艾粉质量标准初步研究

王凯 胡璇 庞玉新

摘要 [目的]初步研究不同批次的艾纳香提取物艾粉质量标准。[方法]取来自贵州不同地区49批艾粉（艾纳香提取物）为研究材料，对其外观形状进行观察描述，测定其溶解性、含水量等物理特性，采用薄层层析法（TLC）进行定性分析以及GC指纹图谱进行相似度评价。[结果]艾粉为白色、块状、盐粒状或颗粒状结晶，手捻不易碎，具清香气，味辛、凉，具挥发性，几乎不溶于水，易溶于乙醇、乙醚、氯仿，艾粉含水量不高于24%为宜。艾粉样品中l-龙脑TCL斑点清晰，β-石竹烯、花椒油素显相同颜色的斑点或没有斑点，分离良好。GC指纹图谱仅得到2个共有峰，确认为有效成分l-龙脑和樟脑，相似度基本都在0.9以上。[结论]该研究结果为艾粉在生产过程中的质量控制提供参考依据，同时进一步促进高质量天然冰片的生产。

关键词 艾粉；薄层色谱；GC指纹图谱；质量控制

中图分类号 R284 文献标识码 A 文章编号 0517-6611（2017）25-0128-03

Abstract [Objective]To make a preliminary development of quality standard for Aifen [the extract powder of Blumea Balsamifera （L.） DC.]. [Method]Fortynine batches of Aifen collected from different regions in Guizhou were used as research materials for this study. The appearance traits was observed and described， the solubility and water content were determined. TCL was used for qualitative analysis and similarity evaluation was obtained by GC fingerprint. [Result]Aifen was white， blocky， salt granular and granulate. It was unbreakable by hand twist. Aifen was volatile with fragrant smell and tasted sheen and cool. It was almost insoluble in water， but easily dissolved in trichloromethane， ethanol， diethyl ether. Its water content should be no more than 24%. TLC spots of lborneol were clear in those Aifen samples. βcaryophyllene and xanthoxylin appeared the same color spots or no spots. The three components all separated well. Only two common peaks were collected in the fingerprint and confirmed to be lborneol and camphor. The similarities between the entire chromatographic profiles of Aifen samples were basically all all over 0.90. [Conclusion]This study will provide reference and basis for the quality control of Aifen in the production process. Meanwhile， it will further promote the production of highquality natural borneol.

Key words Aifen；Thinlayer chromatography （TCL）；GC fingerprint；Quality control

艾納香为菊科植物艾纳香[Blumea Balsamifera（L.）DC.]的新鲜或干燥地上部分，是黎、苗族等少数民族重要的民族药，俗称娜龙（黎药名）、大风艾、大叶艾，具有祛风除湿、消肿散瘀、活血解毒等功效[1-2]。艾粉是艾纳香的叶和枝经水蒸气蒸馏提炼出来的粗加工品，作为原料前体物可进一步加工得到艾片[3]。艾片作为天然冰片的来源之一，被广泛应用于咽立爽、八宝惊风散、金骨莲胶囊、心胃止痛胶囊等中成药中[4]，其开窍醒神、清热止痛的功效已经得到广大消费者的认可。随着人们生活水平的提高，返璞归真的意识与日俱增，以天然冰片为原料的药品、日化用品越来越受到青睐[5]。

艾片的质量直接取决于艾粉的质量，艾粉的主要成分是l-龙脑，目前还缺少关于艾粉质量控制的相关研究报道，大多数文献都是对艾纳香以及其终产物艾片进行研究[6-7]。笔者取来自贵州不同地区49批艾粉（艾纳香提取物）为研究材料，对其外观形状进行观察，物理性状进行测定，并对其有效成分进行定性分析，对艾粉质量标准进行初步研究，为艾粉在生产应用中的质量控制提供参考依据。

1 材料与方法

1.1 材料

1.1.1 样品。艾粉主产区为贵州，该研究的艾粉样品均为贵州不同产地收集（2013、2014年秋季收集），均保存于低温干燥中。经中国热带农业科学院庞玉新研究员鉴定为菊科植物艾纳香[Blumea balsamifera （L.）DC.]经水蒸气蒸馏提取而得的初提物艾粉。

1.1.2 仪器。电子天平（Sartorius公司）；Agilent 7890A气相色谱仪（配有氢火焰离子化检测器FID，载气高纯氮气，助燃气为空气，燃气为氢气），HP-5毛细管柱（30 m×0.32 mm，0.25 μm），OpenLAB CDS 工作站，G4513A自动进样器。

1.1.3 试剂。对照品樟脑（纯度≥98%，批号21506，购自Aladdin公司），l-龙脑（纯度≥98%，批号10147015，购自Alfa Aesar公司），β-石竹烯（纯度≥98%，批号111819-201001，购自中国食品药品检定研究院），花椒油素（纯度≥98%，批号D2683，购自TCI公司），乙酸乙酯为色谱纯（Fisher Scientific公司），其他试剂均为分析纯。

1.1.4 处理软件。指纹图谱数据处理软件为《中药色谱指纹图谱相似度评价系统》（2004 A版）。

1.2 方法

1.2.1 理化性质。

1.2.1.1 溶解性测定方法。參照《中国药典》[8]2015版一部凡例中“性状”项下对溶解度的测定法。

1.2.1.2

水分测定。参照《中国药典》[8]2015版四部通则水分测定第四法。

1.2.2 TCL鉴别。

1.2.2.1

对照品溶液的制备。取对照品l-龙脑、β-石竹烯、花椒油素适量，分别加乙醇制成3、2、1 mg/mL的溶液，作为对照品溶液。

1.2.2.2

供试品溶液的制备。取艾粉样品10.0 mg，加乙醇2 mL使溶解，作为供试品溶液。

1.2.2.3 不同溶剂展开。参照《中国药典》[8]2015版药典薄层色谱法，吸取上述对照品和供试品溶液各5 μL，分别点于同一硅胶G薄层板上，分别以不同展开剂系统进行展开，取出，晾干，喷以1%香草醛硫酸溶液，在105 ℃加热至斑点显色清晰。

1.2.3 指纹图谱研究。

1.2.3.1

供试品溶液的制备。取同一艾粉样品0.1 g，精密称定，置25 mL容量瓶中，加乙酸乙酯至刻度，摇匀，然后精密量取1 mL置10 mL容量瓶中，加乙酸乙酯稀释至刻度，摇匀，0.45 μm微孔滤膜滤过，即得。

1.2.3.2

参照物溶液的制备。分别精密称取对照品樟脑、l-龙脑对照品适量，加乙酸乙酯溶解并定容，制成质量浓度分别为0.43、10.05 mg/mL的混合液，作为混合对照品储备液。

1.2.3.3

色谱条件。色谱柱为HP-5毛细管柱（30 m×0.32 mm，0.25 μm），程序升温（30 ℃，保持5 min，以10 ℃/min程序升温至50 ℃，以2 ℃/min升温至100 ℃，再以4 ℃/min升温至160 ℃，保持13 min。），载气为高纯氮气，流量6.5 mL/min；不分流，FID检测器，检测器温度260 ℃，进样口温度220 ℃。按l-龙脑计算理论塔板数及分离度。结果发现，理论塔板数不低于50 000，分离度>4，符合指纹图谱的相关要求[9]。该色谱条件作为GC条件。

2 结果与分析

2.1 理化性质

2.1.1 性状鉴别。各批次艾粉为白色、块状、盐粒状或颗粒状结晶，手捻不易碎，具清香气，味辛、凉，具挥发性。

2.1.2 溶解性测定。从表1可以看出，艾粉易溶于乙醚、乙醇、氯仿，几乎不溶于水。

2.1.3 水分测定。由图1可知，15、16、19、23、31、33、36、44、48批样品与大多数样品含水量差异较大，但80%的艾粉样品含水量不高于24%。通过对各批次样品的测定，建议艾粉在质量控制的过程中含水量不高于24%为宜。

2.2 TCL鉴别

不同溶剂展开系统试验结果见表2，试验结果表明选择石油醚-乙酸乙酯（9∶1）作为展开系统较为适宜。供试品色谱中，以0.5%香草醛的10%硫酸乙醇溶液为显色剂，在与对照品色谱相应的位置上，l-龙脑显相同颜色的斑点，β-石竹烯、花椒油素显相同颜色的斑点或没有斑点（图2）。

2.3 指纹图谱研究

2.3.1 检测方法的检验。

2.3.1.1 精密度试验。按“1.2.3.3”色谱条件，取同一供试品溶液连续进样6次，测定，记录其色谱图。考察色谱峰的相对保留时间和峰面积比值的一致性。试验结果表明，各色谱峰的相对保留时间和相对峰面积比值的RSD值均小于3%，表明进样的精密度良好。

2.3.1.2 稳定性试验。按“1.2.3.3”色谱条件，取同一供试品溶液分别在0、2、4、8、12、24 h进样，考察色谱峰的相对保留时间和峰面积比值的一致性[9]。试验结果表明，各色谱峰的相对保留时间和相对峰面积比值的RSD值均小于3%，表明供试品溶液在24 h内稳定。

2.3.1.3 重复性试验。按“1.2.3.3”色谱条件，取同一批号的供试品6份，分别进行测定。考察色谱峰的相对保留时间和峰面积比值的一致性。试验结果表明，各色谱峰的相对保留时间和相对峰面积比值的RSD值均小于3%，表明该方法重复性良好。

2.3.2 指纹图谱及技术参数。

2.3.2.1 指纹图谱采集及共有峰的标定。将49批艾粉样品按“1.2.3.1”方法进行制备得到进样样品，依法测定记录色谱图得到49批艾粉GC指纹图谱，将其全部导入《中药指纹图谱相似度评价系统》（2004 A版），生成对照指纹图谱（图3a），共标定反映艾粉内在质量的2个共有色谱峰。通过标准品保留时间的定性得知，1号色谱峰为樟脑（16.778 min），2号色谱峰为l-龙脑（18.082 min），保留时间均稳定（图3b）。结合不同批次艾粉GC色谱峰状况，发现2号峰l-龙脑峰型对称、响应值高并且为艾粉中主要药效指标成分，故选择其为内标参照峰，计算樟脑的相对保留时间和相对峰面积[10]。

2.3.2.2 特征指纹图谱的建立及相似度评价。

根据所建立的GC指纹图谱方法，连续得到49批艾粉的指纹图谱，建立了艾粉指纹图谱叠加模式色谱图（图4），将各色谱图与特征指纹图谱（图3a）相比较，采用相似系数进行了相似度判别，结果发现（表3），49批艾粉样品中有48批的指纹图谱相似度均在0.9以上，表明48份不同批次艾粉的化学成分相似。

3 结论与讨论

该研究采用6种不同展开溶剂分别针对艾粉中的l-龙脑、β-石竹烯和花椒油素进行了薄层色谱鉴别，发现采用石油醚-乙酸乙酯（9∶1）作为展开系统虽然底色干扰较为严重，但是各斑点分开较好，Rf值较适宜。在与对照品色谱相应的位置上，l-龙脑显相同颜色的斑点，β-石竹烯、花椒油素显相同颜色的斑点或没有斑点，说明在艾粉不同批次的样品中，l-龙脑为共有成分，β-石竹烯、花椒油素并不是所有艾粉样品都含有的成分。

在艾粉指纹图谱建立的过程中，比较不同程序升温方法，以30 ℃保持5 min，然后以10 ℃/min程序升温至50 ℃，以2 ℃/min升温至100 ℃，以4 ℃/min升温至160 ℃，保持13 min，可检测到17个色谱峰，60 min中内出峰完全，且色谱基线平稳，各色谱峰分离达到最佳效果，故确定该方法为最佳程序升温法。试验过程中比较了不同柱流速色谱图，当采用不同柱流速时，分离效果无明显差异，说明柱流速对样品的分离影响较小，该试验选择了系统默认的柱流速（6.5 mL/min）。

目前相关报道均是对不同产地艾纳香药材以及其提取物艾纳香油进行指纹图谱研究[11-12]，艾粉作为其主要提取物，药材本身的质量、提取工艺以及储藏方法都会对其质量产生影响。该试验首次对49批艾粉样品的指纹图谱进行研究，样品量较大，具有较好的代表性。但49批样品仅得到2个共有峰，这可能与艾粉的提取工艺和大样本量有关，不同批次含有的有效成分不同，TCL结果表明有的批次含有花椒油素，有的批次含有β-石竹烯。利用《中药色谱指纹图谱相似度评价系统》（2004 A版）对艾粉指纹图谱的相似度进行研究，结果表明49批艾粉样品中有48批的指纹图谱相似度均在0.9以上。试验结果表明该方法建立的艾粉指纹图谱特征性强，可结合薄层鉴别条件对艾粉质量进行初步研究，为艾粉在生产过程中的质量控制提供参考依据，同时也为生产质量稳定的艾片提供可靠的保证。

参考文献

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