Omi/HtrA2在腺样囊性癌的表达及其临床意义

李立恒 王 蕊 王 芹 王钟华

Omi/HtrA2在腺样囊性癌的表达及其临床意义

李立恒 王 蕊 王 芹 王钟华

目的 探讨Omi/HtrA2在不同分型腺样囊性癌中的表达差异，并评价其对腺样囊性癌的临床意义。方法 纳入确诊为腺样囊性癌的患者100例，应用免疫组织化学染色方法，检测Omi/HtrA2在不同分型腺样囊性癌中的表达；并检测腺样囊性癌转移组和非转移组患者中Omi/HtrA2表达情况。结果 Omi/HtrA2表达主要位于细胞胞质中，在腺样囊性癌组织中其阳性率为83%；腺样囊性癌低级组与高级组间表达情况具有统计学差异(P<0.05)，但不同分型的腺样囊性癌组织中其表达差异无统计学意义(P>0.05)；Omi/HtrA2在转移组腺样囊性癌中阳性率为93.1%，在非转移组中其阳性率为46.2%，两组比较具有统计学差异(P<0.05)。结论 Omi/HtrA2与腺样囊性癌的发病密切相关，可作为临床判断腺样囊性癌的辅助性指标，对临床的诊治及预后的判断具有一定的指导价值。

Omi/HtrA2；腺样囊性癌；分型；肿瘤转移

(ThePracticalJournalofCancer,2017,32:738～741)

腺样囊性癌(adenoid cystic carcinoma，ACC) 是颌面部肿瘤中发病率较高的肿瘤，也是涎腺最常见的恶性肿瘤，约占所有涎腺肿瘤的14.5%，约占全部涎腺恶性肿瘤的40%，极易发生局部浸润和神经侵袭转移，且其浸润性极强，易侵入血管，造成血运转移，预后不佳，但本病带瘤生存时间相对较长，对患者的生存质量产生重大的影响[1-2]。随着现代分子生物学和遗传学的发展，该病与相关基因的激活及抑癌基因的失活具有密切的相关性，近年来Omi/HtrA2基因不断被人们所认识，该基因是1种高度保守的转录调节因子，其表达与肿瘤的发生发展有着密切的关系，特别是对于肿瘤的转移有着重要的影响，但是目前对于该基因在腺样囊性癌的影响报道尚少[3-4]。本研究采用免疫组织化学染色的方法检测Omi/HtrA2基因在人类腺样囊性癌中的不同分型中的表达差异，结合肿瘤分型对表达差异情况进行研究，并搜集所纳入研究的患者术后发生转移及非转移情况，评价其对腺样囊性癌临床价值，为进一步阐明该基因在腺样囊性癌的疾病发病及治疗中的作用，为今后基因靶向治疗研究提供依据。

1 材料与方法

1.1 一般资料

收集2006年1月至2013年1月在我院确诊的腺样囊性癌100例患者的临床资料，年龄14～75岁，平均年龄(26.25±10.23)岁，女性31例，男性69例，所有纳入研究的腺样囊性癌患者均手术后取活检，均经病理确诊，其中28例随访了10年，60例随访了5年。均为单侧腺体发病，其中左侧发病51例，右侧发病9例，发病部位：舌下腺13例，腮腺64例，23例颌下腺。临床分期及病理类型参照国际WHO的诊断标准[4]进行分析判断，其中Ⅰ期19例，Ⅱ期30例，Ⅲ期28例，Ⅳ期23例；筛孔状24例、管状型26例、实体型36例，混合型14例。按照病理组织学分型，根据恶性程度进行分级，分为3级，其中1级26例，2级40例，3级34例。

1.2 诊断标准

参照《临床诊疗指南肿瘤学分册》[5]对腺样囊性癌的诊断标准制定。

1.3 纳入标准与排除标准

纳入标准：①年龄14～75岁；②符合本病诊断标准；③愿意接受本临床研究，依从性强。

排除标准：①妊娠期、哺乳期患者；②恶性肿瘤、有严重其他系统疾病患者；③依从性差，不愿意接受本临床研究。

1.4 研究方法

1.4.1 主要试剂、细胞与仪器 试剂：兔单克隆IgG Omi/HtrA2抗体和多克隆IgG β-actin抗体(美国Santa Cruz公司)。HRP标记山羊抗小鼠IgG，免疫组化试剂盒(武汉博士德)，HRP标记山羊抗兔IgG(上海碧云天生物)。

仪器：高转速冷冻离心机(德国BiofugeStratos)，-80 ℃～4 ℃冰箱(日本松下)，倒置相差显微镜(日本奥林巴斯)。

1.4.2 免疫组化方法 应用SP检测法，取二甲苯脱蜡后的腺样囊性癌组织切片，无水乙醇分级水化，以 PBS 0.01 mol/L洗3次，多聚甲醛40 g/L固定15 min，双氧水消除内源性过氧化物酶体积分数3% 结合15 min，50 μl非免疫动物血清封闭，Omi/HtrA2一抗50 μl 过夜，第二抗体50 μl生物素标记，辣根过氧化物酶孵育，再行DBA显色，苏木精复染，最后中性树胶固封。结果判定：阳性细胞为在倒置显微镜下细胞胞质胞膜出现深棕黄色的着色，平均光密度采用Image J软件进行测量。

1.5 实验结果的判定

阳性结果判定：Omi/HtrA2染色颗粒位于胞质之中。通过显微镜10×40倍视野，每张切片对应随机纳入10个视野进行阳性细胞计数，阳性细胞数>50%为强阳性(+++)，25%～50%阳性(++)，0～25%为弱阳性(+)，未着色为阴性(-)。

1.6 统计学处理

2 结果

2.1 Omi/HtrA2在腺样囊性癌中的表达

观察Omi/HtrA2在腺样囊性癌中的表达，结果显示，免疫组化阳性染色分布于细胞质内，也有分布于细胞核内，呈棕色或者褐色，100例腺样囊性癌患者的病变组织切片中有83例阳性染色，其中弱阳性20例，中度阳性28例，强阳性35例，与正常人体组织Omi/HtrA2表达相比较，具有显著统计学差异(P<0.05)，见表1。

表1 Omi/HtrA2在腺样囊性癌中的表达情况/例

2.2 Omi/HtrA2表达与腺样囊性癌肿瘤分型的相关性

Omi/HtrA2在不同病理分型腺样囊性癌中的表达情况比较，差异无统计学意义(P>0.05)，见表2。

2.3 Omi/HtrA2与腺样囊性癌恶性分级的相关性

根据恶性程度分为3级，其中1级26例中14例阳性，2级40例中36例为阳性，3级34例中31例为阳性，经统计，3级其阳性率高于2级和1级，2级阳性率又高于1级，差异具有统计学意义(P<0.05)，见表3。

2.4 Omi/HtrA2 在腺样囊性癌转移组与非转移组中表达情况比较

结果显示，在转移腺样囊性癌患者中Omi/HtrA2阳性率为93.1%，在非转移组中其阳性率为46.2%，两组比较具有统计学差异(P<0.05)，见表4。

表2 Omi/HtrA2表达与腺样囊性癌病理分型的 相关性(例，%)

表3 Omi/HtrA2与腺样囊性癌恶性分级的相关性(例，%)

注：与1级相比，①为P<0.05；与2级比较，②为P<0.05。

表4 Omi/HtrA2在腺样囊性癌转移组与非转移组 中的表达情况(例，%)

3 讨论

腺样囊性癌是颌面部肿瘤中发病率较高的肿瘤，也是涎腺最常见的恶性肿瘤，约占所有涎腺肿瘤的14.5%，约占全部涎腺恶性肿瘤的40%，5年生存率约为20%。极易发生局部浸润和神经侵袭转移[6-7]。近年来涎腺腺样囊性癌的发病率呈逐年上升的趋势，虽然治疗水平不断提高，但是患者的生存率并未得到明显提高，其转移与复发仍是其死亡的主要原因[8]。国内外目前对涎腺腺样囊性癌的诊断研究主要集中在病因学、遗传基因、早期诊断手段的研究，治疗方面研究主要集中在放射、化学以及手术方法改进等方面，虽然取得了一定进展，但该病的发病率及死亡率并未得到明显降低，说明研究的深度尚不足，研究还处于基础阶段尚未应用于临床[9]。由于涎腺腺样囊性癌作为恶性肿瘤，对人类生命具有重大的威胁。因此，进一步寻找有关涎腺腺样囊性癌复发、转移生物标记物及敏感特异是该病有效治疗、提高生存率的关键点。其次做好涎腺腺样囊性癌发病的预防及早期发现，减少其发病率和转移率，是今后研究的重要方向[10]。

由于疾病发病隐匿，进展很快，很多患者就诊时已到达晚期，同时目前还缺乏腺样囊性癌的诊断和治疗靶标，因此寻找生物学靶标对于疾病的诊治至关重要，本研究为探求该病的侵袭机制，寻找靶点基因与疾病的相关性，对该病的治疗和预后判断提供一定的指导价值[11]。目前，仅少量报道关于腺样囊性癌中Omi/HtrA2 的表达情况，但缺乏对Omi/HtrA2 与腺样囊性癌关系的更深入研究和病例报道，本研究对腺样囊性癌的深入研究具有重要的研究意义。

目前研究显示，Omi/HtrA2最早是因与凋亡抑制蛋白(IAPs)有结合能力，与细菌内蛋白酶HtrA2 (h igh2temper2atu re requ iremen t) 同源，是1种线粒体丝氨酸蛋白酶,定位于线粒体，可拮抗IAPs而被分离确定[12]。最新的几年研究发现Omi/HtrA2可作为1种癌基因，不仅是是上皮-间质转变过程中的关键因子，且Omi/HtrA2与肿瘤的发生发展密切相关，影响肿瘤细胞的凋亡，其高表达可能促进癌细胞的恶化，可以视为1种癌基因和凋亡抑制蛋白，表达水平与肿瘤各亚型的恶性程度也密切相关，可抑制凋亡呈现出抗凋亡的激活，增强细胞的抗凋亡能力。有研究表明该基因可以通过多条通路抑制癌基因的正常表达和转录，发挥抑制癌细胞凋亡的作用，促进肿瘤的发展[13]。近年来国内外研究表明，Omi/HtrA2的作用为：①促进细胞凋亡的发生；②具有修复、降解线粒体中折叠错误的蛋白质的作用,并可以通过破坏caspase与X染色体连锁凋亡抑制蛋白(X IAP)之间的相互作用和直接利用其自身具有的蛋白酶活性引起细胞凋亡。已有研究证实Omi/HtrA2当它呈异常表达可以导致肿瘤的发生，在调节细胞凋亡中发生重要作用。另有实验也证明Omi/HtrA2 呈异常表达可以导致肿瘤的发生，Omi/HtrA2在调节细胞凋亡中发生重要作用。在72% 的胃腺癌中Omi/HtrA2 呈现高表达，而在正常胃黏膜中表达较弱[14]。

到目前为止，研究人员已在前列腺癌、乳腺癌、喉癌等肿瘤组织中检测到Omi/HtrA2高表达特征，研究还证实了该基因及肿瘤细胞的转移和侵袭有关，通过降低黏附蛋白的表达，抑制细胞转录水平，从而有助于肿瘤的侵袭，进而促进肿瘤血管生成[15]。这些研究结果提示：Omi/HtrA2与某些恶性肿瘤的分化程度有重要关系，在这些恶性疾病的发生和发展中起了非常重要的作用，但是在腺样囊性癌中的研究尚少。因此，Omi/HtrA2不仅与肿瘤形成有关，还与肿瘤的转移相关。因此本研究通过深入探讨该指标在腺样囊性癌中表达的情况以了解其临床意义，结果显示，Omi/HtrA2表达主要位于细胞的胞浆中，在腺样囊性癌患者的组织中阳性率为83%，这说明该基因在腺样囊性癌中具有高表达的表现，其可能的机制是通过抑制肿瘤细胞的凋亡有关；腺样囊性癌低级与高级组的表达情况之间具有统计学差异，说明该基因在病理分型表达没有差别，但不同分型的腺样囊性癌病理组织的表达差异无统计学意义；Omi/HtrA2在转移组的腺样囊性癌患者中阳性率为93.1%，在非转移组中的阳性率为46.2%，两组比较具有统计学差异，这也提示了该基因可能参与了腺样囊性癌的转移和侵袭过程。

综上所述，我们推测，Omi/HtrA2可能通过其抑制细胞凋亡和促侵袭的作用对腺样囊性癌的发生发展发挥调控作用。本研究阐明了腺样囊性癌的分子相关性，但是其主要的发病机制有待于深入的研究，同时通过本研究也为腺样囊性癌的临床诊断和预后判断提供了新的策略方法，确定了Omi/HtrA2与腺样囊性癌的相关性，研究了不同肿瘤分型对其表达的差异，探讨了该基因对腺样囊性癌的生物学相关性，也为今后进一步对腺样囊性癌的诊治提供理论依据。

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(编辑：吴小红)

Omi/HtrA2 Epression and Clinical Significance of Adenoid Cystic Carcinoma

LILiheng,WANGLei,WANGQin,etal.

TheFirstClinicalMedicalSchool,Zhangjiakou,075000

Objective To investigate the expression of Omi/HtrA2 in different subtypes of adenoid cystic carcinoma and to evaluate its clinical significance for adenoid cystic carcinoma.Methods 100 cases of patients diagnosed with adenoid cystic carcinoma were enrolled.The expression of Omi/HtrA2 in different subtypes of adenoid cystic carcinoma was detected by immunohistochemical staining.The expression of Omi/HtrA2 in adenoid cystic carcinoma and non-metastatic group were detected.ResultsThe expression of Omi/HtrA2 was mainly located in cytoplasm and 83% in adenoid cystic carcinoma.The expression of Omi/HtrA2 was statistically different (P<0.05) (P>0.05).The positive rate of Omi/HtrA2 in the adenoid cystic carcinoma was 93.1% in the non-metastatic group,but the difference was not statistically significant (P>0.05).The positive rate was 46.2%,the 2 groups were statistically significant (P<0.05).Conclusion Omi/HtrA2 incidence of adenoid cystic carcinoma is closely related to clinical judgment as adenoid cystic carcinoma auxiliary index,has a guiding value for diagnosis and clinical prognosis.

Omi/HtrA2;Adenoid cystic carcinoma;Typing;Tumor metastasis

075000 河北北方学院第一临床医学院

10.3969/j.issn.1001-5930.2017.05.013

R739.81

A

1001-5930(2017)05-0738-04

2016-07-08

2017-03-12)