2389例血液标本培养的病原菌分离鉴定及耐药性的结果分析

高建萍，龙训琴，陈俊莉

(成都市西区医院 检验科，四川 成都610041)

2389例血液标本培养的病原菌分离鉴定及耐药性的结果分析

高建萍，龙训琴，陈俊莉

(成都市西区医院 检验科，四川 成都610041)

目的 分析2389例血液标本培养中病原菌分离鉴定以及病原菌耐药性的情况，为临床治疗感染性疾病制定诊疗方案及合理用药提供参考依据。方法 回顾性分析2014年6月至2016年5月本院用迪尔DL-Bt64(DL-Bt64)全自动血培养仪对2389例血液标本培养分离致病菌和用DL-96Ⅱ细菌测定系统进行细菌鉴定和药敏试验的结果。结果 分离出病原菌213株，培养阳性率为8.92%。其中G+菌109株占51.17%(109/213)，G-杆菌87株占40.85%(87/213)，真菌17株占7.98%(17/213)。G+菌中以凝固酶阴性葡萄球菌和金黄色葡萄球菌为主，检出率分别为24.88%和14.55%，其他菌株均小于5.00%。G-菌中以大肠埃希菌、肺炎克雷伯菌和铜绿假单胞菌为主，检出率分别为15.69%、9.86%和7.04%，其他菌株均小于3.00%。真菌以白色念珠菌为主，检出率为6.10%，其他菌株均小于2.00%。凝固酶阴性葡萄球菌对苯唑西林、青霉素G的耐药率在为90.0%以上，未发现万古霉素、利奈唑胺和替考拉宁对葡萄球菌的耐药。大肠埃希氏菌对复方新诺明、阿米卡星、头孢呋辛、左氧氟沙星，肺炎克雷伯菌对阿米卡星、哌拉西林、头孢噻肟、头孢呋辛以及铜绿假单胞菌对复方新诺明、阿米卡星、头孢曲松、头孢噻肟、左氧氟沙星的耐药率均在50.00%以上，白色念珠菌对益康唑和制菌霉素的耐药率均在68.00%以上。结论 血培养致病菌以G+菌为主，菌种多样化，细菌耐药情况较为严重。临床应加强血培养对致病菌鉴定，定期分析本区域致病菌耐药结果，对治疗感染性疾病时制定诊疗方案、避免抗菌药物的滥用、降低耐药菌株的产生等方面具有极其重要的应用价值。

血液培养；主要致病菌；耐药性；全自动血培养系统

(ChinJLabDiagn,2017,21:0597)

微生物检验结果是临床诊治感染性疾病的重要依据，明确病原菌，对临床进行针对性抗菌治疗至关重要。血液感染是临床各类疾病感染的途径之一，血液培养是直接对血液中微生物进行培养，可检出相应的病原体，已成为危重患者病情监测和血液微生物感染诊断的重要手段。随着广谱或超广谱抗菌药物的广泛应用、器官移植、各种介入检查治疗以及导管置留等手段的实施，致使临床耐药菌、条件致病菌、其他少见细菌以及院内交叉感染的发生率日益增加[1]。为了解本院血液培养病原菌的构成分布及其耐药性情况，笔者回顾性分析2014年6月至2016年5月间本院采用DL-Bt64全自动血培养仪对2389例血液标本培养分离致病菌和用DL-96Ⅱ细菌测定系统进行细菌鉴定和药敏试验的结果。旨在分析本院病原菌构成分布以及抗菌药物的敏感性，为临床治疗感染性疾病时制定诊疗方案、合理选择抗菌药物、降低耐药菌株的产生等方面提供的实验室依据。

1 资料与方法

1.1 基础资料 2389例血液培养标本为本院2014年6月至2016年5月间就诊需要进行血液培养的门诊、急诊和住院患者，临床主要表现为不明原因的发热、体温过低、严重的局部感染、怀疑有菌血症或脓毒症、呼吸频率加快等症状。其中男1554例，女835例，年龄1-60岁。血液培养标本均在使用抗生素之前时无菌采集，对同一患者连续2次分离出同一菌株只统计第一次资料。

1.2 主要仪器与试剂 DL-Bt64全自动血培养仪和DL-96Ⅱ细菌测定系统由珠海迪尔生物工程有限公司提供，仪器操作严格按照标准操作规程进行检测。培养基由郑州人福博赛生物技术有限责任公司提供，快速革兰染色液由(台资)珠海贝索生物技术有限公司提供。质控菌株铜绿假单胞菌ATCC 27853、金黄色葡萄球菌ATCC 29213、粪肠球菌ATCC29212、大肠埃希菌ATCC 25922由温州市康泰生物科技有限公司提供。

1.3 方法 按无菌采集标准操作程序采集在患者出现如高烧、寒战或发热病人发热初期、高峰期等临床症状的静脉血标本，成人瓶8-10 ml、儿童瓶采集1-3 ml，每次采集一套(厌氧瓶和需氧瓶)。将血培养瓶置于DL-Bt64血培养仪中培养，仪器报阳后，从血培养瓶抽取血液立即转种血/麦康凯平皿，置37℃的生化培养箱中培养18-24 h，同时涂片革兰染色镜检予以确认，检出真菌孢子则加种科玛嘉真菌显色平皿。若5 d培养仪未报阳性，则发阴性报告。将分离到的单个菌落用DL-96Ⅱ细菌测定系统进行细菌鉴定和药敏试验。以上操作过程均严格按照第4版《全国临床检验操作规程》[2]要求开展，结果判定参考美国临床实验标准化协会(CLSI)2014年标准[3]。

1.4 统计学分析 对培养分离鉴定的病原菌构成分布以及其耐药性情况用Excel建立数据库，统计分析由WHONET5.4软件完成。

2 结果

2.1 血培养标本中菌群分布及菌株构成情况 2389例血液培养标本分离出病原菌213株，培养阳性率为8.92%。其中G+菌109株占51.17%(109/213)，G-杆菌87株占40.85%(87/213)，真菌17株占7.98%(17/213)。G+球菌中以凝固酶阴性葡萄球菌和金黄色葡萄球菌为主，其他菌株均小于5.00%，G-杆菌中以大肠埃希菌、肺炎克雷伯菌和铜绿假单胞菌为主,其他菌株均小于3.00%。真菌以白色念珠菌为主，其他菌株均小于2.00%，菌株构成详细情况，见表1。

表1 菌群分布及菌株构成情况

2.2 血培养分离主要致病菌对常用抗菌药物的耐药性 G+球菌对常用抗菌药物的耐药情况见表2。G-杆菌对常用抗菌药物的耐药情况见表3。真菌对常用抗菌药物的耐药情况，其中白色念珠菌对伏立康唑、酮康唑、咪康唑、氟康唑、氟胞嘧啶的敏感率分别为92.31%、92.31%、92.31%、100.00%和100.00%；对益康唑和制菌霉素的耐药率分别为69.23%和76.92%。

表2 分离主要G+球菌对常用抗菌药物的耐药情况耐药株(n)/耐药率(%)

表3 分离主要G-杆菌对常用抗菌药物的耐药情况(n/%)

3 讨论

血液感染是临床常见的一种可致全身感染，危及患者生命的感染性疾病，具有起病急、病死率较高的特点。由各种病原微生物(细菌或真菌)和毒素侵入人体血液循环系统并大量繁殖所引起的疾病，致机体出现骤发寒战、高热、心动过速、呼吸急促、精神和神志改变等一系列临床症状，严重者可引起休克、弥散性血管内凝血和多脏器功能衰竭等后果[4]。随着广谱、超广谱抗菌药物、抗肿瘤药物、免疫抑制剂、各种侵袭性操作特别是静脉导管插管及各种介入性诊治手段的应用，很容易交叉感染引起败血症，导致机体正常菌群失调，致耐药菌、条件致病菌和其他少见细菌在临床的发生率呈上升趋势。故从血液中培养出病原菌分离菌株，并及时进行药敏监测很有必要[5]。

随着计算机技术的发展，自动化血培养系统已代替传统的手工操作，操作简便，能快速检测出血液中是否感染细菌、真菌及分枝杆菌，自动提示阳性结果[6]。本院微生物室采用DL-Bt64全自动血培养仪可对血液标本进行需氧及厌氧培养，为病原菌生长提供有利的生长环境。对2389例血培养标本分离出病原菌213株，培养阳性率为8.92%，低于涂斌等[6]学者报道的14.94%，这应当引起临床的注意，尽量合理使用抗菌药物。对213株病原菌用DL-96Ⅱ细菌测定系统结果显示，其中G+菌109株占51.17%(109/213)，G-杆菌87株占40.85%(87/213)，真菌17株占7.98%(17/213)。G+球菌中以凝固酶阴性葡萄球菌占24.88%(53/213)和金黄色葡萄球菌占14.55%(31/213)为主，其他菌株均小于5.00%。G-杆菌中以大肠埃希菌占15.02%(32/213)、肺炎克雷伯菌占9.86%(21/213)和铜绿假单胞菌占7.04%(15/213)为主，其他菌株均小于3.00%。真菌以白色念珠菌占6.10%(13/213)为主，其他菌株均小于2.00%。这与邓红丽等[7]学者报道一致。本研究分离致病菌中G+球菌高于G-杆菌的分离率，表明本院血培养样本以G+球菌为主，病原菌分布较为广泛。培养阳性率低于文献报道[6]和菌种多样化可能是因区域不同，致病原菌的分布存在一定差异[8]。

快速检出病原菌以及鉴定出致病菌对抗菌药物的敏感性，是指导临床合理使用抗菌药物的首要任务[9]。本微生物室采用DL-96Ⅱ细菌测定系统对分离主要病原菌进行常用抗菌药物的耐药分析，结果表明，G+球菌的主要致病菌对万古霉素、利奈唑胺、替考拉宁的敏感率为100.0%，对阿米卡星、庆大霉素、四环素、氯霉素和头孢曲松的敏感性均在50.00%以上，未发现万古霉素、利奈唑胺和替考拉宁对葡萄球菌的耐药，表明万古霉素、利奈唑胺和替考拉宁仍然是临床治疗葡萄球菌的首选药物。凝固酶阴性葡萄球菌对苯唑西林、青霉素G的耐药率在为90.0%以上，对环丙沙星、红霉素、克林霉素、复方新诺明、头孢唑啉以及金黄色葡萄球菌对红霉素和克林霉素的耐药性均在50.00%以上，提示临床应避免使用该类药物。大肠埃希氏菌和肺炎克雷伯菌对哌拉西林/他唑巴坦、头孢哌酮/舒巴坦、头孢他啶、头孢曲松、亚胺培南、美洛培南以及铜绿假单胞菌对美洛培南的敏感率均在90.00%以上，说明临床在治疗上述G-杆菌应首选哌拉西林/他唑巴坦、美洛培南等抗菌药物。大肠埃希氏菌对复方新诺明、阿米卡星、头孢呋辛、左氧氟沙星，肺炎克雷伯菌对阿米卡星、哌拉西林、头孢噻肟、头孢呋辛以及铜绿假单胞菌对复方新诺明、阿米卡星、头孢曲松、头孢噻肟、左氧氟沙星的耐药性均在50.00%以上，与文献[10]报道一致，临床应尽量避免使用该类抗菌药物。白色念珠菌对伏立康唑、酮康唑、咪康唑、氟康唑、氟胞嘧啶的敏感率分别为92.31%、92.31%、92.31%、100.00%和100.00%，提示临床有真菌感染时，可优先考虑使用这些药物治疗。对益康唑和制菌霉素的耐药率分别为69.23%和76.92%，这些抗真菌药物尽量少用于真菌感染的治疗。其他致病菌对抗菌药物出现的不同程度耐药，与近年来抗菌药物滥用和各种侵袭性操作密切相关，应引起高度重视[11]。特别是临床出现寒战、不明原因发热、怀疑有菌血症或脓毒症等临床症状患者应首先对其进行血培养,及时分离鉴定病原菌以及了解其耐药性，对临床合理使用抗菌药物，可降低或延缓耐药菌株的产生，避免高耐药与多药耐药菌株的产生，对临床提高治愈率、降低死亡率有着重要的临床意义。

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[2]尚 红,王毓三,申子瑜,主编.中华人民共和国卫生部医政司.全国临床检验操作规程[M].第4版,北京:人民卫生出版社,2014:560-811.

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[4]苗香莲,韩 芳.儿科889例血液细菌培养及药敏实验结果分析[J].中国实用医刊,2016，43(15):38.

[5]孙 丽,丁世才.血液培养1836例结果分析[J]．现代医药卫生,2013,29(19):2909.

[6]涂 斌,王 剑,袁秀兰.血液需氧培养病原菌分布与耐药性分析[J].中华医院感染学杂志,2013,23(8):1952.

[7]邓红丽,陈振华,刘文恩,等.血培养病原菌分布及耐药性分析[J].实用预防医学,2010，17(1):127.

[8]王贞美,钟洪伟,王官蓉,等.分析巴中地区696例阴道分泌物的细菌分离鉴定及耐药性[J].中国实验诊断学,2016,20(4):628.

[9]孟圣勇.两种药敏试验方法对血液细菌检测的鉴定以及临床应用价值[J].药学与临床,2016,10(8):143.

[10]王艳海,殷宝生,赵 娜,等.血培养病原菌分布及耐药性分析[J].中华医院感染学杂志,2013,23(20):5054.

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Isolation,identification and drug resistance of pathogenic bacteria isolated from 2389 blood samples

GAOJian-ping,LONGXun-qin,CHENJun-li.

(ClinicalLaboratory，ChengduWestHospital,Chengdu610041,China)

Objective To analyze the isolation and identification of pathogenic bacteria and drug resistance of pathogenic bacteria in 2389 cases of blood samples,and to provide reference for clinical treatment of infectious diseases and rational drug use.Methods A retrospective analysis from June 2014 to May 2016 in our hospital with dir DL-Bt64 (DL-Bt64) testing in 2389 cases of blood samples were isolated and cultured with DL-96 II and pathogenic bacteria identification and drug sensitive test of bacteria testing system of automatic blood culture results.Results Isolated 213 strains of pathogenic bacteria,the positive rate was 8.92%.Among them,109 strains of G+ bacteria accounted for 51.17% (109/213),87 strains of G- were 40.85% (87/213),and 17 strains of fungi accounted for 7.98% (17/213).G+ bacteria with coagulase negative Staphylococcus and Staphylococcus aureus.The detection rates were 24.88% and 14.55%,other strains were less than 5.00%.In G- bacteria,Escherichia coli,Klebsiella pneumoniae and Pseudomonas aeruginosa,the detection rates were 15.69%,9.86% and 7.04%,respectively,and the other strains were less than 3.00%.Fungi were mainly Candida albicans,the detection rate was 6.10%,the other strains were less than 2.00%.Coagulase negative Staphylococcus aureus to oxacillin,penicillin resistant G at the rate above 90%,no vancomycin,linezolid and teicoplanin resistance of Staphylococcus aureus.Escherichia coli to cotrimoxazole,levofloxacin,Amikacin,cefuroxime,Klebsiella pneumoniae to Amikacin,piperacillin,cefotaxime and cefuroxime and Pseudomonas aeruginosa to cotrimoxazole,Amikacin,ceftriaxone,cefotaxime,levofloxacin resistance rate was more than 50%,The resistant rate of Candida albicans to the benefit of the drug and the preparation of the bacteria were above 68%.Conclusion Blood culture pathogenic bacteria with G+bacteria,bacterial diversity,bacterial drug resistance is more serious.The identification of pathogenic bacteria in blood culture should be strengthened,and the results of drug resistance of pathogenic bacteria in the area should be analyzed regularly,It has important application value in the treatment of infectious diseases,the development of diagnostic and treatment programs,to avoid the abuse of antibiotics and reduce the production of drug resistant strains.

blood culture;Main pathogenic bacteria;tolerance;Automated blood culture system

1007-4287(2017)04-0597-04

R446.5

A

2016-08-22)