基于综合评分法的不同产地加工方法对瓜蒌药材质量的影响

冯果 曾志乾 吴增光 刘文 李玮 何新 郑传奇 陈荧荧 魏芯平　周云飞

摘要 [目的]优选黔产瓜蒌的最佳产地加工方法。[方法]分别采用阴干、晒干、烘干等不同加工方法对新鲜瓜蒌药材进行加工处理，以多糖、皂苷、水溶性浸出物、醇溶性浸出物为评价指标，采用综合评分法优选瓜蒌的最佳产地加工方法。[结果]瓜蒌不同产地加工方法的综合评分值差异较大，从大到小依次为60 ℃烘干（0.88）、晒干（0.23）、阴干（0）。[结论]60 ℃烘干为瓜蒌的最佳产地加工方法，最佳工艺为：取瓜蒌鲜药材，除去杂质泥土，于60 ℃干燥箱中烘干。该方法能较好地控制瓜蒌药材的质量。

关键词 瓜蒌；产地加工方法；药材质量；综合评分法

中图分类号 S282.71 文献标识码

A 文章编号 0517-6611（2017）29-0120-04

Influences of Different Habitat Processing Method on Quality of Trichosanthes rosthornii Harms by Comprehensive Scoring Method

FENG Guo1，ZENG Zhiqian2，WU Zengguang3 et al

（1.Guiyang College of Traditional Chinese Medicine，Guiyang，Guizhou 550025； 2.Hospital of Daqian Town of Daozhen Autonomous County，Zunyi，Guizhou 563500； 3.Tianjin University of Traditional Chinese Medicine，Tianjin 300193）

Abstract [Objective] The research aimed to optimize the best habitat processing method of Trichosanthes rosthornii Harms.[Method]The fresh Trichosanthes rosthornii Harms was processed respectively in different processing methods such as shady drying，sun drying，oven drying，in polysaccharide，saponin，water soluble extractives，ethanol soluble extract as the evaluation index，the best habitat processing method of Trichosanthes rosthornii Harms was optimized by the comprehensive scoring method.[Result]The different habitat processing method lead to different values of its comprehensive score for Trichosanthes rosthornii Harms，60 ℃ oven drying（0.88）>sun drying（0.23）>shady drying（0）.[Conclusion]60 ℃ oven drying is the best habitat processing method of Trichosanthes rosthornii Harms.The optimum process is as follows：take fresh Trichosanthes rosthornii Harms，removing the contaminated soil，drying in the oven at 60 ℃.This method can better control the quality of Trichosanthes rosthornii Harms.

Key words Trichosanthes rosthornii Harms；Habitat processing method；Material quality；Comprehensive scoring method

基金項目

貴州省中药现代化科技产业研究开发专项（黔科合中药字〔2013〕5049号）；贵州省教育厅产学研基地（黔教合KY字〔2013〕123号）；国家中医药管理局中医药部门公共卫生服务项目（〔2015〕136）；贵州省高校工程技术研究中心建设项目（黔教合KY字〔2012〕021号）。

作者简介 冯果（1977—），男，贵州沿河人，副教授，博士，从事中药新制剂新技术及中药药物代谢动力学研究。

收稿日期 2017-08-11

瓜蒌为葫芦科植物栝楼（Trichosanthes kirilowii Maxim.）或双边栝楼（Trichosanthes rosthornii Harms）的干燥成熟果实，具有清热涤痰、宽胸散结、润燥滑肠的功效，用于肺热咳嗽、痰浊黄稠、胸痹心痛、结胸痞满、乳痈、肺痈、肠痈、大便秘结热[1]。现代研究表明，瓜蒌主要含糖类、皂苷等有效成分[2-6]，具有改善心血管系统功能、祛痰止咳、抗菌、抗溃疡、抗肿瘤、泻下及提高耐缺氧能力、降低血清胆固醇等药理活性[7-11]。产地加工是形成中药品质的重要环节，不同的加工方法对瓜蒌中主要化学成分的影响不同。现代2015年版《中国药典》一部收载瓜蒌的加工方法为“秋季果实成熟时，连果梗剪下，置通风处阴干。[1]”各地尚有阴干法、晒干法、烘干法等加工方法，因其产地加工方法缺乏统一标准操作指南，方法各异，存在一定的盲目性和随意性，严重影响了瓜蒌饮片的质量，瓜蒌的产地加工方法亟待进一步的优化和统一。经文献研究，有关瓜蒌产地加工方法的研究较少且鲜见报道。笔者以瓜蒌药材中的瓜蒌多糖、皂苷的含量以及水溶性浸出物和醇溶性浸出物作为评价指标，采用综合评分法研究不同产地加工方法对黔产瓜蒌质量的影响，优选出瓜蒌的最佳产地加工方法，为瓜蒌的产地加工及质量控制提供参考。

1 材料与方法

1.1 仪器 TU-1810PC型紫外可见分光光度计（北京普析通用仪器有限责任公司）、AE/240型电子天平（上海梅特勒仪器有限公司）、AVY 220型电子天平（日本岛津）、SK 8210 HP型超声波清洗机（上海科导仪器有限公司）、干燥箱（上海市仪器总厂）。

1.2 药材与试药 瓜蒌鲜药材来源于贵州省息烽县鹿窝乡种植基地，经贵阳中医学院鉴定教研室魏升华教授鉴定为双边栝楼（Trichosanthes rosthornii Harms）的果实。D-无水葡萄糖（中国食品药品检定研究院，批号110833-201205，≥98.0%）；齐墩果酸（北京盛世康普化工技术研究院，批号141127，纯度≥98%）；其余试剂为分析纯，水为蒸馏水。

1.3 试验方法

1.3.1 产地加工方法。

1.3.1.1 阴干法。取新鲜全瓜蒌，将果柄编结成串，瓜蒂向上置阴凉通风处阴干。

1.3.1.2 曬干法。取新鲜全瓜蒌，置太阳光下晒干。

1.3.1.3 烘干法。取新鲜全瓜蒌，分别于40、50、60、80、90 ℃的烘箱内干燥。

1.3.2 样品制备方法

1.3.2.1 瓜蒌皂苷提取。取瓜蒌粉末1.0 g，精密称定，置具塞锥形瓶中，加入10倍量水饱和正丁醇后，浸泡12 h，50 ℃下超声提取40 min，过滤至25 mL容量瓶中，加水饱和正丁醇溶解并稀释至刻度，摇匀，即得供试品溶液。

1.3.2.2 瓜蔞多糖提取。取瓜蒌粉末1.0 g，精密称定，置具塞锥形瓶中，加入25 mL蒸馏水，80 ℃超声提取3次，过滤，合并滤液浓缩至10 mL，缓慢加入4倍量的无水乙醇，析出絮状沉淀，4 ℃静置过夜，抽滤，沉淀依次用无水乙醇、丙酮、乙醚洗涤3次，于40 ℃真空干燥至恒重，得瓜蒌粗多糖粉末，精密称取，用水溶解定容，即得供试品溶液。

1.3.3 对照品制备方法。

1.3.3.1 瓜蒌皂苷对照品溶液的制备。精密称取齐墩果酸对照品5.48 mg于25 mL量瓶中，加甲醇溶解并稀释到刻度，摇匀，即得0.219 2 mg/mL 齐墩果酸对照品溶液。

1.3.3.2 瓜蒌多糖对照品溶液的制备。精密称取葡萄糖11.14 mg，置10 mL容量瓶中，用水定容至刻线，再精密吸取1 mL，置10 mL量瓶中，得浓度为0.111 4 mg/mL的葡萄糖标准溶液。

1.3.4 指标成分含量测定方法。

1.3.4.1 瓜蒌皂苷的样品测定。精密吸取皂苷提取液0.5 mL，80 ℃下挥干溶剂，加入5%香草醛-冰醋酸溶液0.2 mL、高氯酸0.8 mL，在60 ℃水浴中加热15 min，立即置冷水中冷却，加入冰醋酸5.0 mL摇匀，放置15 min，于545 nm处测定吸光度。

1.3.4.2 瓜蒌多糖的样品测定。精密吸取多糖提取液0.5 mL，加蒸馏水至1.0 mL，加入1 mL的5%苯酚溶液，摇匀，再加浓硫酸5 mL，摇匀后置沸水浴10 min，冰水浴冷却至室温，取出，于487 nm处测定吸光度。

1.3.5 浸出物含量测定方法。

1.3.5.1 水溶性浸出物测定。按2015年版《中国药典》第四部附录2201水溶性浸出物测定方法（热浸法）对样品进行测定，计算水溶性浸出物的量。

1.3.5.2 醇溶性浸出物测定。按2015年版《中国药典》第四部附录2201醇溶性浸出物测定方法（热浸法）对样品进行测定，计算醇溶性浸出物的量。

1.3.6 产地加工方法的优选。采用多指标综合评分法[12]优选瓜蒌的产地加工方法，以皂苷、多糖的含量以及水溶性浸出物和醇溶性浸出物为评价指标，含量都是越高越好。因此在数据处理时引用综合指标“隶属度”，即指标隶属度=（指标值-指标最小值） / （指标最大值-指标最小值）；根据各成分在瓜蒌中的重要性，考虑到皂苷和多糖各占40%、水溶性浸出物和醇溶性浸出物各占10%的权重。综合分数=多糖隶属度×40%+皂苷隶属度×40%+水溶性浸出物隶属度×10%+醇溶性浸出物隶属度×10%，满分为1.00，计算各样品的综合评分值。

2 结果与分析

2.1 方法学考察

2.1.1 线性关系考察。精密吸取齐墩果酸对照品溶液0.1、0.3、0.5、0.7、0.8、1.0 mL，80 ℃下挥干溶剂，加入5%香草醛-冰醋酸溶液0.2 mL、高氯酸0.8 mL，在60 ℃水浴中加热15 min，立即置冷水中冷却，加入冰醋酸5.0 mL摇匀，放置15 min，以试剂为空白对照，于545 nm处测定吸光度，以齐墩果酸浓度（mg/mL）为横坐标、吸光度（A）为纵坐标绘制标准曲线；另外，精密吸取葡萄糖对照品溶液0.1、0.2、0.3、0.4、0.5、0.6、0.7 mL，分别置于10 mL的刻度试管中，分别加入蒸馏水至1.0 mL，加入1 mL的5%苯酚溶液，摇匀，再加浓硫酸5 mL，摇匀后置沸水浴10 min，置于冰水浴冷却至室温，取出，以相应的试剂为空白对照，于487 nm处测定吸光度，以葡萄糖浓度（mg/mL）为横坐标、吸光度（A）为纵坐标绘制标准曲线。结果发现，瓜蒌皂苷和瓜蒌多糖标准曲线回归方程的相关系数（r）均大于0.999，其标准曲线的回归方程、r和线性范围分别见表1。

2.1.2 精密度试验。精密吸取 “1.3.2”项下供试品溶液，按照“1.3.4” 项下的条件进行测定。结果发现（表1），其RSD均小于3.0%，表明试验的精密度良好。

2.1.3 重复性试验。取同一处理方法的样品粉末6份，按照 “1.3.2”方法制备供试品溶液，按照“1.3.4” 项下的条件进行测定。结果发现（表1），其RSD均小于3.0%，表明试验的重复性良好。

安徽农业科学 2017年

2.1.4 稳定性试验。精密吸取 “1.3.2”项下同一供试品溶液，按照“1.3.4” 项下的条件，分别测定样品在0、10、20、30、40、60 min的吸光度。结果发现（表1），其RSD均小于30%，表明各样品在60 min内均稳定。

2.1.5 加样回收率试验。称取已知含量的样品6份，精密称定，分别精密加入对照品溶液，按照 “1.3.2”方法制备供试品溶液，按照“1.3.4” 项下的条件进行测定。结果发现（表1），瓜蒌皂苷和瓜蒌多糖回收率试验的平均回收率分别为99.67%、9947%，RSD均小于3.0%，表明各样品的回收率较好。

2.2 瓜蒌皂苷含量测定 按照 “1.3.1”方法制备不同产地加工方法的样品，按照“1.3.2.1”方法提取瓜蒌皂苷样品溶液、“1.3.4.1” 方法测定不同产地加工方法瓜蒌中皂苷的含量，研究不同产地加工方法对其含量的影响。从表2可看出，不同产地加工方法的瓜蒌样品中皂苷含量从大到小依次为50 ℃烘干、60 ℃烘干、80 ℃烘干、40 ℃烘干、90 ℃烘干、晒干、阴干。

2.3 瓜蒌多糖含量测定 按照 “1.3.1”方法制备不同产地加工方法的样品，按照“1.3.2.2”方法提取瓜蒌多糖样品溶液，“1.3.4.2” 方法测定不同产地加工方法瓜蒌中多糖的含量，研究不同产地加工方法对其含量的影响。从表2可看出，不同产地加工方法的瓜蒌样品中多糖含量从大到小依次为60 ℃烘干、80 ℃烘干、50 ℃烘干、90 ℃烘干、40 ℃烘干、晒干、阴干。

2.4 瓜蒌浸出物含量测定 按照 “1.3.1”方法制备不同产地加工方法的样品，按照“1.3.5.1”方法提取、测定各样品的水溶性浸出物含量，按照“1.3.5.2” 方法提取、测定不同产地加工方法瓜蒌中醇溶性浸出物的含量，研究不同產地加工方法对其浸出物含量的影响。从表2可看出，不同产地加工方法的瓜蒌样品水溶性浸出物和醇溶性浸出物含量的大小顺序一致，从大到小依次均为40 ℃烘干、50 ℃烘干、60 ℃烘干、80 ℃烘干、晒干、90 ℃烘干、阴干。

2.5 综合评分法优选最佳产地加工方法

按 “1.3.4”“1.3.5” 项下各评价指标的测定方法对各样品的指标成分进行测定，并按 “1.3.6” 方法计算其综合评分值，结果见表3。从表3可得出，以多糖、皂苷、浸出物综合评价时，阴干法的综合评分值为0；晒干法的综合评分值为0.23；在烘干法中，综合评分值从大到小依次为60 ℃（0.88）、50 ℃（0.81）、80 ℃（0.71）、40 ℃（0.51）、90 ℃（0.37）；不同的产地加工方法对瓜蒌的指标成分影响较大，以综合评分值从大到小的顺序排序为烘干（0.88）、晒干（0.23）、阴干（0）。研究结果表明，对瓜蒌采用60 ℃干燥时，其综合评分值最高（0.88），故瓜蒌的最佳产地加工方法为60 ℃烘干，最佳工艺为：取瓜蒌鲜药材，除去杂质泥土，于60 ℃烘箱中烘干。

3 结论与讨论

瓜蒌中皂苷类成分容易受生物活性酶的影响；多糖类成分难溶或不溶于水，但容易被水解成低聚糖、单糖。以多糖为指标，最佳产地加工方法为60 ℃烘干含量最高，不同加工方法中含量从大到小依次为60 ℃烘干、80 ℃烘干、50 ℃烘干、90 ℃烘干、40 ℃烘干、晒干、阴干；以皂苷为指标时，最佳产地加工方法为50 ℃烘干含量最高，不同加工方法中含量从大到小依次为50 ℃烘干、60 ℃烘干、80 ℃烘干、40 ℃烘干、90 ℃烘干、晒干、阴干；以浸出物为指标，最佳的产地加工方法为40 ℃烘干含量最高，不同加工方法中含量从大到小依次为40 ℃烘干、50 ℃烘干、60 ℃烘干、80 ℃烘干、曬干、90 ℃烘干、阴干。结果表明，不同产地加工方法对瓜蒌中的含量有很大的影响，从而会影响瓜蒌药材质量的稳定性，进一步影响其临床疗效及其品质。故在产地加工过程中，应尽快灭活新鲜瓜蒌中酶的活性，严格控制干燥温度和时间是瓜蒌产地加工的关键技术所在，也是影响瓜蒌质量的主要因素。

2015年版《中国药典》收载的瓜蒌加工方法为“秋季果实成熟时，连果梗剪下，置通风处阴干”，经对比研究表明，阴干法所得瓜蒌产品中多糖、皂苷以及浸出物的含量并非最高，且在《中国药典》瓜蒌的质量标准中仅有鉴别、检查和浸出物的质量控制方法，目前还没有含量测定项。而多成分、多指标控制中药材质量已成为发展新趋势，是中药现代化发展进程中的必然要求。该研究以瓜蒌中多糖、皂苷、水溶性浸出物和醇溶性浸出物作为评价指标，采用综合评分法对瓜蒌的产地加工方法进行优选，得到瓜蒌的最佳产地加工方法为60 ℃烘干法。所优选出的产地加工方法科学、合理，其加工方法的工艺简单、耗时短、加工出的药材色泽和品质好，综合评分值较高，使瓜蒌的质量从源头上得到了控制。该产地加工方法的优选对企业及药农的规模化、产业化加工瓜蒌药材具有一定的指导意义，为瓜蒌的质量标准的修定及质量控制的提高提供了参考。

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