原发性干燥综合征患者体内维生素D3水平与其免疫功能的相关性研究

陈嘉利+吕宇基+黎品健+梁杏+区勇坚+莫昆明

【摘要】目的 探讨原发性干燥综合征（pSS）患者体内维生素D3水平与其免疫功能的相关性。方法 36例pSS患者（pSS组）依据SS疾病活动度评分系统（SSDAI）积分对患者进行筛查， 活动期（SSDAI积分≥5分）与稳定期（SSDAI积分<5分）各18例， 38例健康体检者作为对照组， 分别采集外周血， 将单个核细胞实施分离， 另对CD27+记忆性B细胞及CD27high浆细胞所占比重进行检测；采集血清且对白细胞介素-17（IL-17）、白细胞介素-10（IL-10）、白细胞介素-6（IL-6）、肿瘤坏死因子-α（TNF-α）及1， 25-二羟基维生素D3[1， 25（OH）2D3]的含量进行检测。结果 pSS组血清中1， 25（OH）2D3含量低于对照组， 差异有统计学意义（P<0.05）；pSS活动期患者血清中1， 25（OH）2D3含量低于稳定期患者， 差异有统计学意义（P<0.05）。pSS组血清当中CD27+记忆性B细胞含量及外周血CD27high浆细胞含量低于对照组， 差异有统计学意义（t=2.11、15.14， P<0.05）。pSS组血清中TNF-α、IL-17及IL-6含量高于对照组， IL-10含量低于对照组， 差异有统计学意义（t=20.40、13.36、14.57、15.21， P<0.05）。pSS活動期患者血清当中的CD27+记忆性B细胞含量及外周血CD27high浆细胞含量均低于稳定期患者， 差异有统计学意义（P<0.05）。活动期患者血清中TNF-α、IL-17及IL-6含量均高于稳定期患者， IL-10含量低于稳定期患者， 差异有统计学意义（P<0.05）。CD27+记忆性B细胞、IL-10、CD27high细胞含量与1， 25（OH）2D3含量呈现明显正相关（P<0.05）；1， 25（OH）2D3含量与TNF-α、IL-17及IL-6呈现显著负相关。结论 维生素D3水平异常降低， 不仅相关于pSS发病， 而且与免疫功能之间存在紧密关联。

【关键词】 原发性干燥综合征；维生素D3；免疫功能

维生素D3作为一种具有脂溶性的维生素， 利用体内代谢作用可形成1， 25（OH）2D3， 此物质带有明显生物学活性， 除了能够参与到钙磷代谢调节之外， 在调节免疫功能方面同样有所参与[1-3]。本文分析了pSS患者体内维生素D3水平， 另对其与免疫功能之间所存在的相关性开展深入研究。现报告如下。

1 资料与方法

1. 1 一般资料 选取2014年6月～2016年6月在本院治疗的36例pSS患者为pSS组， 选取患者均与pSS相关诊断标准相符， 排除结核病、艾滋病、病毒性肝炎等传染病史， 另将抗乙酞胆碱使用史、头面部接受过放疗及肝肾肺功能不全者予以排除[4]。pSS组患者依据SSDAI积分对患者进行筛查， 活动期（SSDAI积分≥5分）与稳定期（SSDAI积分<5分）各18例， 另选取同期38例来院健康体检者作为对照组。两组一般资料比较， 差异无统计学意义（P>0.05）， 具有可比性。见表1。

1. 2 方法 本研究选用Amresco公司产的淋巴细胞分离液；另选取Sigma公司生产的CD27、CD19抗体；TSZ公司生产的酶联免疫吸附试剂盒；选用Thermo公司生产的流式细胞仪。于清晨空腹下， 对三组的外周静脉血进行采集， 抗凝血操作， 将淋巴细胞分离液加入， 且实施离心操作， 获取单个核细胞。运用聚丁二酸丁二醇酯（PBS）对外周血单个核细胞（PBMC）实施重悬后， 将其分类后分别装在提前准备好的流式细胞管中， 于4℃下加入各种有荧光标记的抗体， 然后于避光环境中实施孵育， 时间控制在30 min， PBS洗涤， 并实施离心操作（2遍）， 最后加入固定液200 μl， 混匀后运用流式细胞仪检测CD27+记忆性B细胞比重， 另对CD27high曲浆细胞所占比重进行检测。

1. 3 血清标本采集与指标检测 于空腹状态下， 先进行外周静脉血相应采集， 对其实施离心操作， 从中获取优质血清；检测时运用IL-17、IL-6、TNF-α及1， 25（OH）2D3酶联免疫吸附试剂盒， 就其在血清中的含量进行检测， 全部操作均依据试剂盒说明书完成。

1. 4 统计学方法 采用SPSS20.0统计学软件进行数据统计分析。计量资料以均数±标准差 （ x-±s）表示， 采用t检验；相关性检验采用Pearson相关性分析；计数资料以率（%）表示， 采用χ2检验。P<0.05表示差异具有统计学意义。

2 结果

2. 1 血清1， 25（OH）2D3含量比较 pSS组血清中1， 25（OH）2D3含量低于对照组， 差异有统计学意义（P<0.05）；pSS活动期患者血清中1， 25（OH）2D3含量低于稳定期患者， 差异有统计学意义（P<0.05）。见图1， 图2。

2. 2 两组免疫功能指标比较 pSS组血清当中CD27+记忆性B细胞含量及外周血CD27high浆细胞含量低于对照组， 差异有统计学意义（t=2.11、15.14， P<0.05）。pSS组血清中TNF-α、IL-17及IL-6含量高于对照组， IL-10含量低于对照组， 差异有统计学意义（t=20.40、13.36、14.57、15.21， P<0.05）。见表2。

2. 3 pSS组患者稳定期和活动期免疫功能指标比较 pSS活动期患者血清当中的CD27+记忆性B细胞含量及外周血CD27high浆细胞含量均低于稳定期患者， 差异有统计学意义（P<0.05）。活动期患者血清中TNF-α、IL-17及IL-6含量均高于稳定期患者， IL-10含量低于稳定期患者， 差异有统计学意义（P<0.05）。见表3。

2. 4 免疫功能指标与1， 25（OH）2D3相关性 CD27+记忆性B细胞、IL-10、CD27high细胞含量与1， 25（OH）2D3含量呈现明显正相关（r=3.76， P<0.05）；1， 25（OH）2D3含量与TNF-α、IL-17及IL-6呈现显著负相关（r=4.91， P<0.05）。

3 讨论

pSS作为一种能够累及到全身多系统的免疫性病症， 其中受累常见的靶器官为泪腺与唾液腺， 在腺体当中的单核巨噬细胞、B淋巴细胞及T淋巴细胞等各种免疫细胞浸润， 介导腺体功能出现免疫性损伤， 还伴发有眼干及口干等多种临床病症CD27high[5-7]。通过本次研究可知， CD27+记忆性B细胞、IL-10、细胞含量与1， 25（OH）2D3含量呈现明显正相关（P<0.05）， 1， 25（OH）2D3含量与TNF-α、IL-17及IL-6呈现显著负相关（P<0.05）。

于受累靶腺体内， 其中T淋巴细胞及B淋巴细胞浸润为诱发pSS的基础病理。对于B淋巴细胞， 其可形成免疫性抗体， 还能够介导靶腺体， 使其功能出现损伤状况， 对于CD27high浆细胞、CD27+记忆性B细胞， 其能够不断浸润、迁移至靶腺体， 使外周血中相应细胞的含量出现持续性降低。对于T淋巴细胞所具有的活化作用以及局部浸润， 可形成诸多细胞因子， 不仅能够造成靶腺体功能的损伤， 而且还会在机体相应炎症反应中有所参与。TNF-a、IL-6以及IL-17是一种具有促炎作用的细胞因子， 由免疫细胞合成与分泌而产生， IL-10其实质为一种细胞因子， 存在有对炎症反应的抑制作用。活化的T细胞浸润于靶腺体内， 会导致上述细胞因子的含量出现变化。通过对外周血中免疫细胞以及血清中细胞因子相应含量进行检测与分析得知：pSS组血清当中CD27+记忆性B细胞含量及外周血CD27high浆细胞含量低于对照组， 差异有统计学意义（t=2.11、15.14， P<0.05）。pSS组血清中TNF-α、IL-17及IL-6含量高于对照组， IL-10含量低于对照组， 差异有统计学意义（t=20.40、13.36、14.57、15.21， P<0.05）。pSS活动期患者血清当中的CD27+记忆性B细胞含量及外周血CD27high浆细胞含量均低于稳定期患者， 差异有统计学意义（P<0.05）。活动期患者血清中TNF-α、IL-17及IL-6含量均高于稳定期患者， IL-10含量低于稳定期患者， 差异有统计学意义（P<0.05）。

综上所述， 维生素D3水平异常降低， 不仅相关于pSS发病， 而且与免疫功能之间存在紧密关联。

参考文献

[1] 孙懿， 韩志君， 黄元兰， 等. 原发性干燥综合征患者外周血中IL-27水平降低及其意义. 现代免疫学， 2012（2）：126-130.

[2] 李鞠， 唐凤英， 王莲， 等. 原发性干燥综合征患者血清脂质水平的临床研究. 中华全科医学， 2016， 14（4）：524-526.

[3] 孔菲菲. 原发性干燥综合征患者血浆中维生素D3水平及与B细胞亚群的关系. 安徽医科大学， 2014.

[4] 孙文闻. 绝经后女性原发性干燥综合征性激素水平与白细胞介素-6的相关性研究. 天津医科大学， 2004.

[5] 刘冬梅， 崔华东， 薛红霞， 等. IL-6的测定及其与原发性干燥综合征的相关性研究. 中國医学工程， 2012（3）：37.

[6] 张东霞， 赵龙凤. 脂多糖白细胞介素-6肿瘤坏死因子-α在原发性干燥综合征患者血清中的分布及其相关性研究. 中国药物与临床， 2009， 9（9）：826-828.

[7] 刘莉琼. 一氧化碳中毒后迟发性脑病与血清和脑脊液中IL-4、IL-10、TGF-β1及IFN-γ相关性研究. 南昌大学医学院， 2013.

[收稿日期：2017-01-20]