Septin-9在子宫内膜癌组织中的表达及意义

司晓辉，孙攀兴

(焦作煤业集团有限责任公司中央医院妇产科，河南 焦作454000)

Septin-9在子宫内膜癌组织中的表达及意义

司晓辉，孙攀兴

(焦作煤业集团有限责任公司中央医院妇产科，河南 焦作454000)

目的 探讨Septin-9在子宫内膜癌组织中表达及及意义。方法 选取子宫内膜癌患者63例、子宫内膜不典型增生患者30例和正常子宫内膜组织42例作为对照组，利用实时荧光定量PCR技术检测不同组织中Septin-9基因表达，所有子宫内膜癌患者术后均获得随访，随访截止日期2015年4月30日，以子宫内膜癌组织中Septin-9 mRNA表达量的中位数为界值，将患者分为高表达组和低表达组，利用Kaplan-Meier生存分析法分析不同Septin-9表达水平对子宫内膜癌患者术后生存时间的影响。结果 子宫内膜癌组织中Septin-9 mRNA表达量高于子宫内膜不典型增生组织和对照组，且子宫内膜不典型增生组织高于对照组，差异均有统计学意义(F=29.673，P<0.05)；子宫内膜癌组织中Septin-9 mRNA表达量与组织学分级、FIGO分期和淋巴结转移有关(t值分别为17.921、5.211和6.042，P<0.05)；Kaplan-Meier生存分析显示，低表达组患者术后平均生存时间77.4个月，高表达组患者术后平均生存时间59.0个月，Log Rank检验显示两组患者术后生存时间差异有统计学意义(χ2=5.238，P=0.022)。结论 Septin-9在子宫内膜癌组织中呈高表达，可能在子宫内膜癌发生、进展过程中发挥重要作用，且与患者预后密切相关。

子宫内膜癌；Septin-9；实时定量PCR；预后

子宫内膜癌作为女性生殖系统常见的恶性肿瘤，占女性生殖道恶性肿瘤的25%～40%，近年来发病率呈上升趋势，且呈年轻化[1]，严重影响女性健康。目前，子宫内膜癌发病机制尚未研究清楚。胞裂蛋白(Septin)是广泛存在于真核生物中的进化上保守的细胞骨架GTP结合蛋白基因家族，Septin-9是其重要家族成员，参与调控细胞质分裂、细胞膜重构、细胞极化、囊泡运输等多种生物过程[2]。研究表明[3-4]，Septin-9与多种恶性肿瘤发生及进展过程有关，但有关Septin-9与子宫内膜癌发生的关系鲜有报道。本研究拟利用实时荧光定量PCR技术分析Septin-9在子宫内膜癌组织中表达，探讨其在子宫内膜癌发生、进展中的作用，以期为临床实践提供基础资料。

1资料与方法

1.1一般资料

选取2008年4月至2010年4月在焦作煤业集团有限责任公司中央医院择期行手术治疗的子宫内膜癌患者63例，年龄36～71岁，平均年龄(56.2±8.3)岁，所有患者均经术后病理学检查确诊，术前均未接受放化疗治疗；同期，选取在我院治疗的子宫内膜不典型增生患者30例，年龄37～73岁，平均年龄(56.9±8.8)岁，并留取在我院治疗的子宫肌瘤患者正常子宫内膜组织42例作为对照组，年龄33～69岁，平均年龄(55.7±8.0)岁，三组研究对象年龄无差异(P>0.05)，均衡可比。所有研究对象于术中留取组织并存放于液氮中以备检。本研究通过医院伦理委员会批准，均取得患者知情同意。

1.2方法

1.2.1主要试剂及器材

Trizol总RNA抽提试剂盒购自上海恪敏生物科技有限公司，逆转录和PCR试剂盒均购自美国Invitrogen公司，Septin-9和内参引物均由上海生工公司设计合成，紫外分光光度计购自上海谱元仪器有限公司，ABI 7300荧光定量PCR仪购自美国ABI公司。

1.2.2利用实时荧光定量PCR技术检测不同组织中Septin-9基因表达

取组织研磨后，加入细胞裂解液进行裂解，用Trizol总RNA抽提试剂盒对组织中总RNA进行提取，用紫外分光光度计对获得的总RNA纯度进行检测，取A260/A280≥1.80样本完成后续操作。用逆转录试剂盒将RNA逆转录为模板单链cDNA，以cDNA为模板用PCR仪进行PCR。Septin-9和内参引物分别为：Septin-9引物序列：上游：5′-CAGA￣GCGGCTTGGGTAAATCC-3′，下游：5′-CTCCTCA￣ATATCGT￣GCGTGATGG-3′；β-actin内参引物：上游：5′-GCTG￣TCACCTTCACCGTTC-3′，下游：5′-CCATC￣GTCC￣ACC￣GCAAAT-3′。PCR反应条件：94℃ 60s，92℃ 45s，56℃ 30s，74℃ 30s，连续进行38个循环。每个样品均设置3个平行反应复孔。用2-△△Ct法获得不同组织中Septin-9 mRNA表达量。

1.2.3子宫内膜癌患者术后随访

所有子宫内膜癌患者术后均获得随访，随访形式包括门诊和电话随访，随访截止日期2015年4月30日。

1.3统计学方法

2结果

2.1不同子宫内膜组织中Septin-9基因表达水平比较

子宫内膜癌组织中Septin-9 mRNA表达量高于子宫内膜不典型增生组织和对照组，且子宫内膜不典型增生组织高于对照组，差异均有统计学意义(P<0.05)，详见图1。

图1 Septin-9基因在不同子宫内膜组织中表达

Fig.1 Expressions of Septin-9 gene in different endometrial tissues

2.2子宫内膜癌组织中Septin-9 mRNA表达量与临床病理特征之间的关系

子宫内膜癌组织中Septin-9 mRNA表达量与年龄、组织学类型无关(P>0.05)，而与组织学分级、FIGO分期和淋巴结转移有关(P<0.05)，详见表1。

表1 子宫内膜癌组织中Septin-9 mRNA表达量与临床

病理特征之间的关系±S)Table 1 Relationship between the expressions of Septin-9 in endometrial carcinoma tissues and clinicopathological ±S)

2.3子宫内膜癌组织中Septin-9 mRNA表达量对患者预后的影响

63例子宫内膜癌患者术后均获得随访，随访中17例患者出现死亡。以子宫内膜癌组织中Septin-9 mRNA表达量的中位数为界值，将患者分为高表达组(n=31)和低表达组(n=32)，Kaplan-Meier生存分析显示，低表达组患者术后平均生存时间77.4个月，高表达组患者术后平均生存时间59.0个月，Log Rank检验显示两组患者术后生存时间比较差异有统计学意义(χ2=5.238，P=0.022)，见图2。

图2 子宫内膜癌组织中Septin-9 mRNA表达量对患者预后的影响

Fig.2 Effects of expressions of Septin-9 mRNA in endometrial carcinoma tissues on prognosis

3讨论

子宫内膜癌是常见的女性生殖系统恶性肿瘤，是卵巢癌、宫颈癌之后第三个女性癌症死亡原因，近年来，在我国发病率逐年升高，已成为第二位女性生殖系统常见恶性肿瘤[5]。目前，该病病因不明，发病机制尚未完全清楚。Septin-9定位于人染色体17q25.3，研究发现，siRNA干扰Septin-9蛋白表达可导致细胞分裂不完全[6]。同时，Septin-9表达异常可致细胞形态改变、细胞极性丢失，使细胞向肿瘤特性转变风险增加[7]。Septin-9在乳腺癌[8]、胃癌[9]、卵巢癌[10]等恶性肿瘤中均出现表达失调。本研究显示，子宫内膜癌组织中Septin-9 mRNA表达量高于子宫内膜不典型增生组织和对照组，且子宫内膜不典型增生组织高于对照组，说明Septin-9基因在子宫内膜癌组织中表达上调，且呈现从子宫内膜不典型增生到子宫内膜癌逐渐升高的趋势，提示Septin-9可能作为癌基因而参与子宫内膜癌发生过程。

本研究显示，子宫内膜癌组织中Septin-9 mRNA表达量与组织学分级、FIGO分期和淋巴结转移有关(P<0.05)，组织学分级越高、FIGO分期越高、发生淋巴结转移患者，子宫内膜癌组织中Septin-9 mRNA表达量越高，说明Septin-9基因可能参与了子宫内膜癌侵袭、转移及进展过程，有研究指出，Septin-9可通过HIF途径而参与肿瘤转移、耐药过程[11]。亦有研究指出，Septin-9可通过JNK途径和Rho信号通路而参与调控细胞增殖、分裂过程[12]。但具体到子宫内膜癌尚待进一步研究明确。为进一步分析子宫内膜癌组织中Septin-9 mRNA表达量对患者预后的影响，根据Septin-9 mRNA表达量将患者分为高表达组和低表达组，Kaplan-Meier生存分析显示，低表达组患者术后平均生存时间77.4个月，高表达组患者术后平均生存时间59.0个月，Log Rank检验显示两组患者术后生存时间差异有统计学意义(χ2=5.238，P=0.022)，说明子宫内膜癌组织中Septin-9 mRNA表达量可影响患者预后，高表达患者术后生存时间显著缩短，提示Septin-9有望成为判定患者预后的指标。

综上所述，Septin-9在子宫内膜癌组织中呈高表达，可能在子宫内膜癌发生、进展过程中发挥重要作用，且与患者预后密切相关，有望成为评估患者预后的指标。

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[专业责任编辑：张冠军]

Expression and significance of Septin-9 in endometrial carcinoma

SI Xiao-hui, SUN Pan-xing

(DepartmentofObstetricsandGynecology,CentralHospitalofJiaozuoCoal(Group)LimitedLiabilityCompany,HenanJiaozuo454000,China)

Objective To investigate the expression and clinical significance of Septin-9 in endometrial carcinoma. Methods Totally 63 cases of endometrial carcinoma, 30 cases of endometrial atypical hyperplasia and 42 cases of normal endometrial tissues in control group were selected. The expressions of Septin-9 in different tissues were detected by using real-time fluorescence quantitative PCR. All endometrial cancer patients after surgery were followed up. Follow-up deadline was April 30, 2015. The median value of the expression level of Septin-9 mRNA in endometrial carcinoma tissue was taken as the community value, and the patients were divided into high expression group and low expression group. The effects of different levels of expressions of Septin-9 in endometrial carcinoma tissues on the survival time after surgery were analyzed by using Kaplan-Meier survival analysis. Results The expression levels of Septin-9 mRNA in endometrial carcinoma tissues were higher than in atypical endometrial hyperplasia tissues and in the control group, and those in atypical endometrial hyperplasia tissues were higher than in the control group. The differences were statistically significant (F=29.673,P<0.05). The expression levels of Septin-9 mRNA in endometrial carcinoma tissues were correlated with histological grade, FIGO stage and lymph node metastasis (tvalue was 17.921, 5.211 and 6.042, respectively, allP<0.05). Kaplan-Meier survival analysis showed that the average survival time of patients in low expression group was 77.4 months and 59.0 months in high expression group. Log Rank test showed the difference in the survival time between two groups after surgery was statistically significant (χ2=5.238,P=0.022). Conclusion Septin-9 is highly expressed in endometrial carcinoma. It might play an important role in the occurrence and progression of endometrial carcinoma, and it is closely related to the prognosis of patients.

endometrial carcinoma; Septin-9; real-time quantitative PCR; prognosis

2016-07-18

吴阶平医学基金资助项目(课题编号320.6750.14109)

司晓辉(1985-) ，女，主治医师，硕士，主要从事妇科疾病的诊断与治疗。

王 青 ，副主任医师。

10.3969/j.issn.1673-5293.2017.02.014

R711.74

A

1673-5293(2017)02-0140-02