6.0212×10-4,r=0.9998, 表明结果呈线性关系。

2. 8 精密度试验 精密吸取2.4项下对照品溶液, 按2.3项下色谱条件测定含量, 测定5次峰面积, 结果RSD=1.12%。

2. 9 回收率实验 将已知含量的供试品样品2 ml和1 ml的标准品溶液混合均匀, 按上述条件测定其中连翘苷的含量,结果平均回收率为100.2%,RSD=1.1%(n=5)。见表1。

表1 回收率实验(n=5)

2. 10 样品测定按上述方法, 测定3批样品(规格15 g/袋, 160203；160721；160815)连翘苷的含量分别为6.2103、6.1376、6.2201 mg。

3 讨论

3. 1 经不同流动相, 如氯仿—甲醇(70∶30)、水—乙腈(85∶15)、水—乙腈—甲醇(60∶30∶10)等多种流动相反复试验, 结果以水—乙腈—甲醇(60∶30∶10)为流动相, 以VP-ODS柱(150 mm×4.6 mm, 5μm)为分离柱的情况下, 分离的效果最佳。

3. 2 参考有关文献资料［3-5］, 采用本法测定银翘解毒颗粒中连翘苷的含量, 稳定可靠, 重现性好, 可作为本制剂质控方法的重要补充。

［1］ 国家药典委员会 . 中华人民共和国药典(一部). 北京:化学工业出版社, 2015:附录48.

［2］ 李芳美, 林朝展, 甄松峰, 等. RP-HPLC法测定抗病毒口服液中芒果苷和连翘苷的含量. 中药新药与临床药理, 2009, 20(1):47-49.

［3］ 孙晓佳, 纪宏宇, 兰恭赞, 等. HPLC法测定乳癖消颗粒中连翘苷的含量. 中国药师, 2016, 19(1):184-186.

［4］ 孟和, 朱艳红, 吴学军. HPLC法测定保和丸中连翘苷的含量.中国药事, 2013, 27(3):312-314.

［5］ 陈国辉. 高效液相色谱法测定双黄连口服液中连翘苷含量. 海峡药学, 2015, 27(10):70-71.

10.14164/j.cnki.cn11-5581/r.2017.08.099

2017-03-03］

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