油橄榄叶多糖含量测定方法的研究

杨豆豆，田茂琳，苏满春，万瑞斌，王都留，陈海明

摘要：采用苯酚-硫酸法测定油橄榄叶多糖含量，优化得出最佳测定条件为苯酚0.8 mL，硫酸4 mL，反应温度20 ℃，反应时间10 min。加样回收率为99.95%，测得油橄榄叶多糖含量为（12.064±0.265） mg/g。

关键词：苯酚-硫酸法；多糖；油橄榄叶；测定

中图分类号：TS201.1 文献标志码：A 文章编号：1001-1463（2017）11-0048-03

doi：10.3969/j.issn.1001-1463.2017.11.016

Study on Determination of Olive Leaf Polysaccharide Using Phenol Sulfuric Acid Method

YANG Doudou， TIAN Maolin， SU Manchun， WAN Ruibin， WANG Duliu， CHEN Haiming

（Longnan Normal College， Chengxian Gansu 742500， China）

Abstract：This paper established a phenol - sulfuric acid method for determining the method of olive leaf polysaccharide content， the result shows that the optimized result shows that： A2B1C1D1， namely the best conditions is phenol 0.8 mL， 4 mL of sulfuric acid， reaction temperature 20 ℃， the reaction time is 10 min. The recovery rate is 99.95%. The polysaccharide content is 12.064±0.265 mg/g.

Key words： Phenol sulfuric acid method；Polysaccharide；Olive leaf；Determination

油橄榄（Olea europaea L.）是一种原产于地中海沿岸的木犀科（Europaea）木犀榄属（Olea）常绿乔木，与油棕、油茶和椰子并称为世界四大木本油料作物。油橄榄主要分布在欧洲地中海沿岸国家和美国加州地区，自1956年起开始在我国引 种[1 ]。其果可以榨油，也可以加工成各种食品[2 ]。油橄榄叶中也含有丰富的营养成分及活性物质，现代药理学研究表明，油橄榄叶提取物具有抗氧化、抗真菌、降血压、降血脂等活性[1， 3 ]。油橄榄多糖具有抗氧化性和抑菌性等多种活性[4 ]，属于植物多糖，国内外已有相关的专家对其做了研究，但主要研究其生理活性及提取方法，对其含量的测定报道较少。我们利用苯酚-硫酸法测定了油橄榄多糖含量，优化了各个测定条件及方法，建立了油橄榄多糖含量的测定方法，可为以后相关研究提供参考。

1 材料与方法

1.1 供试材料与试剂

供试油橄榄叶采自陇南师范高等专科学校智能温室大棚（春季生长的新叶）。苯酚分析纯由上海埃彼化学试剂有限公司提供；浓硫酸（分析纯，98%），由天津红岩试剂厂提供；无水乙醇（分析纯，98%），由天津红岩试剂厂提供；葡萄糖标准品（纯度 > 99%），由西安汇林生物科技有限公司提供。

1.2 主要仪器与设备

包括量筒、温度计、电子分析天平（德国赛多利斯）、电热恒温干燥箱（由陕西欣鹏教育科技有限公司提供）、紫外分光光度计（Thermo Scientific GENESYS 10S）、不锈钢粉碎机、120目筛子、50 mL玻璃刻度试管、数控恒温水浴锅（由陕西欣鹏教育科技有限公司提供）、涡旋混合器、贝克曼高速离心机。

2 方法

2.1 实验设计

实验采用L9 34正交设计，吸取1.0 mL葡萄糖标准溶液。各因素与水平见表1，处理组合见 表2。

2.2 实验方法

2.2.1 油橄榄叶前处理 鲜叶采摘后用自来水冲洗干净表面的泥土后，放入烘箱中60 ℃烘干至恒重，用不锈钢粉碎机粉碎，过120目筛，存于-18 ℃冰箱待用。

2.2.2 油橄榄叶多糖提取 参照中华人民共和国出入境检验检疫行业标准SN/T 4260-2015《出口植物源食品中粗多糖的测定 苯酚-硫酸法》[5 ]。称取样品0.200 0 g于50 mL具赛离心管中，用5 mL蒸馏水浸湿样品，缓慢加入20 mL无水乙醇，同时用涡旋混合器震摇，置120W超声波提取器中提取30 min。提取结束后，在4 000 r/min的条件下离心10 min，弃去上清液。不溶物用10 mL 80%乙醇溶液洗涤、离心。将不溶物转移到圆底烧瓶中，加入50 mL蒸馏水，于120W超声波提取器中提取30 min，重复2次，冷却至室温，过滤，将上清液转移至200 mL容量瓶中，残渣洗涤2～3次，定容。此样品液为测定液。

2.2.3 标准曲线的绘制 将烘干至恒重的葡萄糖标准样品准确称取0.100 0 g配制成100 mg/L的母液。分别用吸量管准确吸取0、0.2、0.4、0.6、0.8、1.0 mL的母液于20 mL具塞玻璃試管中，用蒸馏水补足至1 mL，再分别按照实验优化所得的苯酚、硫酸加入量、反应时间、反应温度进行实验。反应结束后于490 nm处用紫外分光光度计测定吸光值。所得数据利用Excel做标准曲 线。

2.4 样品测定

吸取样品液1.0 mL于20 mL具塞试管中，然后按2.2.3操作方法让其发生显色反应，并在490 nm处测定吸光值。

2.5 实验设计与数据处理工具

样品中的含糖量=（m1×v1）×0.9×10-4/（m2×v2）

式中，m1是从标准曲线上查得的含糖量，单位为ug；v1是样品定容体积，单位为mL；v2是比色测定时所取的样液的体积，单位为mL；m2是样品称取质量，单位为g；0.9是葡萄糖换算成葡聚糖的换算系数。

实验设计软件为正交设计助手3.1（共享版）。

3 结果与分析

3.1 测定条件的优化

根据表3所列的条件测定所得吸光值可知，苯酚硫酸法测定油橄榄叶多糖的最佳条件组合为：A2B1C1D1，即苯酚0.8 mL，硫酸4 mL，反应温度20 ℃，反应时间10 min。测得的葡萄糖标准曲线如图1所示。对本测定条件进行了加样回收率测定，如表4所示。实验测得的加样回收率为99.95%。

3.2 橄榄叶多糖含量的测定

橄榄叶多糖含量的测定结果见表5。根据计算结果和对照葡萄糖标标准曲线，测得油橄榄叶多糖含量为（12.064±0.265） mg/g。

4 结论

研究表明，采用苯酚-硫酸法測定油橄榄叶多糖含量最佳条件为苯酚0.8 mL，硫酸4 mL，反应温度20 ℃，反应时间10 min。加样回收率为99.95%。测得油橄榄叶多糖含量为12.064±0.265 mg/g。

参考文献：

[1] 郑媛媛，李 辰，封士兰，等. 油橄榄叶中总黄酮含量测定方法探讨[J]. 光谱学与光谱分析，2011（2）：547-550.

[2] 祁菲菲. 油橄榄叶食用历史和保健功能研究进展综述[G]//中国营养学会. 中国营养学会第十一次全国营养科学大会暨国际DRIs研讨会学术报告及论文摘要汇编（下册）-DRIs新进展：循证营养科学与实践学术. 北京：中国营养学会，2013.

[3] 叶建中，王成章，陈虹霞，等. 油橄榄叶中羟基酪醇的含量变化规律研究[J]. 林产化学与工业，2011（2）：69-74.

[4] 李陈燊. 橄榄多糖提取分离及其功能特性的研究[D]. 福州：福建农林大学，2014.

[5] 中华人民共和国国家质量监督检验检疫总局. SN/T 4260-2015，出口植物源食品中粗多糖的测定 苯酚-硫酸法[S]. 北京：中国标准出版社，2016.

（本文责编：杨 杰）