金银花叶茶饮制作研究

南海娟,张浩,于云雁

金银花叶茶饮制作研究

南海娟,张浩,于云雁

（河南科技学院食品学院,河南新乡453003）

选用金银花叶为原料,采用水浴振荡提取,通过单因素试验和正交试验考察提取温度、提取时间、液料比对绿原酸和黄酮提取率的影响,用白砂糖对提取液进行调味,并对制成的金银花叶茶进行感官评分.结果表明：绿原酸和黄酮的最佳提取温度为90℃,最佳提取时间为60 min,最佳液料比为60∶1（V∶m）,此时绿原酸和黄酮的提取率分别达到75.51%和82.31%.白砂糖质量浓度为50 g/L时制得的金银花叶茶感官评分最高.

金银花叶；提取；茶饮

金银花,又名忍冬,是一种常用的中药材,它的根、茎、叶、花、种子均可入药,并且各有功效[1].金银花的花蕾入药称为“金银花”,金银花花蕾味甘、性寒,具有清热解毒的良好功效.金银花的茎枝也具有清热解毒、消肿、通络的功效.据《本草纲目》记载,“忍冬茎、叶及花,功可皆同”[2].现代研究表明,金银花茎、叶及花蕾中清热解毒的主要成分为绿原酸及其同分异构体.有研究表明,金银花叶的产量是同时期金银花花蕾的10倍.金银花叶易采摘,且价格便宜[3].现在市场上关于金银花花蕾的产品开发较多,但对金银花叶产品的开发与研究较少.本文主要对与金银花花蕾有相同药理性的金银花叶进行研究,通过探究金银花叶浸提液的最佳提取方法,测量金银花叶浸提液中绿原酸、黄酮、多糖、蛋白质等的含量,并对金银花叶浸提液进行调味制茶和品评,为以后金银花叶的开发利用提供基础数据.

1 材料与方法

1.1 试验材料

金银花叶采自新乡市封丘县金银花GAP基地.氢氧化钠、亚硝酸钠、氢氧化铝、乙醇、芦丁、绿原酸标准品、浓硫酸、苯酚、硫酸铜、硫酸钾、硼酸、甲基红、次甲基蓝、盐酸,均为分析纯.

SHZ-DⅢ循环水真空泵（河南智诚科技发展有限公司）；RE-5299旋转蒸发器（河南智诚科技发展有限公司）；SHA-C数显水浴恒温振荡器（金坛华峰仪器有限公司）；PL202-L型电子天平（梅特勒-托利多仪器上海有限公司）；TGL-20B型离心机（上海安亭仪器有限公司）；Tu-1901双光束紫外分光光度计（北京普析通用仪器有限责任公司）；L-420台式低速离心机（湖南湘仪实验室仪器开发有限公司）；FW-400A倾斜式高速万能粉碎机（北京中兴伟业仪器有限公司）；WAY-1型阿贝折射仪（上海光学仪器厂）.

1.2 试验方法

1.2.1 样品的处理采摘10月份最后一茬金银花叶,要求金银花叶形状完整,无虫蛀病害,无已经发黄枯萎的叶子.采摘完成后去除碎石、叶梗等杂质,清洗干净.放入烘箱进行充分烘干,粉碎,过60目筛,得金银花叶样品,装入密封袋,置冰箱备用.

1.2.2 绿原酸含量的测定

1.2.2.1 绿原酸标准曲线的绘制精确称取干燥至恒质量的绿原酸标准品5.00 mg,加入体积分数为70%的乙醇定容到50 mL的容量瓶中.分别吸取绿原酸标准液0.40、0.80、1.20、1.60、2.00、2.40 mL于10 mL容量瓶中,用体积分数为70%的乙醇定容,配制成4.00、8.00、12.00、16.00、20.00、24.00μg/mL的标准液.以体积分数为70%的乙醇作为空白对照.采用双光束紫外分光光度计,在330 nm波长处测定各标准样品的吸光度值.以绿原酸标准液的质量浓度为横坐标,以吸光度值为纵坐标,绘制绿原酸标准曲线[4].

1.2.2.2 金银花叶中绿原酸含量的测定取金银花叶样品10.00 g加入到体积分数为75%的乙醇中,液料比为10∶1（V∶m）,在恒温水浴锅中80℃回流100 min,共提取3次,冷却至室温,抽滤,合并滤液,用旋转蒸发器在70℃条件下浓缩至50 mL左右,用体积分数为75%的乙醇定容至100 mL.在相同的条件下做3个平行试验[5],得到3组绿原酸样液.精确吸取样液0.3 mL,按照1.2.2.1的方法测定吸光度值.

1.2.3 黄酮含量的测定

1.2.3.1 芦丁标准曲线的绘制精确称取120℃干燥的芦丁0.020 g,加无水乙醇水浴微热溶解,冷却后,用无水乙醇定容至100 mL,配制成0.20 mg/mL的芦丁标准液备用.分别吸取该对照品溶液0、2.00、4.00、6.00、8.00、10.0 mL置于50 mL容量瓶中,先加蒸馏水10 mL,再加入质量分数为5%的亚硝酸钠溶液2.00 mL,摇匀,放置6 min后加入质量分数为10%的硝酸铝溶液2.0 mL,摇匀后放置6 min,再加入质量分数为4.0%的氢氧化钠溶液20 mL,加蒸馏水定容至刻度,摇晃均匀后静置15 min.以第一管做空白对照,用双光束紫外分光光度计,在波长507 nm处测各标样的吸光度值.以芦丁质量浓度为横坐标,吸光度值为纵坐标,绘制芦丁标准曲线[6].

1.2.3.2 金银花叶中黄酮含量的测定取金银花叶样品10.00 g,加入体积分数为75%的乙醇,液料比为10∶1（V∶m）,架好回流装置,在恒温水浴锅中80℃下回流100 min,共提取3次,冷却至室温时进行抽滤,合并滤液,用旋转蒸发器在70℃条件下浓缩至50 mL左右,用体积分数为75%的乙醇定容至100 mL.在相同的条件下做3个平行试验,得到3组样液.分别取样液2 mL加到50 mL容量瓶中,按照1.2.3.1的方法测吸光度值.

1.2.4 单因素最佳提取条件的确定

1.2.4.1 不同温度对提取效果的影响准确称取金银花叶样品2.00 g,放入锥形瓶中,加入100 mL蒸馏水,封口膜封口,分别在50、60、70、80、90、100℃的水浴条件下振荡提取,过滤,滤液定容至250 mL,每个温度做3个平行试验.测定提取液中绿原酸、黄酮的含量,计算提取率[7].

1.2.4.2 不同时间对提取效果的影响准确称取2.00 g金银花叶样品放入锥形瓶中,加入100 mL蒸馏水,封口膜封口,在温度为80℃,提取时间分别为35、45、55、65、75 min的水浴条件下振荡提取,过滤,滤液定容至250 mL,每个时间做3个平行试验.测定提取液中绿原酸、黄酮的含量,计算提取率.

1.2.4.3 不同液料比对提取效果的影响准确称取2.00 g金银花叶样品放入锥形瓶中,按液料比（V∶m）分别为20∶1、30∶1、40∶1、50∶1、60∶1加入蒸馏水,封口膜封口,在温度为80℃,提取时间为45 min的水浴条件下振荡提取,过滤,滤液定容至250 mL,每个液料比做3个平行试验.测定提取液中绿原酸、黄酮的含量,计算提取率.

1.2.5 正交试验根据单因素试验结果,准确称取2.00 g金银花叶样品放入锥形瓶中,以绿原酸、黄酮提取率为考察指标,进行三因素三水平的正交试验,确定最佳提取条件[8].正交试验因素水平见表1.

表1 正交试验因素水平Tab.1 Factors and levels oforthogonaltest

1.2.6 金银花叶茶中其他成分的测定多糖采用苯酚-硫酸法测定.精确量取最佳条件下提取的10 mL提取液,加蒸馏水定容至100 mL.然后精确量取2 mL于小试管中,加入体积分数为5%的苯酚1.0 mL及浓硫酸5.0 mL,混合均匀,冷却至室温,测定吸光度值,由标准曲线计算出多糖质量浓度[9].蛋白质含量测定采用凯氏定氮法；可溶性固形物含量测定采用折光法[10].

1.2.7 金银花叶茶的感官评分分别在50 mL金银花叶茶中加入0、0.5、1.0、2.0、2.5 g白砂糖调味后进行感官评分.满分为30分,色泽、香气、滋味各占10分.具体评分标准为：色泽应为均匀的金黄色,颜色澄清透亮,无肉眼可见的杂质；香气方面,有明显的清新草木香,无其他异味；滋味方面,茶入口应有轻微甘甜味和金银花独特的滋味,口感清爽[11].

2 结果与分析

2.1 标准曲线的绘制

按照1.2.2方法,得绿原酸标准方程为y=0.076 2x+0.079 4,R2=0.990 1.按照1.2.3方法,得芦丁标准方程为y=0.012 2x-0.016 5,R2=0.995 1.

2.2 单因素最佳提取条件分析

2.2.1 提取温度对绿原酸、黄酮提取率的影响不同提取温度下绿原酸、黄酮的提取率见图1.

由图1可知,在50～100℃范围内温度对提取率影响较大.50～80℃的范围内,绿原酸和黄酮的提取率随温度的变化急剧上升,其后,变化趋势趋于平稳,100℃时绿原酸和黄酮的提取率分别达到71.12%和76.85%.因此,选取70、80、90℃进行正交试验.

2.1.2 提取时间对绿原酸、黄酮的提取率的影响不同提取时间下绿原酸、黄酮的提取率见图2.

图1 不同提取温度下绿原酸、黄酮的提取率Fig.1 Extraction rate ofchlorogenic acid and flavonoids at differenttemperatures

图2 不同提取时间下绿原酸、黄酮的提取率Fig.2 Extraction rate ofchlorogenic acid and flavonoids at differenttime

由图2可知：提取时间为35～45 min时,绿原酸、黄酮提取率均平缓上升；提取时间为45～65 min时,绿原酸和黄酮提取率上升较快；提取时间为65～75 min时,绿原酸、黄酮提取率略有上升,提取率分别为70.25%和72.67%.因此,选取55、60、65 min进行正交试验.

2.1.3 液料比对绿原酸、黄酮提取率的影响不同液料比下绿原酸、黄酮的提取率见图3.

由图3可知：黄酮提取率在液料比（V∶m）为20∶1～40∶1时上升较快,液料比为40∶1～60∶1时略有上升；绿原酸的提取率在液料比为20∶1～50∶1时上升较快,50∶1～60∶1时略有上升.绿原酸和黄酮的提取率在液料比为60∶1时分别达到了71.21%和76.26%.因此,选择液料比40∶1、50∶1、60∶1进行正交试验.

2.2 正交试验结果

在单因素试验的基础上,进行三因素三水平正交试验,考查指标为绿原酸、黄酮的提取率.试验结果见表2.

图3 不同液料比下绿原酸、黄酮的提取率Fig.3 Extraction rate ofchlorogenic acid and flavonoids at differentratio ofliquid to material

表2 正交试验结果分析Tab.2 Analysis table oforthogonalexperiment

由表2可知,提取温度、提取时间、液料比对金银花叶提取的影响程度为提取温度＞提取时间＞液料比黄酮和绿原酸的提取率都是A3B3C3时最好,最优组合为提取温度90℃,提取时间60 min,液料比为60∶1.此组合不在正交试验方案中,因此在此条件下做验证试验,此时,绿原酸提取率达到75.51%,黄酮提取率达到82.31%.

2.3 金银花叶茶的调味及品评

将提取好的金银花叶浸提液加白砂糖进行调味,并对调好的金银花叶茶进行感官评分.结果见表3.

表3 金银花叶茶感官评分Tab.3 Sensory score ofhoneysuckle leaves tea

由表3可知,50 mL金银花叶茶中加入2.5 g白砂糖,即白砂糖质量浓度为50 g/L时感官评分最高,所得金银花叶茶外观澄清透亮,总体呈金黄色,有花草的清香,口感较清新,并具有金银花特有的滋味.

2.4 其他成分的测定结果

经测定,每100 mL金银花叶茶中含绿原酸3.448 mg,含黄酮10.927 mg,含多糖17.851 mg,含蛋白质7 mg,可溶性固形物质量分数为4.27%.

3 结论

本试验结果表明：金银花叶茶中绿原酸和黄酮的最佳提取条件为提取温度90℃,提取时间60 min,液料比60∶1.此条件下制作出的金银花叶茶每100 mL含绿原酸3.448 mg,含黄酮10.927 mg,含蛋白质7 mg,含多糖17.851 mg,可溶性固形物质量分数为4.27%.在金银花叶茶的调味过程中,白砂糖质量分数为50 g/mL时感官评分最高.

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（责任编辑：邓天福）

Study on production of honeysuckle leaves tea

NAN Haijuan,ZHANG Hao,YU Yunyan
（Schoolof Food Science,Henan Institute of Science and Technology,Xinxiang 453003,China）

Take of honeysuckle leaves as raw material,by using water bath shaking extraction,single factor and orthogonal experiment,the effects of extraction temperature,time and liquid to solid ratio on the extraction rate of chlorogenic acid and flavonoids were investigated,flavoring extract with white sugar.The results showed that the best extraction temperature was 90℃,the extraction time was 60 min,liquid to solid ratio was 60∶1,the extraction rate of chlorogenic acid and flavonoids reached 75.51%and 82.31%respectively under these conditions.The optimal addition amount of sugar was 50 g/L.

honeysuckle leaves；extract；tea

TS275.2

A

1008-7516（2017）02-0029-05

10.3969/j.issn.1008-7516.2017.02.007

2016-12-01

河南省高等学校重点科研项目（16A550009）；河南省教育厅科学技术研究项目（14A550012）；新乡市科技创新发展专项（CXGG16028）

南海娟（1974―）,女,河南灵宝人,硕士,高级实验师.主要从事功能性食品及食品安全检测研究.