2016年山东省猪病毒性疫病的病原学检测

韦雪华，汪 洋，李玉杰，孙圣福，肉先姑·库尔班，刘丽平，姜秀云，陈 静，王贵升，田夫林

（1. 山东农业大学动物科技学院，山东泰安 271018；2. 山东省动物疫病预防与控制中心，山东济南 250022；3. 新疆喀什麦盖提县畜牧兽医局，新疆麦盖提 844600）

2016年山东省猪病毒性疫病的病原学检测

韦雪华1，汪 洋2，李玉杰2，孙圣福2，肉先姑·库尔班3，刘丽平2，姜秀云2，陈 静2，王贵升2，田夫林2

（1. 山东农业大学动物科技学院，山东泰安 271018；2. 山东省动物疫病预防与控制中心，山东济南 250022；3. 新疆喀什麦盖提县畜牧兽医局，新疆麦盖提 844600）

为了解2016年山东省几种主要猪病毒性疫病的流行情况，采用荧光定量RT-PCR或PCR方法，对山东省部分猪场送检的730份病料进行了病原学检测。结果检出248份阳性病料，样品个体阳性检出率由高到低的病原依次为猪圆环病毒2型（13.02%）、猪蓝耳病病毒（10.41%）、古典猪瘟病毒（8.08%）、猪流行性腹泻病毒（7.26%）、猪伪狂犬病毒（3.84%）、猪轮状病毒（1.65%）、猪传染性胃肠炎病毒（0.14%）；样品混合感染阳性率为8.08%，以猪蓝耳病病毒和猪圆环病毒2型混合感染最为常见（3.02%）。本次病原学检测为山东省猪场病毒性疾病的综合防控提供了数据参考。

猪圆环病毒2型；猪蓝耳病病毒；古典猪瘟病毒；猪流行性腹泻病毒；猪伪狂犬病毒；猪轮状病毒；猪传染性胃肠炎病毒；病原学检测；混合感染

近年来，山东省养猪业平稳发展，但部分猪场病毒性疫病的流行和发生仍较为严重，威胁着养猪业的发展[1]。猪病毒性疫病危害严重，其引起的病理变化和临床症状也较为复杂，主要表现为典型症状明显减轻，病原混合感染和继发感染较严重，因此必须依靠实验室检测来确诊[2]。山东省动物疫病预防与控制中心采用荧光定量RT-PCR和PCR方法，对2016年山东省部分地市猪场送检的730份猪病料进行了猪瘟病毒（CSFV）、猪蓝耳病病毒（PRRSV）、猪伪狂犬病毒（PRV）、猪圆环病毒2型（PCV-2）、猪流行性腹泻病毒（PEDV）、猪传染性胃肠炎病毒（TGEV）和猪轮状病毒（PRoV）的病原学检测。为探究2016年山东省猪场病毒性疫病的流行情况，对检测数据进行了统计分析，以期为山东省猪病毒性疫病的防控提供一定的数据参考。

1 材料与方法

1.1 材料

2016年，济南、德州、烟台、济宁、临沂、淄博等17个地市共送检了730份猪病料。山东省动物疫病预防与控制中心接样室专业人员采集了病料中的肺脏、脾脏、肾脏、淋巴结、扁桃体等组织样品，并做好标号及背景记录。

1.2 主要试剂

猪瘟病毒荧光RT-PCR检测试剂盒、猪蓝耳病病毒荧光RT-PCR检测试剂盒、猪伪狂犬病毒荧光PCR检测试剂盒、猪圆环病毒2型荧光PCR检测试剂盒，均购自北京生科尚仪科技有限公司；猪传染性胃肠炎病毒、猪流行性腹泻和猪轮状病毒三重实时荧光RT-PCR检测试剂盒，购自世纪元亨。

1.3 样品处理

将组织样品反复冻融3次，取5～10 g至于1.5 mL离心管中，剪碎，充分研磨，加入pH7.2的PBS制成糊状，8 000 r/min离心2 min，取上清，提取总核酸，置于-20 ℃备用。

1.4 检测方法

分别按照各病原荧光定量RT-PCR或PCR试剂盒的说明书进行配液，在实时荧光PCR仪上设定具体反应条件，主要包括扩增试剂的准备、加样和RT-PCR（PCR）反应。

2 结果

结果判断标准为：Ct值是none的样品为阴性，Ct值小于或等于30.0的样品为阳性，Ct值大于30.0的样品为阴性；对未出现S型曲线，但本底较高的样本，判为阴性。病料样品的结果判定是在阴阳性对照样品成立的基础上进行的。

730份猪病料中共检出248份阳性。其中，检出PRRSV变异株样品24份，占PRRSV总阳性数的31.58%；同时检出2种及以上病毒的样品59份，占总阳性样品数的23.79%，以PRRSV和PCV-2混合感染为主（表1）。

表1 样品病毒性疾病病原学检测结果

3 讨论

虽然目前已有圆环病毒弱毒苗和灭活苗[3]用于该病防控，但本次检测数据表明，病毒性疫病中的PCV-2（13.02%）阳性率仍最高，提示在加强PCV-2免疫同时，应对发病猪进行及时隔离。研究认为PCV-2可通过消化道、呼吸道传播，也可经胎盘传播，其最主要的传播方式为口鼻接触感染猪的排泄物，如粪、尿等，或是与感染猪直接接触[4]。因此，建议不要混养或采用栅栏分隔饲养，控制好饲养环境，切断病毒传播途径，加强对健康猪的保护。同时，该病毒可感染其他养殖动物，如水貂等[5]，具有一定的公共卫生威胁。

猪蓝耳病是一种主要的猪繁殖障碍性疫病，种猪群常带毒，呈亚临床感染，导致病毒在猪场中循环传播，成为生长猪群的传染源[6]。本次检测数据显示PRRSV阳性率为10.41%，其中存在24份变异株，占比为31.57%，进一步验证了PRRSV具有广泛的变异性。这种变异不仅存在于欧洲型和美洲型两大基因型内，即使是同一基因型的不同毒株之间，也存在较大的变异性[7]。此外，由于PRRSV在机体内的持续感染，使机体免疫水平降低，导致CSF、PCV-2等免疫失败、继发或混合感染，使得猪病的预防、诊断和控制更加困难。

近年来，猪瘟流行总体较为平稳，但部分猪场仍有病例发生，且临床症状和病理变化不典型。因此，应该加强环境控制，防止CSFV入侵；建立健康猪群，实行良好的饲养管理策略；建立良好的生态环境，同时应重视疫苗质量和免疫程序的合理有效。

本次检测数据显示，PRV、PEDV、TGEV和PRoV的检出阳性率均低于5%，表明这4种病毒性疫病在山东省的流行继续保持稳定，疫情控制较好，尤其是TGEV，只检出1份阳性样品，表明山东省对该病的防控效果较好。虽然这几种病疫情平稳，但仍不排除零星散发的可能，所以不能放松警惕，应继续坚持“养重于防、防重于治、综合防控”的理念[8]。

本次检测数据显示，含2种或2种以上病原的病料共计59份，阳性率为8.08%，且以PRRSV和PCV-2混合感染为主，共24份，进一步证明了病毒性疫病多以混合感染形式发生的研究结论。PRRSV和PCV-2均可造成细胞免疫和体液免疫抑制，破坏机体的免疫系统，导致猪群免疫力严重下降，从而造成继发感染和混合感染，不但容易造成误诊，给防治带来困难，而且会导致高发病率和死亡率，给养猪业造成严重威胁。建议猪场在做好卫生消毒工作的同时，加强对猪免疫效果的监测，重视猪群的混合感染和继发感染。

综上所述，2016年山东省猪病毒性疫病的检测数据表明：危害山东省养猪业的主要病原是PCV-2，其次是PRRSV和CSFV；猪群混合感染严重，尤其是PCV-2和PRRSV的混合感染。以上实验室检测数据的分析结果为山东省了解猪病毒性疫病的流行状况提供了参考，为猪病毒性疫病防控措施的制定提供了依据。

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（责任编辑：朱迪国）

Analysis on Etiology Detection of Swine Viral Diseases in Shandong Province in 2016

Wei Xuehua1，Wang Yang2，Li Yujie2，Sun Shengfu2，Rouxiangu Kuerban3，Liu Liping2，Jiang Xiuyun2，Chen Jing2，Wang Guisheng2，Tian Fulin2

（1. College of Veterinary Medicine，Shandong Agricultural University，Tai´an，Shandong 271018；2. Shandong Animal Disease Prevention and Control Center，Jinan，Shandong 250022；3. Maketi Animal Husbandry and Veterinary Bureau，Maketi，Xinjiang 844600）

In order to analyze the epidemic situation of several swine viral diseases in Shandong Province in 2016，a total of 730 samples were detected by fluorescent quantitative RT-PCR or PCR method. The results showed that there were 248 positive samples，and disease types were listed according to individual positive rates from high to low：Porcine circovirus type 2（PCV-2，13.02%），Porcine reproductive and respiratory syndrome virus（PRRSV，10.41%），Classical swine fever virus（CSFV，8.08%），Porcine epidemic diarrhea virus（PEDV，7.26%），Pseudorabies virus（PRV，3.84%），Porcine rotavirus（PRoV，1.65%），Transmissible gastroenteri tis virus（TGEV，0.14%）. Meanwhile，mixed infection rate was identified 8.08%，and the coinfection of PRRSV and PCV-2 was the most common（ratio of 3.02%）. The results of statistical analysis would provide certain theoretical reference for comprehensive prevention and control of viral diseases in swine farms in Shandong Province.

PCV-2；PRRSV；CSFV；PEDV；PRV；PRoV；TGEV；etiology detection；mixed infection

S851.3

B

1005-944X（2017）04-0013-03

10.3969/j.issn.1005-944X.2017.04.004

山东省现代农业产业技术体系毛皮动物创新团队（SDAIT-21-05）；山东省农业科技创新工程（CXGC2016B14）

并列第一作者：韦雪华、汪 洋

王贵升、田夫林